Tempat dan Waktu Penelitian Alat-Alat Analisis Kualitatif

19

BAB III METODE PENELITIAN

3.1 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kimia Farmasi Kualitatif dan Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara pada bulan September 2013 – Desember 2013. 3.2 Bahan-Bahan 3.2.1 Sampel Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah Lipstik yang beredar di Pasar Ramai Medan yaitulipstik I, lipstik II dan lipstik III.

3.2.2 Pereaksi

Semua bahan yang digunakan dalam penelitian ini berkualitas pro analisa keluaran E. Merck yaituasam nitrat 65 bv, standar timbal 1000 mcgml, dithizon 99 bv, ammonium hidroksida 25 bv, kloroform dan akuades Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi USU.

3.3 Alat-Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah Spektrofotometer Serapan Atom Hitachi Zeeman-2000 lengkap dengan lampu Pb , TanurStuart,KertasWhatman No.42, Timbangan analitikShimadzu,Botol kaca gelap, Kurs porselen, Cawan penguap, Spatula, Pipet tetes, Hot plate shott, Alat- alat gelas Pyrex dan Oberoi 3.4 Pembuatan Pereaksi 3.4.1 Larutan HNO 3

1:1 vv

Universitas Sumatera Utara 20 Sebanyak 500 ml larutan HNO 3 65 vv diencerkan dengan 500 ml akuabides Ditjen POM, 1979. 3.4.2 Larutan HNO 3 1 N Larutan HNO 3 1 N dibuat dengan cara mengencerkan 69 ml HNO 3 65 vv diencerkan dengan air suling 1000 mlDitjen POM,1979. 3.4.3 Larutan Dithizon 0,005 bv Larutan dithizon 0,005 bv dibuat dengan caradithizon sebanyak 5 mg dilarutkan dalam 100 ml kloroform Ditjen POM,1979.

3.4.4 Larutan NH4OH 1N

Larutan NH 4 OH 1 N dibuat dengan cara mengencerkan 7,4 ml NH 4 OH 25 bv diencerkan dengan air suling 100 ml Ditjen POM, 1995. 3.5 Prosedur Penelitian 3.5.1 Pengambilan Sampel Sampel yang digunakan adalah Lipstik yang beredar di Pasar Ramai Medan. Lipstik diambil secara purposif. Metode pengambilan sampel purposif ini ditentukan atas dasar pertimbangan bahwa sampel yang tidak terambil mempunyai karakteristik yang sama dengan sampel yang diteliti Sudjana, 2005.

3.5.2 Penyiapan Bahan

Sampel berupa sediaan lipstik dikeluarkan dari sediaannya,digerus sampai homogen kemudian sampel ditimbang masig-masing ± 5 gram dalam krus porselin yang telah diberi kode sampel. Perlakuan penimbangan dan penetapan kadar timbal dilakukan sebanyak 6 kali. 3.5.3 Proses Destruksi Kering Universitas Sumatera Utara 21 Masing-masing lipstik yang telah ditimbang sebanyak±5 gram dalam kurs porselen,diarangkan di atas hot plate dengan suhu 100 o Csampai mengarang, lalu diabukan di tanur, mula-mula pada temperatur 100 o C dan secara perlahan-lahan dinaikkan interval 25 o C setiap 5 menit sampai temperatur menjadi 500 o C dan pengabuan dilakukan selama 48 jam. Setelah itu dibiarkandingindi dalam desikator.Kemudian abu dilarutkan dalam 10 ml HNO 3 1:1 vv dan dipanaskan di atas hot plate dengan suhu 100 o C sampai kering, kemudian ditanur pada suhu 500 o C selama 1 jam Isaac, 1990.

3.5.4 Pembuatan Larutan Sampel

Hasil dekstruksi dilarutkan dalam 10 ml HNO 3 1:1 vv hingga larut sempurna, kemudian dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml dan kurs porselin dibilas dengan akuabides sebanyak 3 kali. Hasil pembilasan dimasukkan ke dalam labu tentukur. Setelah itu dicukupkan volumenya dengan akuabides hingga garis tanda. Kemudian disaring dengan kertas saring Whatman No.42 dengan membuang 2,5 ml larutan pertama hasil penyaringan untuk menjenuhkan kertas saring Isaac, 1990. Larutan ini digunakan untuk analisis kualitatif dan analisis kuantitatif timbal. 3.5.5 Pemeriksaan Kualitatif 3.5.5.1 Timbal Ke dalam tabung reaksi dimasukkan 5 ml larutan sampel, diatur pH = 8,5 dengan penambahan ammonium hidroksida 1N, ditambahkan 5 ml dithizon 0,005 bv, dikocok kuat, dibiarkan lapisan memisah. Terbentuk warna merah tua berarti sampel mengandung Pb Fries dan Getrost, 1977.Hasil dapat dilihat pada Lampiran 4, halaman 40. Universitas Sumatera Utara 22 3.5.6 Analisis Kuantitatif 3.5.6.1 Pembuatan Kurva Kalibrasi

