Kesimpulan Saran KESIMPULAN DAN SARAN

62 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Dari hasil penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa: 1. Teknik freezing dan suhu penyimpanan berpengaruh terhadap potensi rotavirus di dalam sediaan kandidat formulasi vaksin ini pada waktu penyimpanan 42, 60, 90, dan 120 hari. 2. Semua desain kombinasi antara teknik freezing freezing suhu -70 o C, freezing suhu -152 o C, dan freezing menggunakan nitrogen cair dengan suhu penyimpanan suhu 2 – 8 o C, -20 o C, dan -70 o C yang digunakan pada penelitian ini mampu mempertahankan stabilitas potensi produk kandidat vaksin rotavirus selama waktu penyimpanan 120 hari. 3. Kandidat vaksin rotavirus yang dibekukan menggunakan teknik freezing suhu -70 o C dan teknik freezing menggunakan nitrogen cair memiliki hasil potensi yang baik ditinjau dari viabilitas rotavirus. Sedangkan teknik freezing suhu -152 o C merupakan teknik freezing yang menghasilkan nilai potensi rotavirus paling rendah diantara kedua teknik freezing yang lain. 4. Dalam hal metode penyimpanan, perlakuan penyimpanan pada suhu -20 o C dan suhu -70 o C adalah metode penyimpanan yang baik untuk menjaga stabilitas kandidat vaksin rotavirus ini. Sedangkan suhu penyimpanan 2 – 8 o C merupakan metode penyimpanan yang menghasilkan nilai potensi rotavirus paling rendah dibandingkan dengan metode penyimpanan pada suhu yang lain. 5. Kombinasi terbaik dari teknik freezing dan suhu penyimpanan kandidat vaksin rotavirus ini adalah teknik freezing menggunakan nitrogen cair atau teknik freezing suhu -70 o C dengan suhu penyimpanan vaksin tersebut pada -20 o C atau -70 o C.

5.2 Saran

Secara manufaktural, proses produksi sediaan kandidat vaksin rotavirus dengan teknik freezing menggunakan nitrogen cair skala besar dapat mungkin 63 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta dilaksanakan dengan baik, namun teknik ini tidak efektif dan efisien digunakan karena pada teknik freezing ini penggunaannya berhubungan dengan nitrogen cair yang cukup berbahaya dan perlu menggunakan alat pelindung diri. Kemudian, bila melihat dari sisi distribusi dan penyimpanan vaksin di rumah sakit atau lembaga kesehatan lainnya ketika kandidat formulasi vaksin rotavirus ini diproduksi, suhu penyimpanan -70 o C akan sangat merepotkan dan dapat memakan biaya yang tidak sedikit dalam penyediaan freezer untuk penyimpanan. Atas dasar itulah, disarankan kombinasi teknik freezing dan suhu penyimpanan dari sediaan kandidat vaksin rotavirus ini adalah teknik freezing menggunakan freezer suhu -70 o C dengan suhu penyimpanan vaksin tersebut pada suhu 2 – 8 o C, mengingat teknik freezing -70 o C dengan teknik freezing menggunakan nitrogen cair memiliki perbedaan yang tidak signifikan dan suhu penyimpanan 2 – 8 o C dengan suhu penyimpanan -70 o C walaupun memiliki perbedaan yang signifikan, namun suhu penyimpanan 2 – 8 o C masih dapat mempertahankan stabilitas rotavirus dalam vaksin. Suhu 2 – 8 o C merupakan suhu penyimpanan yang efektif dan efisien saat proses distribusi karena hanya membutuhkan cool box dalam proses penyimpanannya. Perlu dilakukan penelitian lanjutan terkait kombinasi teknik freezing dan suhu penyimpanan tersebut dengan waktu penyimpanan yang lebih lama untuk memperoleh hasil data stabilitas potensi yang lebih baik. 64 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta DAFTAR PUSTAKA Allison, S. D., et al. 1998. Effect of Drying Methods and Additives on Structure and Function of Actin: Mechanism of Dehydration-Induced Damage and Its Inhibiton. Biochemistry and Biophysics Vol. 358 BB980832, pp. 171- 181. Anonim. 1995. Farmakope Indonesia, Edisi IV. