Efek Hipoglikemia Ekstrak Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahogani Jack.) Dan Gambaran Mikrostruktur Limpa Pada Mencit (Mus musculus L.) Yang Telah Diinduksi Diabetes Dengan Aloksan

EFEK HIPOGLIKEMIA EKSTRAK ETANOL BIJI MAHONI (Swietenia mahoganiJack.) DAN GAMBARAN MIKROSTRUKTUR LIMPA PADA

MENCIT (Mus musculusL.) YANG DIINDUKSI DIABETES DENGAN ALOKSAN

SKRIPSI

DESTRIANI NOVITA HASIBUAN

080805059

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN

2013

EFEK HIPOGLIKEMIA EKSTRAK ETANOL BIJI MAHONI (Swietenia mahoganiJack.) DAN GAMBARAN MIKROSTRUKTUR LIMPA PADA

MENCIT (Mus musculusL.) YANG DIINDUKSI DIABETES DENGAN ALOKSAN

SKRIPSI

Diajukan untuk melengkapi tugas dan memenuhi syarat mencapai gelar Sarjana Sains

DESTRIANI NOVITA HASIBUAN

080805059

DEPARTEMEN BIOLOGI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

MEDAN 2013

PERSETUJUAN

Judul : EFEK HIPOGLIKEMIA EKSTRAK ETANOL

BIJI MAHONI (Swietenia mahogani Jack.) DAN GAMBARAN MIKROSTRUKTUR LIMPA PADA MENCIT (Mus musculus L.) YANG DIINDUKSI DIABETES DENGAN ALOKSAN

Kategori : SKRIPSI

Nama : DESTRIANI NOVITA HASIBUAN

Nomor Induk Mahasiswa : 080805059

Program Studi : SARJANA (S1) BIOLOGI

Departemen : BIOLOGI

Fakultas : MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN

ALAM (FMIPA) UNIVERSITAS SUMATERA UTARA

Diluluskan di

Medan, Oktober 2013

Komisi Pembimbing :

Pembimbing 2, Pembimbing 1,

Dra. Emita Sabri, M.Si Dr. Salomo Hutahaean

NIP. 19560712 198702 2 002 NIP. 19651011 199501 1 001

Diketahui/Disetujui oleh

Departemen Biologi FMIPA USU Ketua,

Dr. Nursahara Pasaribu, M.Sc NIP. 19650123 199003 2 001

PERNYATAAN

EFEK HIPOGLIKEMIA EKSTRAK ETANOL BIJI MAHONI (Swietenia

mahoganiJack.) DAN GAMBARAN MIKROSTRUKTUR LIMPA PADA MENCIT (Mus musculusL.) YANG DIINDUKSI DIABETES DENGAN

ALOKSAN

SKRIPSI

Saya mengakui bahwaskripsi ini adalah hasil kerja saya sendiri, kecuali beberapa kutipan dan ringkasan yang masing-masing disebutkan sumbernya.

Medan, Oktober 2013

DESTRIANI NOVITA HASIBUAN 080805059

PENGHARGAAN

Segala pujian syukur kepada Tuhan Yesus Kristus yang hanya karena anugerah dan kasih karuniaNyalah sehingga penulis dapat menyelesaikan penulisan hasil penelitian yang berjudul ‘Efek Hipoglikemia Ekstrak Etanol Biji Mahoni

(Swietenia mahogani Jack.) Dan Gambaran Mikrostruktur Limpa Pada Mencit (Mus musculus L.) Yang Telah Diinduksi Diabetes Dengan Aloksan’

sebagai salah satu syarat untuk meraih gelar Sarjana Sains (S.Si) pada Departemen Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam di Universitas sumatera Utara.

Ucapan terima kasih penulis sampaikan kepada Bapak Dr. Salomo Hutahaean selaku dosen pembimbing pertama dan Ibu Dra. Emita Sabri, M.Si selaku dosen pembimbing kedua yang telah membimbing penulis dan memberikan banyak masukan, motivasi dan arahan dengan penuh kesabaran dari awal hingga akhir penulisan hasil penelitian ini.

Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada Ibu Dra. Isnaini Nurwahyuni, M.Sc selaku Dosen Penasehat Akademik, Ibu Dr. Nursahara Pasaribu, M. Sc selaku Ketua Departemen Biologi FMIPA USU dan Bapak Drs. Kiki Nurtjahja, M.Sc selaku Sekretaris Departemen Biologi FMIPA USU. Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Ibu Mizarwati, S. Si selaku Ketua Panitia Seminar Departemen Biologi FMIPA USU, Ibu Roslina Ginting dan Bang Hendra Raswin selaku Staff Administrasi Departemen Biologi FMIPA USU serta Ibu Nurhasni Muluk selaku Analis dan Laboran di Laboratorium Struktur Hewan dan Fisiologi Hewan.

Teristimewa penulis ucapkan terimakasih kepada Ayahanda dan Ibunda tercinta (Alben Hasibuan dan Roselin Butar-Butar) yang begitu luar biasa telah mencurahkan cinta kasihnya lewat doa, perhatian bahkan dukungan baik secara moral dan materiil kepada penulis, juga kepada Abangda Lamhot dan Iwan, juga Adinda Desi dan Yan serta seluruh keluarga besar atas segala doa dan dukungannya.

Penulis juga mengucapkan terimakasih kepada sahabat-sahabat terbaikku; KTB Holy Grail (Bang Ferdinand, Kak Melva, Hanna, Rohana, Rosima). KTB Stenos Filos (Ariee, Dina, Erwin, Febri, Putri, Sengli), dan KTB Electus (Alfred, Dengsi, Wirda) atas setiap doa dan motivasi dari kalian semua dalam meresponi setiap keluh kesah penulis, juga kepada teman-teman koordinasi dan tim di UKM KMK USU UP FMIPA periode 2011, 2012, 2013 atas segla doa serta dukungannya.

Penulis mengucapkan terimakasih kepada rekan-rekan seperjuangan dalam penelitian; Pesta, Bang Ronal yang saling mendukung dan saling pengertian mulai dari awal penelitian ini hingga pada akhir penyususn hasil ini. Penulis juga

menyampaikan terimakasih kepada sahabat terbaikku Rani, Yanti, Desi, Nina tempat berbagi cerita. Kepada kakak asuhku Kak Deni dan adik asuhku Elfrida serta kepada teman-teman seperjuanganku mahasiswa Biologi stambuk 2008 Mela, Asmitra, Sister, Indri, Pinta, Eka, Jhon, Jack, Albert, Frans dan yang lain yang tidak dapat disebutkan namanya satu per satu. Adik-adik penulis di Biologi Maria, Northon, Annisa Willy, Yantika, Noni, Anita serta rekan-rekan Asisten genetika dan Bioteknologi. Juga kepada semua orang yang senantiasa mendukung penulis dalam merampungkan hasil penelitian ini.

Penulis menyadari sepenuhnya bahwa hasil penelitian ini masih memiliki banyak kekurangan. Oleh sebab itu dengan segala kerendahan hati penulis mengharapkan kritik dan saran yang membangun pada hasil penelitian ini. Akhir kata penulis mengucapkan terima kasih. Semoga hasil penelitian ini dapat bermanfaat.

Medan, Oktober 2013

Efek Hipoglikemia Ekstrak Etanol Biji Mahoni (

Swietenia

mahogani

Jack.) dan Gambaran Mikrostruktur Limpa Mencit

(

Mus musculus

L.) yang Diinduksi Diabetes dengan Aloksan

Abstrak

Telah dilakukan penelitian untuk mengetahui aktivitas antidiabetes ekstrak etanol biji mahoni terhadap mencit yang diinduksi diabetes dengan aloksan. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan dan 5 ulangan. Mencit diinduksi diabetes dengan terlebih dahulu dipuasakan selama 16 jam yang kemudian diinjeksikan secara intraperitoneal sebanyak 5,04 mg aloksan. Duapuluh lima ekor mencit dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu KN (normal); KP (mencit diabetes); dan P1, P2, P3 merupakan mencit diabetes yang diberi perlakuan secara berurut 1,4; 2,8; dan 4,4 mg/kg bb ekstrak etanol biji mahoni. Hasil percobaan menunjukkan bahwa ekstrak biji mahoni dengan dosis 4,2 mg/kg bb mampu menurunkan kadar gula darah (P<0,05), namun tidak dapat memulihkan penurunan berat badan yang disebabkan oleh penyakit diabetes. Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji mahoni berpengaruh terhadap gambaran mikrostruktur limpa mencit diabetes. Kesimpulan dari penelitian ini adalah diduga bahwa ekstrak etanol biji mahoni dapat memulihakan kadar gula darah mencit diabetes.

