29
menggunakan propilen glikol, disebut campuran 2. Campuran 1 dicampur dengan campuran 2 dan ditambahan dengan bahan uji yang telah dilarutkan
dalam akuades, lalu dilakukan proses mixing menggunakan mixer. Proses mixing
ini dilakukan selama 5 menit dengan kecepatan mixer skala 2.
5. Uji iritasi menggunakan slug irritation test
a. Pengumpulan dan determinasi siput
Siput diperoleh dari wilayah Perumda, Ungaran-Kabupaten Semarang. Determinasi dilakukan dengan mencocokan karakteristik siput dengan
literatur. Untuk klasifikasi spesies siput, dilakukan pembedahan untuk mengetahui bentuk alat kelamin siput sebagai pembeda yang khas. Siput
yang digunakan untuk prosedur uji adalah siput dari spesies Laevicaulis alte FéR yang memiliki berat antara 3-4 g.
b. Slug irritation test
Uji iritasi menggunakan slug irritation test diadaptasi dari prosedur uji Slug Mucosal Test
Adriaens cit., Dhondt, 2005. Uji iritasi dilakukan dengan menempatkan siput pada bahan uji dalam periode waktu 60 menit
dan diukur jumlah lendir yang diproduksi. Masing-masing siput dan cawan petri ditimbang. Sebanyak 1 g bahan uji dimasukkan ke dalam cawan petri,
kemudian siput diletakkan di atas bahan uji dan ditunggu selama 60 menit. Siput dipindah ke cawan petri baru, ditambahkan 1 mL PBS di dekat bagian
bawah tubuh siput dan didiamkan selama 60 menit. Setelah 60 menit, cairan PBS yang telah kontak dengan tubuh siput ditampung dalam tabung
microtube .
30
c. Pengukuran kadar albumin
Sebanyak 8 μL PBS hasil uji diambil dan ditambahkan dengan 800 μL reagen albumin Tabel III, d
itambahkan 3200 μL akuades, dan absorbansi senyawa dibaca pada panjang gelombang 630 nm.
d. Pengukuran LDH
Dalam labu ukur 5 mL dimasukkan 20 μL PBS hasil uji, ditambahkan dengan
800 μL reagen 1 LDH Tabel II dan 200 μL reagen 2 LDH Tabel II, ad sampai tanda batas 5 mL menggunakan NaCl 0,9, didiamkan
selama 1 menit, kemudian diukur absorbansinya. Pengukuran absorbansi dilakukan kembali pada waktu 2, 3, dan 4 menit, absorbansi senyawa dibaca
pada panjang gelombang 340 nm. e.
Pengukuran ALP Dalam labu ukur 5
mL dimasukkan 20 μL PBS hasil uji, ditambahkan dengan
800 μL reagen 1 ALP Tabel I dan 200 μL reagen 2 ALP Tabel I, ad sampai tanda batas 5 mL menggunakan akuades, didiamkan selama 3
menit, kemudian diukur absorbansinya. Pengukuran absorbansi dilakukan kembali pada waktu 4, 5, dan 6 menit, absorbansi senyawa dibaca pada
panjang gelombang 405 nm.
31
F. Analisis Hasil
