Kerangka Teori TINJAUAN PUSTAKA

17

3.4.2 Bahan Penelitian

Simplisia, metanol, DPPH, air aquades dan Vitamin C

3.5 Cara Kerja Penelitian

3.5.1 Penyiapan Sampel atau Pembuatan Simplisia Nabati

Daun jeruk nipis basah diambil dari pekarangan rumah daerah Jakarta Selatan sudah dideterminasi kemudian dikeringkan dengan cara dijemur di bawah sinar matahari. Daun yang telah kering diblender menjadi serbuk daun jeruk nipis. 28

3.5.2 Pembuatan ekstrak daun jeruk nipis

Pembuatan ekstrak daun jeruk nipis Citrus aurantifolia dilakukan oleh peneliti di laboratorium biologi dengan menggunakan metode maserasi dan remaserasi yaitu menggunakan pelarut dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur ruangan. 28 Setelah dilakukan maserasi selama 24 jam dilakukan penyaringan untuk memisahkan filtrat dan residu. Filtrat kemudian dilakukan evaporasi penguapan menggunakan rotator evaporator pada suhu 37 o C untuk memisahkan pelarut metanol sehingga didapatkan ektrak kental daun jeruk nipis. Kemudian residu direndam lagi dalam pelarut metanol untuk dilakukan remaserasi. 13

3.5.3 Pembuatan Larutan

a Pemb uatan Larutan DPPH 634 μM 9  Timbang DPPH sebanyak 0,0015 gram  Larutkan dalam 6 mL metanol  Larutan dikocok hingga homogen kemudian dimasukan ke dalam botol gelap  Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis untuk memperoleh panjang gelombang maksimum. b Pembuatan Larutan kontrol  Dalam 1800 μL metanol ditambahkan 200 μL larutan DPPH  Larutan dikocok hingga homogen. 18 c Pembuatan Larutan uji 1. Larutan Induk 1000 ppm 10 mg ekstrak daun jeruk nipis dilarutkan kedalam 10 mL metanol= 10mg10 mL = 1 mgmL = 1000 μgmL = 1000 ppm 2. Larutan Seri a 100 ppm 200 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. b 75 ppm 150 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. c 50 ppm 100 μL dari larutan induk ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. d 25 ppm 50 μL dari larutan 1000 ppm ditambahkan metanol sampai volumenya 1800 μL. Kemudian tambahkan 200 μL larutan DPPH. a. Pembuatan Larutan Kontrol Positif Vitamin C 29 Vitamin C berupa serbuk putih didapatkan dari Laboratorium Kimia Obat Farmasi FKIK UIN Syarif Hidayatullah. Vitamin C yang digunakan merupakan produk perusahaan VWR. 1. Larutan Induk 100 ppm 1 mg Vitamin C murni dilarutkan dalam 10 mL metanol = 0,1 mgmL = 100 μgml ppm. 2. Larutan seri 1,2,3,4 ppm a 1 ppm