The Effect Hypoglicemia of Ethanol Extract from the Seed of

Mahogany

(

Swietenia mahogani

Jack.

) and Microstructur Spleen

of Mice (

Mus musculus

L.) was Inducted Diabetic with Alloxan

Abstract

A research was conducted to investigate antidiabetic activity of ethanol extracts from the seed of mahogani (Swietenia mahogany Jack.) and microstruktur in the mice was inducted diabetic with alloxan. The experiment used completely randomized design (CRD) with 5 treatments and 5 replications. Diabetes mellitus was induced in 16 hours fasted animals by a single intraperitoneal injection of 5,04 mg alloxan. Twenty five mice were divided into 5 groups., i.e. KN (normal mice); KP (diabetic mice); and P1, P2, and P3 were diabetic mice treated respectively with 1.4, 2.8, and 4.2 mg/kg bw Mahogany seed extract. The result showed that the extract of 2,8 mg/kg bw and 4,2 mg/kg bw was able to decrease blood glucose level (P<0,05), but the extract was not able recovery decreasing body weight of diabetic mice. The extract also was able impact on microstructure of spleen. In conclusion, we suggested that ethanol extracts of

Swietenia mahogany seed is able to decrease blood glucose level in alloxan inducted diabetic mice.

DAFTAR ISI

Halaman

PERSETUJUAN ii

PERNYATAAN iii

PENGHARGAAN iv

ABSTRAK vi

ABSTRACT vii

DAFTAR ISI ix

DAFTAR TABEL x

DAFTAR GAMBAR xi

DAFTAR LAMPIRAN xii

BAB 1. PENDAHULUAN

1.1. Latar belakang 1

1.2. Perumusan masalah 3

1.3. Hipotesis 3

1.4. Tujuan penelitian 3

1.5. Manfaat penelitian 4

BAB 2. TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Mahoni (Swietenia mahogani) 5

2.2. Simplisia dan ekstraksi 7

2.3. Diabetes melitus 7

2.4. Glukosa 8

2.5. Pengaruh hormonal dalam pengaturan glukosa darah 9

2.5.1. Insulin 9

2.5.2. Glukagon 10

2.6. Pankreas 11

2.7. Limpa 11

2.8. Aloksan 13

2.9. Hewan percobaan 14

BAB 3. METODOLOGI PERCOBAAN

3.1. Tempat pelaksanaan 15

3.2. Alat dan bahan 15

3.3. Pemeliharaan hewan percobaan 15

3.3.1. Rancangan penelitian 16

3.4. Pelaksanaan penelitian 17

3.4.1. Persiapan dan pembuatan mencit DM 17 3.4.2. Pengambilan dan pengolahan ekstrak 17

3.4.2.2. Pengolahan ekstrak 17

3.4.2.3. Pembuatan ekstrak 17

3.4.2.4. Pembuatan suspensi 18

3.4.2.5. Pembuatan preparat sayatan limpa 18

3.5. Parameter pengamatan 20

3.5.1. Pengukuran kadar gula darah mencit 20

3.5.2, Pengukuran berat badan 20

3.5.3. Pengamatan histologis limpa 20

3.6. Analisis statistik 20

BAB 4. HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1. Data rerata kadar gula darah (KGD) mencit 22

4.2. Data rerata berat badan mencit 26

4.3. Gambaran mikrostruktur limpa mencit 27

4.4. Tingkat perbandingan jumlah sel raksasa 29

BAB 5. KESIMPULAN DAN SARAN

5.1. Kesimpulan 31

5.2. Saran 31

DAFTAR PUSTAKA 32

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 1. Rancangan penelitian 18

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1.Swietenia mahogani 5

Gambar 2. Data rerata kadar gula darah hari ke-1 24

Gambar 3.Data rerata kadar gula darah hari ke-4 25

Gambar 4.Data rerata kadar gula darah hari ke-16 27

Gambar 5.Gambaran mikrostruktur limpa mencit 29

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran A.Surat rekomendasi kode etik penelitian kesehatan 35 Lampiran B. Tabel konversi perhitungan dosis ekstrak dan aloksan 36

