DesainRancangan Penelitian Tempat dan Waktu Penelitian Hewan Percobaan Identifikasi kandungan senyawa kimia ekstrak etanol sirih merah

28

BAB III METODELOGI PENELITIAN

Metodologi penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah penelitian eksperimental Experimental research. Penelitian eksperimental dimaksudkan untuk mengetahui pengaruh atau hubungan antara variabel bebas dengan variabel terikat. Dalam penelitian ini yang termasuk variabel bebas adalah EEDSM. Sedangkan variabel terikat adalah kadar gula darah pada uji Toleransi Glukosa dan hewan yang dipaparkan terhadap aloksan serta histologi pankreas.

3.1 DesainRancangan Penelitian

Penelitian yang dilakukan meliputi pengumpulan daun sirih merah Piper crocatum, dibuat simplisia kering kemudian diekstraksi dengan metode remaserasi dengan penyari etanol 70. Ekstrak kering yang diperoleh diuji pada mencit dengan Uji Toleransi Glukosa Kadar gula darah mgdL kemudian dilanjutkan terhadap mencit yang diinduksi dengan aloksan dan histologi pankreas menggunakan metode eksperimental di laboratorium dengan desain Rancangan Acak Lengkap RAL. Analisis data dilakukan menggunakan Analisis Varian Anava.

3.2 Tempat dan Waktu Penelitian

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Fitokimia, Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi Fakultas Farmasi, serta Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara. Penelitian dilaksanakan setelah mendapat persetujuan Komite Etik Penelitian Bidang Kesehatan Universitas Sumatera Utara. Waktu penelitian dilakukan selama lebih kurang 3 tiga bulan. Universitas Sumatera Utara 29 3.3 Alat dan Bahan Penelitian 3.3.1 Alat – alat yang digunakan Alat-alat yang digunakan adalah alat-alat gelas, laboratorium seperti beaker glass, labu takar, Erlenmeyer dan sebagainya, Blender Panasonic, neraca listrik, neraca hewan Presica Geniwigher, GW-1500, Alat PK-Air Azeotropi, rotary evaporator Heidolph vv-2000, mortar dan stamper, oral sonde, spuit ukuran 1 ml dan 3 ml, kertas saring, penangas air, Accu Trend Roche, animal restrainer, politube 1,5 ml dan kandang mencit.

3.3.2 Bahan-bahan yang digunakan

Bahan yang digunakan dalam penelitian adalah daun Sirih merah yang diperoleh dari hasil kultivasi di daerah Medan Johor, Medan; Etanol 96; Tablet metformin PT Kimia Farma; CMC-Na; Aquadest; Larutan fisiologis NaCl 0,9; toluen; Aloksan monohidrat Sigma; formalin 10; Makanan; D-Glukosa; Fruktosa; dan bahan kimia lain yang dianggap perlu.

3.4 Hewan Percobaan

Hewan yang digunakan dalam percobaan ini adalah mencit jantan Mus muscullus L yang diperoleh dari Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara. Uji antidiabetes dengan metode uji toleransi glukosa menggunakan mencit dengan berat badan 25-30 g dan umur 2 bulan. Uji antidiabetes dengan menginduksikan aloksan pada hewan percobaan secara intra vena Angelina dkk., 2008; Gad, 2002. Hewan dikondisikan selama lebih kurang satu bulan di laboratorium dan diberi makanan pelet dan minuman air mineral yang sesuai.

3.5 Metode Percobaan

Universitas Sumatera Utara 30

3.5.1 Pembuatan Simplisia

Simplisia daun sirih merah dibuat di laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi USU dengan menggunakan lemari pengering dan blender pembuat serbuk. Daun sirih merah segar dilakukan sortasi basah, untuk memisahkan bagian tumbuhan yang tidak digunakan maupun benda asing, meliputi tangkai daun, serangga dan kotoran lainnya. Daun yang telah disortasi dicuci dan ditiriskan, kemudian dimasukkan ke dalam lemari pengering sampai kering, ditandai dengan bunyi rapuh bila dipatahkan. Selanjutnya diserbuk menggunakan blender. Serbuk disimpan dalam plastik putih tertutup rapat.

3.5.2 Pembuatan Ekstrak Etanol

Ekstrak etanol dibuat dengan melakukan ekstraksi metode remaserasi. Prosedur pelaksanaan; sebanyak 823,5 g serbuk kering dimaserasi dengan etanol 70 dalam wadah tertutup rapat dan dibiarkan pada suhu kamar selama 2 hari terlindung dari cahaya dan sering diaduk, kemudian dipisahkan, ampas dimaserasi kembali dengan pelarut etanol 70 baru dan dilakukan dengan cara yang sama seperti di atas sampai diperoleh maserat yang jernih. Semua maserat digabung menjadi satu lalu diuapkan dengan bantuan alat rotary evaporator sampai diperoleh ekstrak etanol kental, kemudian ekstrak dikeringkan di freeze dryer -20 o C hingga diperoleh ekstrak kering daun sirih merah.