3.5.6.1.1 Pembuatan Kurva Kalibrasi Timbal

Larutan standar timbal konsentrasi 1000 µgml dipipet sebanyak 1 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 100 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides konsentrasi 10 µgml. Larutan standar timbal 10 mcgml dipipet sebanyak 1 ml, dimasukkan kedalam labu tentukur 100 ml dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides konsentrasi 0,1 µgml. Larutan standar timbal konsentrasi 0,1 µgml dipipet sebanyak 5 ml, dimasukkan ke dalam labu tentukur 50 ml, ditambahkan 5 ml HNO 3 1 N dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides konsentrasi 0,01 µgml. Larutan untuk kurva kalibrasi timbal dibuat dengan memipet larutan standar timbal konsentrasi 0,01 µgml sebanyak 1,25; 2,5; 3,75; 5; dan 6,25 ml. Dimasukkan masing-masing ke dalam labu tentukur 25 ml, ditambahkan 2,5 ml HNO 3 1 N dan dicukupkan hingga garis tanda dengan akuabides larutan ini mengandung 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 dan 2,5 ngml dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 283,3 nm dengan graphite furnace. Gambar kurva dapat dilihat pada halaman 14, data hasil pengukuran absorbansi larutan standart timbal dan perhitungan persamaan garis regresi timbal dapat dilihat pada Lampiran 5, halaman 41- 43.

3.5.6.2 Penetapan Kadar Timbal Dalam Sampel

Larutan sampel hasil destruksi diukur absorbansinya dengan menggunakan Spektrofotometer Serapan Atom dengan graphite furnace pada panjang Universitas Sumatera Utara 23 gelombang 283,3 nm. Nilai absorbansi yang diperoleh harus berada dalam rentang nilai kurva kalibrasi larutan standar timbal.Konsentrasi timbal dalam sampel ditentukan berdasarkan persamaan garis regresi dari kurva kalibrasi. Menurut Gandjar dan Rohman 2007, Kadar logam timbal dalam sampel dapat dihitung dengan cara sebagai berikut: Kadar ngg = ������ � Keterangan: C = Konsentrasi logam dalam larutan sampel ngml V = Volume larutan sampel ml Fp = Faktor pengenceran W = Berat sampel g Hasil dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman 43 - 44. 3.5.7Penentuan Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi Menurut Harmita 2004, batas deteksi merupakan jumlah terkecil analit dalamsampel yang dapat di deteksi yang masih memberikan respon signifikan. Sebaliknya batas kuantitasi merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria cermat dan seksama. Batas deteksi dan batas kuantitasi ini dapat di hitung dengan rumus sebagai berikut: Simpangan baku = � ∑�−�� 2 �−2 Batas Deteksi LOD = 3 ��� ����� Batas Kuantitasi LOQ = 10 ��� ����� Hasil dapat dilihat pada Lampiran 9, halaman 49.

3.5.8 Uji Perolehan Kembali Recovery

Universitas Sumatera Utara 24 Uji perolehan kembali atau recovery dilakukan dengan metode penambahan larutan standar standard addition method. Dalam metode ini, kadar logam dalam sampel ditentukan terlebih dahulu, selanjutnya dilakukan penentuan kadar logam dalam sampel setelah penambahan larutan standar dengan konsentrasi tertentu Ermer, 2005. C A = n ditambahka yang ml rata - rata sampel Berat n ditambahka yang logam i Konsentras × 5,9952 = v g 5.004 gml 100 × µ V = 0.03 ml Larutan baku yang di tambahkan pada sampel yaitu sebanyak 0,3 ml konsentrasi 100 µgml untuk logam timbal. Sampel yang telah di timbang ± 5gram,ditambahkan 0,3 ml larutan baku timbal konsentrasi 100 µgml,kemudian dilanjutkan dengan prosedur dekstruksi kering seperti yang telah dilakukan sebelumnya. Prosedur pengukuran uji perolehan kembali dilakukan sama dengan prosedur penetapan kadar sampel. Menurut Harmita 2004, persen perolehan kembali dapat dihitung dengan rumus di bawah ini: Persen Perolehan Kembali = � �− � � � � ∗ � 100 Keterangan: C A = Kadar logam dalam sampel sebelum penambahan baku C F = Kadar logam dalam sampel setelah penambahan baku C A = Kadar larutan baku yang ditambahkan Hasil dapat dilihat pada Lampiran 10 dan 11, halaman 50- 51. 3.5.9Simpangan Baku Relatif Universitas Sumatera Utara 25 Keseksamaan atau presisi diukur sebagai simpangan baku relatif atau koefisien variasi. Keseksamaan atau presisi merupakan ukuran yang menunjukkan derajat kesesuaian antara hasil uji individual ketika suatu metode dilakukan secara berulang untuk sampel yang homogen. Nilai simpangan baku relatif yang memenuhi persyaratan menunjukkan adanya keseksamaan metode yang dilakukan. Menurut Harmita 2004, rumus untuk menghitung simpangan baku relatif adalah sebagai berikut: RSD = 100 × X SD Keterangan: − X = Kadar rata-rata sampel SD = Standar Deviasi RSD = Relative Standard Deviation Hasil dapat dilihat pada Lampiran 12, halaman 52 - 5.

