Penyembuhan luka yang normal merupakan suatu proses yang kompleks dan dinamis, tetapi mempunyai suatu pola yang dapat diprediksi. Proses
penyembuhan luka dapat dibagi menjadi tiga fase pokok, yaitu homeostasis dan inflamasi, proliferasi, maturasi dan remodeling. Proses penyembuhan luka terdiri
dari tiga tahap, yaitu : 1 sel inflamatori dari jaringan sekeliling akan berpindah ke arah tempat luka, 2 fibroblast kelihatan dan mulai menghasilkan serat
penghubung kolagen yang memberi tensile strength ke jaringan yang dihasilkan dan 3 secara serentak, kapiler-kapiler mulai terbentuk menyediakan tempat
dengan nutrient dan oksigen serta sel epithelial pada ujung dari luka mulai terisi pada daerah di bawah luka sehingga epithelium terbentuk dan luka dapat
disembuhkan Wikesman et al. 2007 dalam Atik dan Januarsih 2009.
4.2.2 Uji total plate count TPC pada hewan coba
Kitosan memiliki kemampuan sebagai zat antibakteri karena memiliki sifat mampu menghambat pertumbuhan bakteri. Hal ini disampaikan oleh Simpson
1997 bahwa kemampuan kitosan dalam menghambat ataupun membunuh bakteri dengan mekanisme terjadinya lisis pada membran sel bakteri. Chitoplast
berbahan zat antibakteri kitosan dengan berbagai konsentrasi diaplikasikan secara in vivo dengan cara dilekatkan pada 10 ekor tikus percobaan yang digunakan dan
2 tikus percobaan lainnya sebagai hewan coba tanpa menggunakan penutup luka. Selang pengambilan sampel dilakukan dengan perlakuan tanpa penutup luka dan
perlakuan konsentrasi kitosan pada jam ke-24 dan jam ke-48. Jumlah bakteri pada luka sayat yang diberikan dapat diketahui dengan
menggunakan analisis TPC. Prinsip kerja dari analisis TPC adalah perhitungan jumlah koloni bakteri yang ada di dalam sampel dengan pengenceran sesuai
keperluan dan dilakukan secara duplo. Koloni yang tumbuh pada cawan petri dihitung dengan jumlah koloni yang dapat diterima 30-300 koloni percawan.
Nilai TPC dapat dihitung dengan mengkalikan jumlah koloni bakteri per jumlah pengencerannya Fardiaz 1992. Perhitungan nilai TPC dapat dilihat selengkapnya
pada Lampiran 4. Hasil analisis ragam terhadap kandungan nilai TPC berdasarkan perbedaan
waktu selama 24 dan 48 jam selama pengamatan menunjukkan bahwa perbedaan waktu dalam 24 dan 48 jam tidak memberikan pengaruh berbeda nyata, karena
p0,05 terhadap kandungan nilai TPC yang dihasilkan pada setiap taraf pengambilan sampel dan konsentrasi chitoplast yang diujikan. Hal ini diduga
karena konsentrasi kitosan masih memiliki kondisi dan kemampuan yang sama dalam menurunkan jumlah bakteri yang ada dalam selang waktu 24 dan 48 jam.
Hasil analisis TPC pada luka sayat tikus disajikan dalam bentuk grafik yang dapat dilihat pada Gambar 7.
