28 mineral oil
sampai bagian atas tube untuk menghasilkan kondisi anaerob. Sedangkan untuk mikrotube lainnya, suspensi dimasukkan sampai bagian
bawah leher tube. Strip mikrotube API yang telah berisi suspensi bakteri kemudian
diinkubasi dalam keadaan lembab selama 18 sampai 24 jam pada suhu 37°C atau 48 jam pada suhu yang sama jika mikrotube pada satu strip API
20E menunjukkan hasil positif kurang dari 3 mikrotube. Setelah itu perubahan warna kemudian dibaca beberapa mikrotube diberi reagen
sesuai dengan standar API 20E, dan hasil reaksi ditulis menjadi 7 digit kode. Tujuh digit kode ini kemudian diterjemahkan dengan menggunakan
Analytical Profile Index atau menggunakan software untuk identifikasi.
Contoh blanko uji dapat dilihat pada Lampiran 1.
2. Penelitian Tahap II
2.1. Konfirmasi Kultur Salmonella spp. ATCC 14028 BAM, 2007
Tahap konfirmasi dilakukan untuk memeriksa kemurnian kultur yang akan digunakan. Konfirmasi kultur Salmonella spp. diawali dengan tahap
pewarnaan Gram. Konfirmasi kultur dilanjutkan dengan tahap-tahap identifikasi Salmonella yang mengacu pada BAM 2007.
Pewarnaan Gram diawali dengan menginokulasikan satu ose kultur ke atas gelas objek yang telah diberi setetes akuades steril. Kultur kemudian
difiksasi di atas api untuk membuat sel-sel bakteri tersebut melekat pada gelas objek. Setelah film kultur siap, kemudian diteteskan violet kristal dan
dibiarkan selama 1 menit, lalu bilas dengan akuades dan sisa air yang tertinggal kemudian dihilangkan lalu ditetesi larutan lugol selama 1 menit.
Setelah dicuci kembali dengan akuades, dihilangkan warnanya dengan menggunakan alkohol 95 selama 10-20 detik atau sampai warna biru tidak
luntur lagi. Preparat kemudian diwarnai dengan larutan safranin selama 10-20 detik dan dibilas kembali dengan air lalu dikeringkan dengan menggunakan
kertas serap. Preparat yang telah siap kemudian diamati melalui mikroskop dengan perbesaran 1000 kali dengan penambahan minyak imersi. Di bawah
29 mikroskop akan terlihat sel-sel Salmonella berwarna merah dengan bentuk
batang pendek. Identifikasi
Salmonella dilanjutkan dengan menginokulasikan satu ose
kultur pada NA miring ke dalam media NB Nutrient Broth dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24±2 jam. Hasil positif dari media NB digoreskan
secara kuadran pada media HEA lalu diinkubasi pada suhu 37°C selama 24±2 jam. Koloni tipikal kemudian digores dan ditusuk pada agar miring TSIA dan
LIA untuk diinkubasi kembali pada suhu 37°C selama 24±2 jam.
2.2. Penyegaran Kultur Dewanti-Haryadi et al., 2001
Kultur Salmonella
pada NA miring disegarkan setiap 2 minggu sekali. Penyegaran dilakukan dengan mengambil 1 ose kultur, digores langsung pada
NA miring yang baru, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24±2 jam. Setelah diinkubasi, kultur kemudian disimpan pada suhu rendah di
dalam lemari es.
2.3. Persiapan Kultur Uji Salmonella spp.