3.5.3 Susut Pengeringan

Pemeriksaan kadar air dilakukan berdasarkan metode susut pengeringan yang terdapat di Materia Medika Indonesia terhadap crude ekstrak. Berdasarkan Universitas Sumatera Utara 31 bobot kehilangan konstan selama pengeringan di dalam oven suhu 105 - 110 C selama 3 jam atau sampai diperoleh berat konstan Ditjen POM, 1979. 3.5.4 Analisis Fitokimia Daun Sirih Merah Harbone, 1987 3.5.4.1 Uji Alkaloid Sebanyak 2 g simplisia dihaluskan, ditambahkan 10 mL kloroform dan beberapa tetes amoniak. Fraksi kloroform dipisahkan dan diasamkan dengan 10 tetes H 2 SO 4 2M. Fraksi asam diambil kemudian ditambahkan pereaksi Dagendorf, Meyer, dan Wagner. Adanya alkaloid ditandai dengan terbentuknya endapan putih oleh pereaksi Meyer, endapan merah oleh pereaksi Dragendorf, dan endapan coklat oleh pereaksi Wegner.

3.5.4.2 Uji Saponin

Sebanyak 1 g simplisia ditambah air secukupnya dan dipanaskan pada air mendidih selama 5 menit. Larutan tersebut didinginkan kemudian dikocok. Timbulnya busa yang bertahan lebih dari 10 menit menunjukkan adanya saponin.

3.5.4.3 Uji Flavonoid dan Fenolik

Sebanyak 1 g simplisia ditambah metanol 30 sampai terendam lalu dipanaskan. Filtratnya ditaruh kedalam spot plate papan uji dan kemudian ditambahkan NaOH 10 bv atau H 2 SO 4 pekat. Terbentuknya warna merah karena penambahan NaOH menunjukkan adanya senyawa fenolik hidrokuinon sedangkan warna merah yang terbentuk akibat penambahan H 2 SO 4 pekat menunjukkan adanya flavonoid.

3.5.4.4 Uji Triterpenoid dan Steroid

Sebanyak 2 g simplisia ditambah 25 ml etanol 30 lalu dipanaskan dan disaring. Filtratnya diuapkan kemudian ditambah eter. Lapisan eter dipipet dan Universitas Sumatera Utara 32 diujikan pada spot plate dengan menambahkan pereaksi Liebermen Buchard 3 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes H 2 SO 4 pekat. Warna merah atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid dan warna hijau menunjukkan adanya steroid.

3.5.4.5 Uji Tanin

Sebanyak 10 g simplisia ditambahkan air kemudian dididihkan selama beberapa menit, kemudian disaring. Filtratnya ditambah FeCl 3 1 bv. Warna biru tua atau hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin.

3.6 Identifikasi kandungan senyawa kimia ekstrak etanol sirih merah

Larutan ekstrak dielusi dengan kromatografi lapis tipis KLT dengan pengembang yang sesuai. Hasilnya dilihat secara visual dan di bawah sinar UV 254 dan 366 nm dengan atau tanpa pereaksi semprot Jork et al, 1990. Senyawa pembanding yang digunakan adalah quersetin dan rutin.

3.7 Suspensi ekstrak etanol sirih merah

Dokumen yang terkait

Efek Hipoglikemia Ekstrak Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahogani Jack.) Dan Gambaran Mikrostruktur Limpa Pada Mencit (Mus musculus L.) Yang Telah Diinduksi Diabetes Dengan Aloksan

5 43 77

Uji Efek Ekstrak Etanol Biji Jengkol (Pithecellobium lobatum Benth) Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah Tikus Putih Jantan Galur Wistar Yang Diinduksi Aloksan

5 51 113

Uji Efek Hipoglikemik Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (Piper cf. fragile Benth.) Terhadap Tikus Putih Jantan

3 45 86

Uji efek ekstrak etanol bunga rosela (Hibiscus sabdariffa L.) terhadap penurunan kadar gula darah pada tikus putih jantan

8 57 98

Uji Efek Ekstrak Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahagoni Jacq) Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Tikus Putih

0 39 69

View of EKSTRAK ETANOL DAUN SIRIH MERAH (Piper crocatum) MENURUNKAN KADAR GULA DARAH MENCIT DIABETES

0 0 5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Uraian Tumbuhan 2.1.1 Morfologi Tumbuhan - Efek Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (EEDSM) Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Serta Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus Musculus L) Diabetes

0 0 19

BAB I PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang - Efek Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (EEDSM) Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Serta Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus Musculus L) Diabetes

0 0 8

Efek Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (EEDSM) Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Serta Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus Musculus L) Diabetes

0 0 16

Efek Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah (EEDSM) Terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Serta Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus Musculus L) Diabetes

0 0 43