Lampiran C. Penentuan dosis aloksan 37

Lampiran D. penentuan dosis ekstrak etanol biji mahoni 38

Lampiran E. Volume maksimum larutan sediaan uji 39

Lampiran F. Data mentah hasil pengamatan 40

Lampiran G. Analisis statistik rerata kadar gula darah 41

Lampiran H. Analisis statistik rerata berat badan 53

Lampiran I. Analisis statistik tingkat perbandingan jumlah sel raksasa 55

Lampiran J. Alur penelitian 60

Lampiran K. Prosedur pengolahan ekstrak biji mahoni 61

Lampiran L. Prosedur pembuatan ekstrak etanol biji mahoni 61 Lampiran M.Prosedur pembuatan suspensi ekstrak etanol biji mahoni 61 Lampiran N. Prosedur pembuatan preparat histologis limpa 62

Efek Hipoglikemia Ekstrak Etanol Biji Mahoni (

Swietenia

mahogani

Jack.) dan Gambaran Mikrostruktur Limpa Mencit

(

Mus musculus

L.) yang Diinduksi Diabetes dengan Aloksan

Abstrak

Telah dilakukan penelitian untuk mengetahui aktivitas antidiabetes ekstrak etanol biji mahoni terhadap mencit yang diinduksi diabetes dengan aloksan. Penelitian menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 5 perlakuan dan 5 ulangan. Mencit diinduksi diabetes dengan terlebih dahulu dipuasakan selama 16 jam yang kemudian diinjeksikan secara intraperitoneal sebanyak 5,04 mg aloksan. Duapuluh lima ekor mencit dibagi menjadi 5 kelompok, yaitu KN (normal); KP (mencit diabetes); dan P1, P2, P3 merupakan mencit diabetes yang diberi perlakuan secara berurut 1,4; 2,8; dan 4,4 mg/kg bb ekstrak etanol biji mahoni. Hasil percobaan menunjukkan bahwa ekstrak biji mahoni dengan dosis 4,2 mg/kg bb mampu menurunkan kadar gula darah (P<0,05), namun tidak dapat memulihkan penurunan berat badan yang disebabkan oleh penyakit diabetes. Hasil penelitian juga menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji mahoni berpengaruh terhadap gambaran mikrostruktur limpa mencit diabetes. Kesimpulan dari penelitian ini adalah diduga bahwa ekstrak etanol biji mahoni dapat memulihakan kadar gula darah mencit diabetes.

The Effect Hypoglicemia of Ethanol Extract from the Seed of

Mahogany

(

Swietenia mahogani

Jack.

) and Microstructur Spleen

of Mice (

Mus musculus

L.) was Inducted Diabetic with Alloxan

Abstract

A research was conducted to investigate antidiabetic activity of ethanol extracts from the seed of mahogani (Swietenia mahogany Jack.) and microstruktur in the mice was inducted diabetic with alloxan. The experiment used completely randomized design (CRD) with 5 treatments and 5 replications. Diabetes mellitus was induced in 16 hours fasted animals by a single intraperitoneal injection of 5,04 mg alloxan. Twenty five mice were divided into 5 groups., i.e. KN (normal mice); KP (diabetic mice); and P1, P2, and P3 were diabetic mice treated respectively with 1.4, 2.8, and 4.2 mg/kg bw Mahogany seed extract. The result showed that the extract of 2,8 mg/kg bw and 4,2 mg/kg bw was able to decrease blood glucose level (P<0,05), but the extract was not able recovery decreasing body weight of diabetic mice. The extract also was able impact on microstructure of spleen. In conclusion, we suggested that ethanol extracts of

Swietenia mahogany seed is able to decrease blood glucose level in alloxan inducted diabetic mice.

