3.6.2 Penentuan Jumlah Candida albicans
a. Lempeng uji disterilisasi dengan autoclave 121
o
C selama 1 jam b. Lempeng uji direndam dalam saliva buatan selama 1 jam dan dibilas
dengan Phosphate Buffer Saline sebanyak dua kali. c. Lempeng uji dibagi menjadi tiga kelompok yaitu kelompok Polident,
kelompok energi microwave, dan kelompok kontrol. Tiap kelompok terdiri dari 9 buah lempeng uji.
d. Selanjutnya lempeng uji dikontaminasi dengan Candida albicans dengan cara dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi suspensi Candida albicans.
Pembuatan suspensi Candida albicans dilakukan dengan mengambil 1-2 ose biakan murni Candida albicans yang telah dikultur kemudian dicampurkan dengan larutan
NaCl 0,9 sampai diperoleh kekeruhan yang sesuai dengan standar Mac Farland 1x10
8
CFUml. Tiap satu lempeng uji dimasukkan ke dalam satu tabung reaksi kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37
o
C.
Gambar 11. Perendaman lempeng uji dalam suspensi Candida albicans
Universitas Sumatera Utara
e. Setelah 24 jam lempeng uji dikeluarkan dari tabung reaksi kemudian untuk sampel dari kelompok bahan pembersih enzim lempeng uji dimasukkan ke
dalam tabung reaksi yang berisi Polident selama 5 menit, sampel dari kelompok energi microwave lempeng uji dimasukkan ke dalam microwave dengan perendaman
dalam beaker glass berisi air akuades 200 ml selama 3 menit, dan sampel dari kelompok control lempeng uji dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi NaCl
0,9 steril selama 5 menit sebagai kontrol. f. Lempeng uji dikeluarkan dari tabung reaksi kemudian dibilas dengan
Phophate Buffer Saline sebanyak dua kali. g. Lempeng uji dimasukkan ke dalam Sabour
aud’s broth 10 ml, digetarkan dengan vortex selama 30 detik untuk melepaskan Candida albicans yang melekat
pada lempeng uji. h. Selanjutnya dilakukan pembenihan dengan 0,1 ml
Sabouraud’s broth pada S
abouraud’s dextrose agar, diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37
o
C i. Setelah 48 jam dilakukan penghitungan Candida albicans dengan satuan
CFUml.
Universitas Sumatera Utara
3.7 Kerangka Operasional
Pembuatan Master Model
Flasking
Packing
Kuring Deflasking
Sampel penelitian Resin akrilik polimerisasi panas
Sampel penelitian direndam dalam saliva buatan selama 1 jam Sampel penelitian kontaminasi Candida albicans
NaCl 0,9 n=9
Microwave n=9
Polident n=9
Penghitungan Candida albicans Sampel penelitian disterilkan dengan autoclave
Universitas Sumatera Utara