3.5.10 Analisis Data Secara Statistik

Kadar timbal yang diperoleh dari hasil pengukuran masing-masing larutan sampel dianalisis secara statistik. Menurut Sudjana, 2005. standar deviasi dapat dihitung dengan menggunakan rumus: SD = 1 - n X - Xi 2 ∑ Keterangan : Xi = Kadar sampel − X = Kadar rata-rata sampel n = Jumlah perlakuan Untuk mencari t hitung digunakan rumus: Universitas Sumatera Utara 26 t hitung = n SD X Xi − dan untuk menentukan kadar di dalam sampel dengan interval kepercayaan 99, α = 0.01, dk = n-1, dapat digunakan rumus: Kadar : µ = X ± tα2, dk x SD√n Keterangan : − X = Kadar rata-rata sampel SD = Standar Deviasi dk = Derajat kebebasan dk = n-1 α = Interval kepercayaan n = Jumlah perlakuan Hasil dapat dilihat pada Lampiran 8, halaman 45 - 49.

3.5.11 Pengujian Beda Nilai Rata-rata

Pengujian beda nilai rata-rata antar sampel dilakukan dengan metode One Way ANOVA menggunakan perangkat lunak SPSS Statistical Package for the Social Sciences dengan taraf kepercayaan 99 untuk mengetahui apakah variasi ketiga populasi sama σ 1 =σ 2 atau ber beda σ 1 ≠ σ 2 . − H : σ 1 = σ 2 tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara nilai rata-rata kadar timbal pada ketiga sampel. − H 1 : σ 1 ≠ σ 2 terdapat perbedaan yang signifikan antara nilai rata-rata kadar timbal pada ketiga sampel. Nilai rata-rata kadar timbalantar sampel dinyatakan berbeda apabila probabilitas yang dihasilkan 0,05. Hasil dapat dilihat pada Lampiran 13, halaman 53 - 54. Universitas Sumatera Utara 27

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Analisis Kualitatif

Analisis kualitatif dilakukan sebagai analisis pendahuluan untuk mengetahui ada atau tidaknya ion-ion timbal dalam sampel. Analisis kualitatif ini dilakukan dengan penambahan larutan dithizon 0,005 bv dan dengan menggunakan Spektrofotometri Serapan Atom. Tabel 4.1. Hasil Analisis Kualitatif dalam Sampel yang Telah di Dekstruksi No. Sampel Logam Pereaksi larutan dithizon 0,005 bv Hasil Reaksi 1. Lipstik I - 2. Lipstik II Pb pH 8,5 - 3. Lipstik III - Keterangan : Pb + : Merah tua Pada Tabel 4.1 di atas menunjukkan bahwa identifikasi untuk ion timbal pada sampel tidak memberikan warna. Hal ini disebabkan karena kadar ion timbal pada sampel kecil sehingga tidak dapat terdeteksi. Reaksi dengan larutan dithizon 0,005 dapat membedakan keberadaan ion timbal masing-masing ion ini akan memberikan warna pada pH yang berbeda. Pada pH 8,5 lapisan kloroform memberikan warna merah tua yang menunjukkan adanya ion timbal. Warna yang terbentuk adalah karena terbentuknya kompleks logam dithizonat.Namun analisis untuk ion timbal pada sampel tidak memberikan warna. Hal ini disebabkan karena kadar ion timbal pada sampel yang terlalu kecil sehingga tidak dapat terdeteksi. Kadar batas timbal yang dapat dideteksi dengan menggunakan dithizonat adalah 1 Universitas Sumatera Utara 28 ppm bb Fries dan Getrost, 1977.Hasil absorbansi dengan spektrofotometer serapan atom menunjukkan adanya absorbansi pada panjang gelombang 283,3 nm untuk timbal. Hal ini juga membuktikan secara kualitatif bahwa sampel mengandung ion timbal 4.2 Analisis Kuantitatif 4.2.1 Kurva Kalibrasi Timbal