16
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
2-4-Iodofenil-3-4-nitrofenil-5-fenil-2H-tetrazolium klorida, trypan blue, crystal violet, safranin, larutan lugol, antibiotik kloramfenikol dan eritromisin.
Tabel 3.1 Data isolat jamur endofit dari tanaman Kina Cinchona pubescens Vahl.
No Kode Isolat
Asal Isolat
1 5-1-8-5
Daun 2
1-2-5-3 Tangkai daun
3 2-2-6-4
Tangkai daun 4
3-2-10-2 Tangkai daun
5 2-3-4-2
Bunga 6
3-3-4-2 Bunga
7 1-2-4-4
Tangkai daun 8
1-2-6-3 Tangkai daun
9 3-2-1-2
Tangkai daun 10
1-3-1-1 Bunga
3.3 Tahapan Penelitian
3.3.1 Skrining aktivitas antibakteri jamur endofit dari tanaman Kina Cinchona
pubescens Vahl.
3.3.2 Scaling up jamur endofit yang paling aktif sebagai antibakteri 3.3.3 Fraksinasi dan purifikasi metabolit bioaktif antibakteri
3.3.4 Penentuan nilai KHM Kadar Hambat Minimum 3.3.5 Identifikasi secara makroskopik dan mikroskopik jamur endofit yang
paling aktif sebagai antibakteri
17
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.4 Prosedur Kerja
3.4.1 Skrining Aktivitas Antibakteri Jamur Endofit dari Tanaman Kina
Cinchona pubescens Vahl. 3.4.1.1
Kultivasi Jamur Endofit
Proses kultivasi dilakukan terhadap 10 isolat murni jamur endofit yang diisolasi dari bagian daun, tangkai daun, dan bunga tanaman Kina yang dibagi
menjadi 2 tahap kultivasi: kultivasi pertama dilakukan terhadap 6 isolat jamur isolat no. 1-6 dan kultivasi kedua dilakukan terhadap 4 isolat jamur isolat no.
7-10. Setiap isolat diambil sebanyak 1 ose dari stock culture pada medium PDA Potato Dextrose Agar miring dan diinokulasikan pada masing-masing 40 mL
medium PDB Potato Dextrose Broth dan GYP Glucose Yeast extract Peptone yang sudah steril, proses inokulasi ini dilakukan secara steril di dalam laminar air
flow. Proses kultivasi jamur dilakukan selama 3 minggu pada suhu ruang.
3.4.1.2 Ekstraksi Kultur Jamur Endofit
Sebanyak 6 kultur jamur endofit isolat no. 1-6 yang sudah dikultivasi tahap pertama pada medium PDB dan GYP diekstraksi dengan pelarut etil
asetat:metanol 4:1, sedangkan untuk 4 kultur jamur isolat no. 7-10 yang dikultivasi tahap kedua pada medium PDB dan GYP diekstraksi dengan etil
asetat:metanol 4:1 dan fraksi airnya diekstraksi lagi dengan kloroform. Jumlah pelarut yang digunakan pada masing-masing ekstraksi sebanyak 40 mL yaitu 1:1
dengan jumlah medium kultur jamur. Proses ekstraksi dilakukan menggunakan corong pisah sebanyak tiga kali. Untuk ekstraksi dengan pelarut etil
asetat:metanol 4:1 diambil lapisan atas fraksi etil asetat:metanol, sedangkan untuk ekstraksi dengan pelarut kloroform diambil lapisan bawah fraksi
kloroform. Masing-masing fraksi dipisahkan dan dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator. Ekstrak pekat yang didapat dari masing-masing fraksi
ditimbang dan dilarutkan dengan metanol dalam jumlah tertentu sehingga masing- masing ekstrak diperoleh konsentrasi 10 mgmL. Selanjutnya dilakukan uji KLT
dengan menggunakan fase gerak diklorometan:metanol 7:1 dan hasilnya diamati dibawah sinar UV 254 nm dan UV 366 nm serta disemprot dengan pereaksi