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Angel, J., Franco, M. A., Greenberg. H. B. 2007. Rotavirus Vaccines: Recent Developments and Future Considerations. Nature Reviews Microbiology 1692. Vol. 5. Athmanathan, S., et al. 2002. Comparison of an Immortalized Human Corneal Epithelial Cell Line with Vero Cells in the Isolation of Herpes simplex Virus-1 for the Laboratory Diagnosis of Herpes simplex keratitis. BMC Opthalmology Vol. 2 Issue 1, 10.11861471-2415-2-3 Baratawidjaja, K. G. dan Rengganis, I. 2010. Imunologi Dasar Edisi IX Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta: Balai Penerbit, FKUI. Bauman, R. W. 2012. Microbiology With Diseases by Body System 3 rd Edition. San Fransisco: Perason Education, Inc., p. 382-401. Bolen, D.W. 2001. Protein Stabilization by Naturally Occurring Osmolytes, Protein Structure, Stability, and Folding Edited by Kenneth P. Murphy. Humana Press Chapter 2 Vol 168. Brooks, G. F., et al., 2007. Medical Microbiology, 24 th Edition. Mc Graw Hill: p. 501-6. Chen, D., Kristensen, D. 2009. Opportunities and Challenges of Developing Thermostable Vaccines. Expert Rev. Vaccines 85, 547-557. Clemens, J., et al. 1999. Public Health Considerations for the Introduction of New Rotavirus Vaccines for Infants: A Case Study of Tetravalent Rhesus Rotavirus-based Reassortant Vaccine. Epidemiological Reviews Vol. 21 No.1 p. 24-42. 65 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Cortese, M. M. dan Parashar U. D. 2009. Prevention of Rotavirus Gastroenteritis Among Infants and Children. Atlanta: Morbidity and Mortality Weekly Report Vol. 58 No RR-2. Dennehy, P. H. 2008. Rotavirus Vaccines: an Overview. Clinical Microbiology Review, Jan. 2008, p. 198-208. Desselberger, U. 2000. Pathogenesis and Animal Models In. Methods Molecular Medicine, Rotaviruses Methods and Protocols edited by Gray, J. dan Desselberger, U. NJ: Humana Press Vol. 34. Dietz V, Galazka A, van Loon F, Cochi S. 1997. Factors Affecting the Immunogenicity and Potency of Tetanus Toxoid: Implications for the Elimination of Neonatal and Non-neonatal Tetanus as Public Health Problems. Bull World Health Organ 1997; 75: 81-93 pmid: 9141753 . Food Review Indonesia. 2007. Teknologi Pembekuan Pangan. Food Review IndonesiaVol. IINo.7Juli 2007. Freshney R. I. 2005. Culture of Animal Cells, A Manual of Basic Technique. A John Wiley Sons, Inc., Publication. Galazka, A., Milstien, J., Zaffran, M. 1998. Thermostability of Vaccines. Geneva: WHO; WHOGPV98.07. p. 1-60. Glass, et al. 2006. Rotavirus Vaccine: Current Prospect and Future Challenges. Atlanta: Lancet 2006; Vol. 368, p. 323-332. Hyser, J.M. dan Estes, M. K. 2008. Rotavirus Vaccines and Pathogenesis: 2008. Houston: Curr Opin Gastroenterol. 2009 January ; 251: 36 –43. Hsiang, Ling Huang, et al. 2010. Trypsin-induced Proteome Alteration During Cell Subculture in Mammalian Cells. Journal of Biomedical Science. http:www.jbiomedsci.comcontent17136 . Huynh-Ba, Kim. 2009. Handbook of Stability Testing in Pharmaceutical Development. Springer Science Business Media, LLC. Jennette, J. C. dan Wick, M. R. 1988. Immunohischemical Techniques In. Immunohistology in Diagnostic Pathology. CRC Press. Boca Raton, FL. USA. p. 1-29. Joint Committee on Vaccination and Immunisation JCVI. 2008. Rotavirus Vaccine. 66 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta http:www.advisorybodies.doh.gov.ukjcviRotavirus_Subgroup_Minutes _17_March 2008.pdf Kang, G. 2006. Rotavirus Vaccines. Indian Journal of Medical Microbiology, 24 4: 252-7. Kayne, S. B. dan Jepson, M. H. 2004. Veterinary Pharmacy. London: The Pharmaceutical Press. Kobayashi, N., et al. 2007. Diversity of G-type and P-type of Human and Animal Rotaviruses and It’s Genetic Background. A. Mendez-Vilas Ed.: Communicating Current Research and Educational Topics in Applied Microbiology Lund, Walter. 