BAB 1

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Diabetes adalah suatu penyakit yang telah menjadi salah satu penyebab utama kematian di kebanyakan negara. Diabetes melitus, penyakit gula atau kencing manis adalah suatu gangguan kronis yang khususnya menyangkut metabolisme glukosa di dalam tubuh (Beaglenhole et al., 2004; Tjay & Rahardja, 2007). Di seluruh dunia, 3,2 juta kematian disebabkan oleh diabetes setiap tahunnya. Setidaknya, satu dari sepuluh kematian di antara orang dewasa antara 35 sampai 64 tahun disebabkan karena diabetes. Sedikitnya 171 juta orang di seluruh dunia mengidap penyakit diabetes, dan kemungkinan akan meningkat lebih dari dua kali lipat pada 2030. Peningkatan global dalam diabetes akan terjadi karena populasi penuaan dan pertumbuhan, dan karena meningkatnya tren terhadap obesitas, diet tidak sehat dan gaya hidup yang tidak baik (Beaglenhole et al., 2004). Indonesia juga telah menduduki rangking keempat jumlah penyandang diabetes terbanyak setelah Amerika Serikat, China dan India (Burhani, 2011). Diduga terdapat sekitar 5 juta kasus diabetes dan penderita penyakit pankreas di Indonesia (Riyadi, 2008).

Diabetes melitus adalah suatu penyakit kronik yang kompleks yang melibatkan kelainan metabolisme karbohidrat, protein dan lemak dengan efek lanjutan berkembangnya komplikasi makrovaskuler dan neurologis. Diabetes melitus ditandai dengan adanya gangguan pada toleransi glukosa yaitu peningkatan kadar glukosa dalam darah yang berkaitan dengan penurunan kemampuan individu dalam memberi respon terhadap insulin. Gangguan toleransi glukosa merupakan resiko terjadinya aterosklerosis dan sering berkaitan dengan penyakit kardiovaskular, hipertensi, serta dislipidemia (Riyadi, 2008). PERKENI (Perkumpulan Endokrinologi Indonesia) menyatakan bahwa gejala khas DM terdiri dari : poliuria (banyak pipis), polidipsia (banyak minum), polifagia (banyak makan) dan berat badan yang menurun tanpa sebab yang jelas.

Meningkatnya prevalensi penyakit diabetes melitus dari tahun ke tahun memerlukan perhatian yang sangat besar dalam pengobatannya. Selain itu, penyakit diabetes melitus memerlukan pengobatan jangka panjang dan biaya yang mahal, sehingga perlu dicari obat antidiabetes yang relatif murah dan terjangkau oleh masyarakat. Sebagai salah satu alternatif adalah dengan melakukan penelitian tentang obat tradisional yang mempunyai efek hipoglikemia. Pada tahun 1980 WHO merekomendasikan agar dilakukan penelitian terhadap tanaman yang memiliki efek menurunkan kadar gula darah karena pemakaian obat modern kurang aman (Kumaret al., 2005).

Bahan kimia yang sering digunakan untuk menginduksi diabetes suatu hewan percobaan adalah aloksan. Aloksan diperkenalkan sebagai hidrasi aloksan pada larutan encer (Wakins et al., 2008). Aloksan murni diperoleh dari oksidasi asam urat oleh asam nitrat. Pemberian aloksan adalah hal yang cepat untuk membuat kondisi diabetes (hiperglikemik) pada hewan percobaan. Hal ini disebabkan oleh aloksan dapat merusak secara selektif sel-sel yang terdapat pada pankreas sehingga menyebabkan berkurangnya insulin (Szkudelski, 2001) yang berperan sebagai sentral dalam pengaturan konsentrasi glukosa darah.

Dalam penelitian Kodama et al., 2005 menyatakan bahwa tikus memiliki suatu bagian populasi stem sel yang ada di limpa yang apabila dimasukkan ke dalam inang yang sakit dapat bermigrasi ke pankreas dan menjadi pulau-pulau yang fungsional yang dapat memperbaiki kadar gula darah menjadi normal.

