28
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
3.5.4 Pemeriksaan Bentuk dan Morfologi Mikropartikel
Pemeriksaan bentuk dan morfologi mikropartikel dilakukan dengan menggunakan mikroskop optik optical microscopy. Mikropartikel yang
terbentuk diletakkan di atas kaca objek, kemudian dianalisa menggunakan mikroskop optik dengan perbesaran 100 kali Sari et al., 2012, dengan
modifikasi.
3.5.5 Uji Aktivitas Proteolitik Mikropartikel
3.5.5.1 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Tirosin
Untuk pengujian aktivitas proteolitik serbuk getah papaya Carica papaya L. dibuat kurva kalibrasi tirosin sebagai baku standar. Sebelum membuat
kurva kalibrasi, terlebih dahulu dilakukan penentuan panjang gelombang maksimum tirosin dengan cara 10 mg tirosin dilarutkan dengan aquadest sampai
100 mL. Kemudian dilakukan pengukuran serapan tirosin pada panjang gelombang 250-350 nm dengan menggunakan spektofotometer UV-Vis. Dari
hasil pengukuran, dapat diperoleh panjang gelombang maksimum dengan melihat serapan yang tinggi Jean, 2015.
3.5.5.2 Pembuatan Kurva Kalibrasi Tirosin
Untuk membuat kurva kalibrasi, larutan induk tirosin dibuat dengan cara melarutkan 10 mg tirosin dalam 10 mL aquadest. Selanjutnya dibuat seri
konsentrasi 25 ppm, 35 ppm, 45 ppm, 55 ppm, 65 ppm, 75 ppm, dan 85 ppm sebanyak 10 mL dari larutan induk. Tiap seri larutan diukur serapannya pada
panjang gelombang maksimum yang diperoleh dengan menggunakan spektofotometer UV-Vis. Dibuat kurva kalibrasi yang menyatakan hubungan
antara serapan dengan konsentrasi larutan Jean, 2015.
3.5.5.3 Pengujian Aktivitas Proteolitik
Sebanyak 50 mg mikropartikel digerus di dalam mortar, kemudian dilarutkan dalam 25 mL dapar fosfat pH 6,5 dan diaduk dengan menggunakan
pengaduk magnetik selama 45 menit. Sisa dinding mikropartikel dipisahkan dengan cara filtrasi. Filtrat sebanyak 2 mL, ditambahkan 2 mL EDTA, 2 mL
29
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
sistein, 2 mL kasein, kemudian campuran diinkubasi selama 20 menit pada suhu 37
C. Reaksi dihentikan dengan penambahan TCA 6 mL, kemudian disaring. Filtrat diinkubasi selama 20 menit pada suhu 37
C. Aktivitas proteolitik serbuk getah pepaya Carica papaya L. ditentukan oleh jumlah tirosin yang dihasilkan
dari reaksi dengan kasein melalui pengukuran menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum Fernando et al., 2011. Aktivitas
proteolitik dapat dihitung dengan menggunakan persamaan Alviyulita, 2014:
Aktivitas proteolitik =
Keterangan: Tirosin konsentrasi tirosin yang terbentuk; v volume total sample pada tiap tabung dalam mL; q waktu inkubasi dalam menit; p jumlah enzim yang dgunakan dalam
mL; Fp faktor pengenceran.
Kategori