1994. The Pharmaceutical Codex 12 th Edition. London: The Pharmaceutical Press. Mansoor O, Pillans PI. 1997. Vaccine Adverse Events Reported in New Zealand 1990-95. N Z Med J 1997; 110: 270-2 pmid: 9269289 Mather, Jennie P. 1998. Making Informed Choices: Medium, Serum, and Serum- free Medium. In: B. David, ed. Animal Cell Culture Methods. USA: Academic Press, p. 20-21. Mazur, Peter. 1984. Freezing of Living Cells: Mechanisms and Implications. American Physiological Society Cell Physiol.16, p. C125 – C142. Mazur, Peter. 2004. Principles of Cryobiology, in: Life in The Frozen State, Edited by Barry J. Fuller, et al. London: CRC Press. McGuire, Jason dan Kupiec, T. C. 2007. Quality-control Analytical Methods: The Quality of Sterility Testing. International Journal of Pharmaceutical Compounding Vol. 11 No.1 JanuaryFebruary. McMullan, Nial. 2009. Molecular Biology and Biotechnology Edited by John M. Walker and Ralph Rapley, 5 th Edition. Cambridge: The Royal Society of Chemistry p. 338-340. Milstien J, Kartoglu U, Zaffran M. 2006. Temperature Sensitivity of Vaccines. Geneva: World Health Organization Muldrew, K., et al. The Water to Ice Transition: Implications of Living Cells, in: Life in The Frozen State, Edited by Barry J. Fuller, et al. London: CRC Press. 67 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta National Centre for Immunisation Research and Surveillance NCIRS. 2009. Vaccine Components. NCIRS Fact sheet: December 2009. NPIGuide. 2002. Vaccines and How They Work. USA: NPI Reference Guide on Vaccines and Vaccine Safety, p. 5-10. Parashar U. D., et al. 1998. Rotavirus. Atlanta: Centers for Disease Control and Prevention Vol. 4, No. 4. PATH’s Rotavirus Vaccine Program-An Accelerated Development and Introduction Plan ADIP supported by the GAVI Alliance. 2006. The Development of Live, Attenuated Rotavirus Vaccines. Seattle: Program for Appropriate Technology in Health. Patton, J. T., et al. 2000. Virus Replication In. Methods Molecular Medicine, Rotaviruses Methods and Protocols edited by Gray, J. dan Desselberger, U. NJ: Humana Press Vol. 34. Pikal, M. J. 1990. Freeze-drying of Proteins, Part II: Formulation Selection. Biopharm, p. 26-30. Procedings of the Sixth International Rotavirus Symposium. 2004. Rotavirus and Rotavirus Vaccines. Mexico City. Radji, M., et al. 2010. Molecular Characterization of Human Group A Rotavirus from Stool Samples in Young Children with Diarrhea in Indonesia. Southeast Asian J Trop Med Public Health, Vol. 41 No. 2 March 2010. Robinson, J. P., Sturgis J., dan Kumar, G. L. 2009. Chapter 10: Immunofluorescence, Immunohistochemical Staining Methods Fifth Edition. California: Dako North America. Saif, L. J. dan Ward, L. A. 2000. Pathogenesis and Animal Models In. Methods Molecular Medicine, Rotaviruses Methods and Protocols edited by Gray, J. dan Desselberger, U. NJ: Humana Press Vol. 34. Soedijar, Ida L. dan Dharma, Dewa M. N. 2005. Instruksi Kerja Pengujian Virologi, Review Rabies. Balai Besar Pengujian Mutu dan Sertifikasi Obat Hewan BBPMSOH. Street, T.O., Bolen, D.W., Rose, G.D. 2006. A Molecular Mechanism for Osmolyte-Induced Protein Stability. PNAS 13997-4002. 68 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Sultana, Yashmin. 2007. Pharmaceutical Microbiology and Biotechnology, Sterilization Methods and Principles. New Delhi-110062. Waide, Ainley, and Waller, Paul J. 1994. Handbook of Pharmaseutical Exipients HOPE. 6th edition. Washington : American Pharmaseutical Association. Wang, Wei. 2000. Lyophilization and Development of Solid Protein Pharmaceutical. International Journal of Pharmaceutical 203, p. 1-60. Ward, Richard L., McNeal M. M., dan Steele A. D. 2008. Why does the World Need Another Rotavirus Vaccine?. Therapeutics and Clinical Risk Management 2008: 41 p. 49-63. Willemer, H. 1992. Measurements of Temperature, Ice Evaporation Rates and Residual Moisture Contents in Freeze-drying. Dev. Biol. Stand. 