Akhir-akhir ini, masyarakat banyak yang beralih kepada pengobatan tradisional atau sering diistilahkan dengan kembali ke alam atau back to nature, yaitu dengan mengkonsumsi makanan ataupun obat-obatan yang berasal atau dibuat dari tumbuhan. Salah satu tumbuhan yang digunakan masyarakat untuk pengobatan diabetes melitus ialah mahoni (Swietenia mahogani Jack). Bagian yang digunakan dari tumbuhan tersebut adalah bijinya (Nafri, 2007). Pengaruh biji mahoni terhadap gambaran mikrostruktur limpa mencit belum pernah dilakukan. Oleh karena itu, tertarik untuk mengetahui efek hipoglikemia ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani jack.) terhadap kadar gula darah, berat badan dan gambaran mikrostruktur limpa pada mencit (Mus musculus l.) yang diinduksi diabetes dengan aloksan

1.2. Perumusan masalah

Berdasarkan uraian di atas, maka permasalahan dalam penelitian ini yaitu: a. Apakah ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) dapat

menurunkan kadar gula darah dan meningkatkan berat badan pada mencit (Mus musculusL.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

b. Berapakah dosis optimal ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani

Jack.) yang dapat menurunkan kadar gula darah dan meningkatkan berat badan pada mencit (Mus musculus L.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

c. Bagaimanakah pengaruh pemberian ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) terhadap gambaran mikrostruktur limpa pada mencit (Mus musculusL.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

1.3. Hipotesis

Dalam penelitian ini diduga bahwa :

a. Pemberian ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) dapat menurunkan kadar glukosa darah dan menaikkan berat badan pada mencit (Mus musculusL.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

b. Semakin tinggi dosis ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani

Jack.) yang diberikan, semakin rendah kadar gula darah mencit dan semakin meningkat berat badan pada mencit ( Mus musculus L.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

c. Pemberian ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) dapat mempengaruhi gambaran mikrostruktur limpa pada mencit ( Mus musculusL.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

1.4. Tujuan penelitian

Tujuan penelitian ini adalah:

a. Untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) terhadap kadar gula darah dan berat badan pada mencit (Mus musculusL.) yang diinduksi diabetes dengan aloksan.

b. Untuk mengetahui dosis optimal ekstrak biji mahoni (Swietenia mahogani

Jack.) terhadap penurunan kadar gula darah dan berat badan pada mencit (Mus musculusL.)yang diinduksi diabetes dengan aloksan.

c. Untuk melihat pengaruh ekstrak biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) terhadap perubahan gambaran mikrostruktur limpa pada mencit (Mus musculusL.) yang diinduksi diabetes dengan aloksan.

1.5. Manfaat Penelitian

a. Menjadi bahan informasi kepada masyarakat tentang efek dari ekstrak biji mahoni (Swietenia mahoganiJack.) dalam menurunkan kadar gula darah. b. Mendapatkan dosis dari ekstrak biji mahoni yang dapat menurunkan kadar

BAB 2

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. Mahoni (Swietenia mahogani)

Mahoni (Swietenia mahogani Jack.) adalah spesies tanaman dari suku Meliaceae, yang berasal dari Hindia Barat dan Afrika. Mahoni banyak ditanam di tepi jalan sebagai pohon pelindung, juga dapat tumbuh subur bila tumbuh di pasir dekat dengan pantai. Di Indonesia, pada awalnya mahoni tumbuh secara liar di hutan-hutan, di kebun maupun di mana saja, namun sejak 20 tahun terakhir sudah dibudidayakan karena kualitas kayunya keras dan sangat baik untuk bahan mebel dan kerajinan tangan (Anonim, 2009).

Gambar 1.Swietenia mahogani

Tanaman mahoni termasuk jenis tanaman pohon tinggi, percabangannya banyak, tingginya dapat mencapai kira-kira 10-30 meter. Daun majemuk menyirip genap. Daun duduk tersebar. Helaian anak daun bulat telur, elips memanjang, ujung dan pangkal daun runcing, panjang 8-12 cm, lebar 3-5 cm, berwarna hijau

tua. Buahnya bertangkai, panjang tangkai kira-kira 1-3 cm, berbentuk bola atau bulat telur memanjang, berwarna cokelat, panjang 8-15 cm, lebar 7-10 cm (Suryowinoto, 1997).

