Ekstrak etanol hasil pengendapan selanjut disaring dan maserat
diuapkan menggunakan vaccuum rotary evaporator. Dalam penguapan larutan penyari digunakan vaccuum rotary evaporator dengan tujuan untuk menghindari
kontak dengan panas berlebihan yang dapat merusak sebagian komponen senyawa kimia yang terkandung didalamnya. Tekanan rendah, etanol akan menguap pada suhu
dibawah titih didih normalnya. Penguapan dilakukan sampai tidak menetes lagi
pelarut etanol dalam vaccuum rotary evaporator, diperoleh ekstrak kental
diasumsikan tidak terdapat lagi pelarut etanol. Hasil dari penguapan ini diperoleh ekstrak etanolik kental biji trembesi, kemudian dihitung persen rendemen. Hal ini
bertujuan untuk mengetahui perbandingan berat ekstrak yang tersari dengan berat bahan mula-mula. Hasil proses maserasi dari serbuk kering biji trembesi, diperoleh
rendemen ekstrak sebesar 13,9885 g.
D. Hasil Fraksinasi
Dari hasil ekstrak dilakukan partisi ekstrak etanol dengan beberapa pelarut. Proses partisi sangat diperlukan mengingat senyawa aktif dalam tanaman sangat
bervariasi struktur sesuai dengan golongan dan subsituennya. Perbedaan golongan dan subsituen inilah yang menyebabkan perbedaan polaritas. Akibatnya kelarutan
senyawa aktif dalam tanaman sulit ditentukan kelarutannya secara umum dan diperlukaan pelarut bertingkat polaritasnya untuk menekstrasksi senyawa aktif dalam
tanaman. Partisi bertingkat akan memisahkan komponen aktif ke dalam fraksi non polar, fraksi semi polar dan fraksi polar Harborne, 1987.
Dalam penelitian ini, fraksi yang diteliti adalah fraksi air. Sebelum fraksi, ekstrak etanol kental dilarutkan dengan air hangat agar mudah difraksi. Fraksi diawali
dengan pencucian ekstrak dengan washbensin 1:1 untuk mengekstraksi senyawa non polar seperti lemak, minyak, vitamin dan aglikon flavonoid yang non polar misalnya
aglikon isofalvon dan termetoksilasi Harborne,1987. Kemudian wasbensin dan
ekstrak menggunakan prinsip ekstraksi cair-cair. Ekstraksi cair-cair prinsip like dissolve like
sehingga zat yang nonpolar akan terbawa dalam pelarut nonpolar dan pelarut polar akan terbawa dalam pelarut polar. Fraksi air dan fraksi washbensin
akan terpisah dalam corong pisah itu terjadi karena perbedaan berat jenis antar cairan. Dimana washbensin memiliki berat jenis lebih kecil dibandingkan air,
sehingga akan berada diatas permukaan air. Fase air kemudian diambil dan fase washbensin dibuang, dan fase air siap difraksi dengan etil asetat.
Dengan menggunakan proses yang sama seperti pada proses diatas kemudian difraksinasi kembali dengan etil asetat. Fraksi air dan etil asetat dicampur
dengan corong pisah. Etil asetat berada diatas permukaan air karena berat jenis yang lebih kecil. Senyawa polar yang larut air seperti antosianin, fenolik dan glikosida
akan terbawa dalam fase air sedangkan senyawa yang semipolar larut dalam etil asetat seperti isoflavon, flavonon dan flonol. Fraksi air yang dihasilkan berupa
cairan. .Fraksi air yang diperoleh diuapkan dengan vacuum rotary evaporator. Fraksi
kental yang diperoleh ditimbang dan diperoleh 0,4534 g.
E. Uji Pendahuluan
