20 4. Infus
Infundasi adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas air bejana infus tercelup dalam penangas mendidih, temperatur terukur 96 -
98
o
C selama waktu tertentu 15 - 20 menit. 5. Dekok
Dekoktasi adalah infus pada waktu yang lebih lama ≥
30 menit dan temperatur sampai titik didih air Depkes, 2000.
2.4 Fraksinasi
Setelah ekstrak dibuat dengan cara metode ekstraksi yang sesuai dan aktivitasnya telah terbukti dalam uji hayati misalnya uji antibakteri, langkah
selanjutnya adalah melakukan fraksinasi terhadap ekstrak dengan menggunakan metode pemisahan sehingga komponen bioaktif yang dimurnikan dapat diisolasi.
Metode pemisahan yang mungkin paling sederhana adalah partisi, yang banyak digunakan sebagai tahap awal pemurnian ekstrak. Partisi menggunakan
dua pelarut tak bercampur yang ditambahkan ke dalam ekstrak tersebut, hal ini dapat dilakukan secara terus–menerus dengan menggunakan dua pelarut tak
bercampur yang kepolarannya meningkat. Partisi biasanya melalui dua tahap: 1 airpetroleum eter ringan n-heksana untuk menghasilkan fraksi non polar di
lapisan organik; 2 airdiklorometan atau airkloroform atau airetilasetat untuk membuat fraksi agak polar di lapisan organik Heinrich, et al., 2005.
2.5 Kromatografi
Kromatografi adalah suatu metode pemisahan berdasarkan proses migrasi dari komponen-komponen senyawa di antara dua fase yaitu fase diam dapat
Universitas Sumatera Utara
21 berupa zat cair atau zat padat dan fase gerak dapat berupa gas atau zat cair. Fase
gerak membawa zat terlarut melalui media sehingga terpisah dari zat terlarut lainnya yang terelusi lebih awal atau lebih akhir. Umumnya zat terlarut dibawa
melewati media pemisah oleh aliran suatu pelarut berbentuk cairan atau gas yang disebut eluen. Fase diam dapat bertindak melarutkan zat terlarut sehingga terjadi
partisi antara fase diam dan fase gerak. Dalam proses ini suatu lapisan cairan pada penyangga yang inert berfungsi sebagai fase diam Depkes, 1995.
Cara-cara kromatografi dapat digolongkan sesuai dengan sifat-sifat dari fase diam, yang dapat berupa zat padat atau zat cair. Jika fase diam berupa zat
padat maka cara tersebut dikenal sebagai kromatografi serapan, jika berupa zat cair dikenal sebagai kromatografi partisi Depkes, 1995; Sastrohamidjojo, 1985.
Pemisahan dan pemurnian kandungan kimia tumbuhan terutama dilakukan dengan menggunakan salah satu dari lima teknik kromatografi atau gabungan
teknik tersebut. Kelima teknik kromatografi itu adalah: kromatografi kolom KK, kromatografi kertas KKt, kromatografi lapis tipis KLT, kromatografi gas cair
KGC, dan kromatografi cair kinerja tinggi KCKT. Pemilihan teknik kromatografi sebagian bergantung pada sifat kelarutan dan keatsirian senyawa
yang akan dipisah Harborne, 1987.
2.5.1 Kromatografi lapis tipis
Kromatografi lapis tipis merupakan metode pemisahan campuran analit dengan mengembangkan analit melalui suatu lempeng kromatografi lalu melihat
komponenanalit yang terpisah dengan penyemprotan atau pewarnaan Gandjar dan Rohman, 2012.
Fase diam yang terdiri atas bahan berbutir-butir dilapiskan pada
Universitas Sumatera Utara
22 penyangga berupa plat, gelas, logam atau lapisan yang cocok. Campuran yang
akan dipisah, berupa larutan ditotolkan berupa bercak ataupun pita, setelah itu plat atau lapisan dimasukkan ke dalam bejana tertutup rapat yang berisi larutan
pengembang yang cocok fase gerak, pemisahan terjadi selama pengembangan, selanjutnya senyawa yang tidak berwarna harus ditampakkan Stahl, 1985.
Pendeteksian bercak hasil pemisahan dapat dilakukan dengan beberapa cara. Senyawa tak berwarna cara yang paling sederhana adalah dilakukan
pengamatan dengan sinar ultraviolet. Beberapa senyawa organik berfluorosensi jika disinari dengan sinar ultraviolet gelombang pendek 254 nm atau gelombang
panjang 366 nm. Jika dengan cara itu senyawa tidak dapat dideteksi maka harus disemprot dengan pereaksi yang membuat bercak tersebut tampak yaitu pertama
tanpa pemanasan, kemudian bila perlu dengan pemanasan Gritter, et al., 1991; Stahl, 1985.
Kromatografi lapis tipis dapat dipakai untuk dua tujuan Gritter, et al., 1991 yaitu:
1. sebagai metode untuk mencapai hasil kualitatif analitik dan kuantitatif preparatif.
2. untuk mencari sistem pelarut yang akan dipakai dalam kromatografi kolom.
a. Fase diam lapisan penyerap
Fase diam berupa lapisan tipis yang terdiri atas bahan padat yang dilapiskan pada permukaan penyangga datar yang biasanya terbuat dari kaca,
plastik atau logam. Lapisan fase diam melekat pada permukaan dengan bantuan bahan pengikat, biasanya kalsium sulfat atau amilum Gritter, et al., 1991.
Universitas Sumatera Utara
23 Semakin kecil ukuran rata-rata partikel fase diam dan semakin sempit
kisaran ukuran fase diam, maka semakin baik kinerja KLT dalam hal efisiensinya dan resolusinya. Penyerap yang paling sering digunakan adalah silika gel dan
serbuk selulosa Gandjar dan Rohman, 2012. Pada kromatografi lapis tipis lapisan fase diam harus sesedikit mungkin
mengandung air, karena air akan menempati semua titik penyerapan sehingga tidak aka nada senyawa yang melekat. Oleh karena itu, sebelum digunakan plat
kromatografi lapis tipis perlu diaktifkan dengan pemanasan pada 110
o
C selama 30 menit Gritter, et al., 1991; Stahl, 1985
b. Fase gerak pelarut pengembang
Fase gerak adalah medium angkut yang terdiri atas satu atau campuran beberapa pelarut, jika diperlukan sistem pelarut multi komponen, harus berupa
suatu campuran sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimum tiga komponen Stahl, 1985.
Pemisahan pada KLT dikendalikan oleh rasio distribusi komponen dalam sistem fase diampenyerap dan fase gerak tertentu. Profil pemisahan pada KLT
dapat dimodifikasi dengan mengubah rasio distribusi dengan mengubah komposisi fase gerak dengan memperhatikan polaritas Gandjar dan Rohman,
2012.
c. Harga Rf
