24
digunakan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Komposisi Media.
Konsentrasi dipekatkan 2 kali
3.3. Prosedur Kerja
3.3.1. Persiapan dan Sterilisasi Alat
Alat–alat gelas yang akan digunakan terlebih dahulu dibersihkan, lalu disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121
o
C pada tekanan 1 atm selama 15 menit. Peralatan yang tidak tahan panas disterilkan dengan menggunakan alkohol
70 Waluyo, 2008.
3.3.2. Persiapan Serbuk Batubara
Batubara asal Sumatera Selatan digerus dengan mortar secara aseptik di dalam LAFC kemudian disaring menggunakan penyaring dengan ukuran 100
mesh dan diayak. Sampel batubara yang berhasil tersaring ditimbang masing- masing 25 g sebanyak empat kali. Batubara ditempatkan ke dalam petri yang
sebelumnya dilapisi alumunium foil. Dua petri berisi batubara yang disterilisasi Nama
Media Agar
g MSS
ml PDA
ml TSB
ml Ekstra
k Ragi g
Sukrosa g
Serbuk batubar
a g Keterangan
MSS+ -
500 -
- 0,05
0,5 25
Biosolubilisas i
PDMA -
500 500
- -
- 1
Peremajaan kultur,
enumerasi fungi,
Kolonisasi TSMA
15 500
- 500
- -
1 Enumerasi
bakteri
25
dalam autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 C dan dua petri berikutnya berisi
batubara yang dibiarkan tanpa proses sterilisasi.
3.3.3. Pembuatan Media Minimal Salt Solution MSS
Pembuatan media MSS dilakukan dengan cara menimbang bahan seperti 0,52 g MgSO
4
.7H
2
O; 0,003 g ZnSO
4
.7H
2
O; 5 g KH
2
PO
4
; 0,005 g FeSO
4
; 1 g NH
4
SO
4
Silva dkk., 2007, ditambahkan 0,003 g MnCl
2
Sugoro dkk., 2011 sebagai modifikasi komposisi media dengan asumsi keberadaan enzim mangan
peroksidase setelah itu ditera dengan air akuades hingga 1 liter, kemudian dilarutkan sampai homogen. Media MSS dibuat dalam 2 liter untuk media
perlakuan. Media MSS kemudian ditempatkan masing-masing 500 ml ke dalam empat Erlenmeyer berbeda, ditambahkan dengan sukrosa 0,1 0,5 g dan ekstrak
ragi 0,01 0,05 g. Campuran dihomogenkan kemudian disterilisasi selama 15 menit dalam suhu 121
C.
3.3.4. Pembuatan Media Potato Dextrose Mineral Agar PDMA
Media PDMA dibuat dengan menimbang PDA sebanyak 39 g
dilarutkan dengan akuades 500 ml, media ini dipekatkan dua kali. Dipersiapkan
Erlenmeyer yang berbeda untuk dibuat media MSS tanpa sukrosa dan ekstrak ragi sebanyak 500 ml kemudian ditambahkan 0,1 batubara dan dihomogenkan.
Media PDA dan MSS tanpa sukrosa dan ekstrak ragi + batubara, disteril di dalam
autoklaf selama 15 menit dalam suhu 121 C. Setelah selesai disterilisasi, kedua
26
media itu dicampur dalam satu Erlenmeyer dihomogenkan kemudian dengan segera dituang ke dalam cawan petri steril.
3.3.5. Media Pembuatan Media Trypticase Soy Mineral Agar TSMA