Keterangan: Huruf a,b pada diagram batang menunjukan perbedaan interaksi pada setiap taraf konsentrasi yang memberikan pengaruh terhadap nilai TPC luka sayat pada tikus percobaan
kontrol negatif; kontrol positif; kitosan 0,5 ; kitosan 1,0 kitosan 1,5 ; tanpa penutup luka
Gambar 7. Nilai rata-rata TPC pada setiap taraf interaksi konsentrasi dan waktu pengambilan sampel
Hasil analisis ragam terhadap interaksi antara konsentrasi kitosan dalam chitoplast dengan waktu pengambilan sampel Lampiran 2a menghasilkan data
pengaruh yang berbeda. Hasil perbedaan konsentrasi dalam chitoplast memberikan pengaruh yang berbeda nyata p0,05 terhadap nilai TPC pada luka
yang diujikan. Uji lanjut Duncan Lampiran 2b menunjukan hambatan bakteri yang terjadi dari perlakuan tanpa adanya penutup luka dan perbandingan antara
kontrol negatif serta kontrol positif dibandingkan dengan perlakuan beberapa konsentrasi kitosan 0,5 ; 1,0 ; dan 1,5 membuktikan bahwa perbedaan
konsentrasi kitosan dalam chitoplast memberikan pengaruh yang nyata. Hambatan bakteri terbaik terdapat pada perlakuan jam ke-24 dihasilkan dari
penutupan luka dengan chitoplast 1,5 yang mampu menghambat bakteri sebesar 99,74 atau mampu menghambat dari 6,00 x 10
5
hingga 1,59 x 10
3
koloni bakteri persampel, sedangkan untuk hasil hambatan bakteri terkecil dihasilkan dari penutupan luka dengan kontrol negatif yang mampu menghambat
bakteri sebesar 88,58 atau mampu menghambat bakteri dari 6,00x10
5
hingga sebesar 6,85x10
4
koloni bakteri. Beda hal nya dengan hambatan bakteri yang dihasilkan oleh kontrol positif, yang hanya bisa mengahambat bakteri sebesar
94,4 , yakni mengahambat bakteri hingga sebesar 3,36x10
4
koloni. Sementara untuk chitoplast dengan konsentrasi 0,5 dan 1,0 secara berturut turut hanya
mampu menghambat bakteri sebesar 97,3 dan 96,02 pada perlakuan waktu dalam 24 jam.
Hambatan bakteri terbaik pada perlakuan jam ke-48 juga dihasilkan dari penutupan luka dengan chitoplast 1,5 yang mampu menghambat bakteri
sebesar 96,01 atau mampu menghambat dari 7,35x10
4
menjadi 2,93x10
3
koloni bakteri persampel, sedangkan untuk hasil hambatan bakteri terkecil dihasilkan
dari penutupan luka dengan kontrol positif yang mampu menghambat bakteri sebesar 8,03 atau mampu menghambat bakteri dari 7,35x10
5
hingga 6,76x10
4
koloni bakteri dan tidak berbeda signifikan denga kitosan 1,0 yang mampu menghambat koloni bakteri dari 7,35x10
5
hingga sebesar 6,75x10
4
koloni bakteri . Sementara untuk chitoplast 0,5 menghasilkan jumlah bakteri yang lebih besar
dibandingkan dengan tanpa penutup pada perlakuan waktu dalam 48 jam. Adanya penurunan jumlah persentase pada kontrol positif dapat disebabkan oleh zat kimia
yang terkandung pada plester komersil yang digunakan karena berada pada kondisi kelembaban yang cukup tinggi.
Pada jam ke-48 hasil yang didapatkan dari semua perlakuan penutupan luka tidak berbeda jauh secara signifikan terhadap jumlah bakteri dibandingkan
pada saat jam ke-24. Hasil uji lanjut duncan Lampiran 2b menunjukan bahwa chitoplast dengan konsentrasi 1,5 memiliki hambatan yang berbeda nyata
p0,05 serta menghasilkan hambatan bakteri yang terbaik dibandingkan dengan perlakuan lainnya. Perbedaan daya hambat bakteri yang terjadi pada setiap taraf
konsentasi chitoplast mendukung pernyataan Liu 2003, yang menjelaskan bahwa aktivitas antibakteri tergantung pada konsentrasi kitosan dalam larutan.
Aktivitas antibakteri dari kitosan dalam medium akan meningkat jika konsentrasi kitosan meningkat.
Menurut Rafaat et al. 2008, interaksi awal antara polikationik kitosan dan polimer dinding sel yang bermuatan negatif dipengaruhi oleh interaksi
elektrostatis dan asam teikoat. Akibatnya, pengikatan kitosan pada polimer dinding sel memicu terjadinya efek seluler kedua, yaitu destabilisasi dan
perusakan fungsi membran bakteri sehingga mengganggu fungsi membran sebagai pelindung dan mengakibatkan pergerakan substansi bakteri terhambat.
4.2.3 Derajat infeksi luka