Dalam sistematika (taksonomi) tumbuhan mahoni diklasifikasikan sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta

Sub Divisi : Angiospermae

Kelas : Dicotyledonae

Bangsa : Rutales

Famili : Meliaceae

Genus : Swietenia

Spesies :Swietenia mahagoniJack

(Tjitrosoepomo, 2009) Selama ini, pohon mahoni dikenal sebagai penyejuk jalanan. Selain itu, kayunya yang dikenal sebagai kayu yang sangat bagus yang juga digunakan sebagai bahan untuk membuat berbagai macam perabot rumah atau furniture. Berdasarkan penelitian di laboratorium, pohon mahoni (Swietenia mahagoni

Jack.), termasuk pohon yang bisa mengurangi polusi udara sekitar 47% - 69%. Pohon mahoni yang ditanam di hutan kota atau sepanjang jalan berfungsi sebagai filter udara dan daerah tangkapan air. Daun-daunnya berfungsi untuk menyerap polutan-polutan di sekitarnya. Pada tahun 1970-an banyak orang mencari biji mahoni, untuk dijadikan sebagai obat. Orang-orang mengonsumsi biji mahoni hanya dengan menelan bijinya setelah membuang bagian yang pipih (Nafri, 2007).

Kandungan kimia mahoni ada dua macam yaitu flavonoid dan saponin. Manfaat flavonoid yang dikandungnya antara lain adalah untuk melancarkan peredaran darah, mengurangi tingkat kolesterol, mengurangi penimbunan lemak pada dinding saluran darah, membantu pengurangan rasa sakit, pendarahan dan leba m, dan bertindak sebagai antioksidan, juga berfungsi menyingkirkan radikal bebas. Sedangkan, saponin befungsi sebagai pencegah penyakit sampar, mengurangi lemak badan, meningkatkan sistem kekebalan, mencegah pembekuan darah, mengerem tingginya tingkat gula dalam darah, menguatkan fungsi hati dan memperlambat proses pembekuan darah (Agus, 2009).

2.2. Simplisia dan ekstraksi

Simplisia merupakan istilah yang dipakai untuk menyebut bahan-bahan obat alam yang berada dalam wujud aslinya atau belum mengalami perubahan bentuk (Gunawan & Mulyani, 2002) Ekstrak adalah sediaan yang diperoleh dengan mengekstraksi senyawa aktif dari simplisia nabati atau hewani menggunakan pelarut yang sesuai, kemudian semua atau hampir semua pelarut diuapkan (Ditjen POM, 2000dalamLumban Raja, 2009).

Ekstraksi dapat dilakukan dengan metode maserasi, perkolasi, dan sokletasi. Sebelum ekstraksi dilakukan, biasanya serbuk tumbuhan dikeringkan lalu dihaluskan dengan derajat kehalusan tertentu, kemudian diekstraksi dengan salah satu cara di atas. Ekstraksi dengan metode sokletasi dapat dilakukan secara bertingkat dengan berbagai pelarut berdasarkan kepolarannya. Untuk mendapatkan larutan ekstrak yang pekat biasanya pelarut ekstrak diuapkan dengan menggunakan alat rotary evaporator (Lumban Raja, 2009).

2.3. Diabetes melitus

Diabetes adalah kumpulan kelainan metabolisme yang disebabkan oleh defisiensi insulin yang menyebabkan suatu gangguan kronis yang bercirikan hiperglikemia dan menyangkut metabolisme glukosa, lemak dan protein dalam tubuh terganggu (Drury, 1986; Ganong, 2005; Tjay, 2007). Pada tahun 1674, Thomas Willis menyatakan bahwa kencing si penderita penyakit ini berasa madu sehingga penyakit ini diberi nama diabetes melitus (melitus=madu) (Soehadi, 1996).

Penyakit diabetes melitus memiliki gejala 3P, yaitu poliuria (banyak berkemih), polidipsia (banyak minum), dan polifagia (banyak makan). Di samping naiknya kadar gula darah, diabetes bercirikan adanya gula dalam kemih (glycosuria) dan banyak berkemih karena glukosa yang diekskresikan banyak mengikat air. Banyak berkemih akan menimbulkan rasa sangat haus, kehilangan energi, turunnya berat badan serta rasa letih. Tubuh mulai membakar lemak untuk memenuhi kebutuhan energinya, yang disertai pembentukan zat-zat perombakan antara lain aseton, asam hidroksibutirat dan diasetat, yang membuat darah menjadi asam. Keadaan ini yang disebut ketoacidosis dan terutama timbul pada tipe 1, sangat berbahaya karena pada akhirnya dapat menyebabkan pingsan (coma diabeticum). Napas penderita yang sudah sangat kurus juga sering kali berbau

aseton. Keluhan dan gejala yang khas disertai hasil pemeriksaan glukosa darah sewaktu > 200 mg/dl atau glukosa darah puasa > 126 mg/dl sudah cukup untuk menegakkan diagnosis diabetes melitus. (Ganong, 2005; Mansjoer, 2007).

