3.5.4.2 Pembuatan media Murashige Skoog MS dengan larutan BAP
Pembuatan media dimulai dengan pembuatan larutan stok MS dan hormon BAP yang telah dipersiapkan sebelumnya. Untuk pelaksanaan pembuatan media
yaitu sebagai berikut: 1.
Menyiapkan 500 ml air aquadest dalam panci 2.
Memasukkan gula pasir sebanyak 30 gram 3.
Memipet dan memasukkan larutan A, B, C, D, E, F, dan myo inositol masing- masing 5 ml, vitamin sebanyak 4 ml, dan hormon BAP sebanyak 0,5 ml.
4. Menambahkan air aquadest hingga volume menjadi tepat 1000 ml.
5. Mengukur pH larutan yaitu 4, jika terlalu asam tambahkan NaOH dan jika
terlalu basah tambahkan HCl. 6.
Memasukkan 6 gram agar-agar ke dalam larutan tersebut. 7.
Memasak larutan media dalam panci hingga mendidih. 8.
Menuangkan media ke dalam botol kultur yang telah diisi kapas. 9.
Menutup botol dengan plastik dan karet. 10.
Mensterilkan media di dalam autoklaf pada suhu 121ºC-126ºC dan pada tekanan 1,5 atm selama 20 menit.
11. Memasukkan media-media yang sudah steril ke dalam plastik dan simpan di
lemari penyimpan media.
3.5.4.3 Pembuatan media perlakuan
Pembuatan media perlakuan diawali dengan proses yang sama ketika membuat media kontrol MS0+BAP0,5. Akan tetapi untuk media perlakuan pada
larutan MS0+BAP0,5 ditambahkan colchicine sesuai dengan perlakuan yakni sebesar 0 mll kontrol, 0,5 mll, 1,0 mll, 1,5 mll, dan 2,0 mll. Penambahan
colchicine ini dilakukan setelah larutan MS0+BAP0,5 diencerkan dengan air aquadest hingga 1 liter dan dibagi ke dalam 5 bagian masing-masing sebanyak
200 ml. Setelah masing-masing larutan selesai dibuat, larutan diukur pHnya
dengan menggunakan pH meter. Pada umumnya teknik in vitro menggunakan pH media sebesar 5,6 - 5,8. Akan tetapi untuk perlakuan kultur biji jelutung ini
menggunakan pH 4, sehingga yang awalnya pH media kisaran 6 diturunkan
dengan menambahkan HCl hingga pH tepat menunjukkan 4. Selanjutnya larutan media ditambahkan dengan agar-agar sebanyak 1,5 gr 200 ml untuk tiap
perlakuan dan dimasak hingga mendidih. Setelah itu larutan dituang ke dalam botol-botol kultur yang sudah berisi kapas sebanyak ±10 ml. Lalu botol ditutup
dengan rapat menggunakan plastik dan karet serta diberi label. Langkah selanjutnya yaitu melakukan sterilisasi media tersebut dalam autoclave pada suhu
121ºC-126 ºC pada tekanan 1,5 atm selama 20 menit.
3.5.5 Penanaman
Kategori