74. p. 123-34. Wolff, Lena. 2009. Disertasi: Stabilisation and Characterisation of Protein and Vaccine Formulation. Braunschweig, German: Universität Carolo- Wilhelmina. World Health Organization WHO. 1980. The Effects of Freezing on the Appearance, Potency, and Toxicity of Adsorbed and Unadsorbed DTP Vaccines. Wkly Epidemiol Rec 1980; 55: 385-92. World Health Organization WHO. 2006. Vaccines and Biologicals, Temperature Sensitivity of Vaccines. Geneva, Switzerland. 69 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta LAMPIRAN Lampiran 1. Data jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada tiap perlakuan teknik freezing dan suhu penyimpanan selama 30, 60, 90, dan 120 hari Hari ke-42 : Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -70 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 1095 - B 1650 - 2-8 o C C 25 - D 67 - -20 o C E 34 - F 53 - -70 o C G 47 - H 36 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -152 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 835 - B 1895 - 2-8 o C C 54 - D 67 - -20 o C E 73 - F 91 - -70 o C G 91 - H 102 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing menggunakan nitrogen cair Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 1925 - B 1665 - 2-8 o C C 77 - D 81 - -20 o C E 39 - F 40 - -70 o C G 79 - H 51 - 70 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Hari ke-60 : Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -70 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 1270 - B 1205 - 2-8 o C C 69 - D 55 - -20 o C E 66 - F 89 - -70 o C G 47 - H 111 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -152 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 1290 - B 1740 - 2-8 o C C 52 - D 61 - -20 o C E 39 - F 57 - -70 o C G 40 - H 46 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing menggunakan nitrogen cair Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 1335 - B 2070 - 2-8 o C C 91 - D 57 - -20 o C E 36 - F 68 - -70 o C G 111 - H 91 - 71 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Hari ke-90 : Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -70 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 2190 - B 1295 - 2-8 o C C 48 - D 72 - -20 o C E 68 - F 82 - -70 o C G 54 - H 52 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -152 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 980 - B 1185 - 2-8 o C C 19 - D 33 - -20 o C E 39 - F 25 - -70 o C G 35 - H 39 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing menggunakan nitrogen cair Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 2165 - B 2150 - 2-8 o C C 47 - D 46 - -20 o C E 72 - F 94 - -70 o C G 61 - H 95 - 72 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Hari ke-120 : Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -70 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 2190 - B 1190 - 2-8 o C C 34 - D 63 - -20 o C E 37 - F 100 - -70 o C G 32 - H 61 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing -152 o C Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 1765 - B 1745 - 2-8 o C C 40 - D 37 - -20 o C E 48 - F 27 - -70 o C G 36 - H 53 - Jumlah sel MA104 yang ber-fluorescence pada teknik freezing menggunakan nitrogen cair Keterangan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Kontrol + Rotavirus A 2190 - B 2045 - 2-8 o C C 39 - D 90 - -20 o C E 90 - F 70 - -70 o C G 69 - H 81 - 73 UIN Syarif Hidayatullah Jakarta Lampiran 2. Contoh perhitungan yang digunakan pada penelitian

a. Persamaan 3.1