terjadinya perubahan warna larutan dari warna merah menjadi biru apabila terjadi
ikatan antara reagen warna protein dengan protein setelah 2 menit hingga 1 jam.
3.5.0 Penentuan Aktivitas Enzim
Penentuan aktivitas Peroksidase PO dan Polyphenoloksidase PO dengan menggunakan metoda Kar and Mishra 1976. Prosedur ini berdasarkan kenyataan
bahwa PO dan PPO dapat mengoksidasi pyrogallol. Proses oksidasi dari PO dalam mengkatalisis reaksi menggunakan H
2
O
2
Kar and Mishra, 1976: Maehly and Chance, 1954, sedangkan oksidasi dari PPO tidak menggunakan H
2
O
2
.
3.5.1 Pengujian Enzim Peroksidase PO
Pengujian aktivitas enzim ini dengan menggunakan 30 μl protein kalus crude extract
dan ditambahkan 5 ml larutan pereaksi yang terdiri dari 10 mM pyrogallol dicampur 0,1 m buffer fosfat pada pH 6,8 dan suhu 25
o
C, lalu ditambahkan 10 mM H
2
O
2
sebanyak 0,1 ml, didiamkan selama 5 menit, kemudian ditambahkan 0,5 mL H
2
SO
4
5 vv untuk menghentikan reaksi. Pengukuran kadar purpurogallin dilakukan dengan pengukuran nilai absorbansi yang menggunakan metoda Bausch Lomb
Spectronic 70 kolorimeter dengan panjang gelombang 420 nm. Campuran reaksi antara buffer posfat dengan pyrogallol digunakan sebagai larutan blanko.
3.5.2 Pengujian Enzim Polifenol oksidase PPO
Pengujian aktivitas enzim ini menggunakan prosedur yang hampir sama dengan pengujian peroksidase. Pengujian ini menggunakan penambahan ekstrak kalus
sebanyak 70 μl dan ditambahkan 5 ml larutan pereaksi yang terdiri dari 0,1 m buffer
posfat pada pH 6,8 dan suhu 25
o
C, didiamkan selama 5 menit, kemudian ditambahkan 0,5 mL H
2
SO
4
5 vv untuk menghentikan reaksi. Larutan diukur nilai absorbansinya pada panjang gelombang 420 nm.
Universitas Sumatera Utara
3.5.3 Parameter Pengamatan
Parameter yang diamati dalam penelitian ini adalah : Pengamatan secara kuantitatif
a. Berat basah kultur gram
b. Persentase terkontaminasi
Persentase kultur terkontaminasi dihitung setiap hari sejak awal hingga akhir penelitian
Jumlah eksplan yang terkontaminasi Persentase terkontaminasi =
X 100 Jumlah eksplan seluruh perlakuan
c. Penentuan kadar protein
d. Penentuan aktivitas peroksidase PO
e. Penentuan aktivitas polifenol oksidase PPO
f. Warna Kalus
3.5.4 Analisa Data
Data penelitian menggunakan metoda RAL yang dianalisis dengan Analisis Of Variace ANOVA. Sedangkan untuk menguji beda antara perlakuan dilakukan
dengan Uji Jarak Duncan UJD atau sering disebut Duncan New Multiple Range Test DMRT Sastrosupandi, 2004.
Universitas Sumatera Utara
BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Persentase Kultur Yang Hidup Setelah Diinduksi Kolkisin