American Diabetes Association (ADA) menetapkan konsentrasi glukosa darah normal saat puasa kurang dari 100 mg/dL. Glukosa plasma terganggu jika konsentrasi glukosa saat puasa antara 100-125 mg/dL, sedangkan toleransi glukosa terganggu jika konsentrasi glukosa darah setelah pembebanan glukosa 75g, antara 140-199 mg/dL. Seseorang dikatakan menderita diabetes jika konsentrasi glukosa darah saat puasa lebih dari 126 mg/dL atau bila konsentrasi glukosa darah setelah pembebanan 75 g lebih dari 200 mg/dL (Djuanda, 2011).

2.4. Glukosa

Glukosa tersebar di alam yaitu di dalam sayur, buah, sirup jagung, sari pohon, dan bersamaan dengan fruktosa dalam madu. Tubuh hanya dapat menggunakan glukosa dalam bentuk dekstro. Glukosa merupakan hasil akhir pencernaan pati, sukrosa, maltosa, dan laktosa pada hewan dan manusia. Dalam proses metabolisme, glukosa merupakan bentuk karbohidrat yang beredar di dalam tubuh dan di dalam sel merupakan sumber energi. Dalam keadaan normal sistem syaraf pusat hanya dapat menggunakan glukosa sebagai sumber energi. Glukosa dalam bentuk bebas hanya terdapat dalam jumlah terbatas dalam bahan makanan. Glukosa dapat dimanfaatkan untuk energi tinggi. Tingkat kemanisan glukosa hanya separuh sukrosa, sehingga dapat digunakan lebih banyak untuk tingkat kemanisan yang sama (Almatsier, 2004).

Pada keadaan setelah penyerapan makanan, kadar glukosa darah pada manusia dan mamalia berkisar antara 4,5–5,5 mmol/L. Setelah ingesti makanan yang mengandung karbohidrat, kadar tersebut naik hingga 6,5–7,2 mmol/L. Saat puasa kadar glukosa darah akan turun menjadi sekitar 3,3 – 3,9 mmol/L. Penurunan mendadak kadar glukosa darah akan menyebabkan konvulsi, seperti terlihat pada keadaan over dosis insulin, karena pengaturan otak secara langsung pada pasokan glukosa. Namun, kadar yang jauh lebih rendah dapat ditoleransi asalkan terdapat adaptasi yangprogressif(Stryer, 2000).

Glukosa adalah pengendali terpenting sekresi insulin. Meskipun beberapa faktor dapat meningkatkan atau menurunkan sekresi insulin, pengendali utama

sekresi insulin adalah efek umpan balik glukosa darah pada sel beta pankreas. Jika konsentrasi glukosa darah meningkat melebihi ambang puasa, sekresi insulin meningkat. Akibat efek insulin yang merangsang penyerapan glukosa oleh hati dan jaringan perifer, konsentrasi glukosa darah akan pulih ke tingkat normal. Keadaan ini merupakan mekanisme umpan balik negatif penting untuk mengendalikan konsentrasi glukosa darah (Guyton & Hall, 2007).

Glukosa darah manusia pada kondisi normal memiliki konsentrasi yang seimbang. Banyak faktor yang mempengaruhi sirkulasi tingkatan glukosa seperti makanan, pencernaan, metabolisme, ekskresi, gerak badan atau latihan tubuh, kondisi fisiologis dan kondisi reproduksi. Glukosa darah akan menurun ketika terjadi aktivitas tubuh, terutama jika asupan makanan terbatas. Kekurangan glukosa darah dapat dikenali oleh sel pada pankreas yaitu sel alpha. Sel ini yang kemudian akan melepas glukagon, yang merupakan suatu hormon yang merangsang sel hati untuk melepaskan glukosa sehingga kadar glukosa dalam darah akan kembali normal. Dalam hal lain, jika glukosa dalam darah meningkat, yang sering terjadi pada saat setelah makan, sel pankreas lain, yaitu sel beta akan melepaskan hormon insulin, yang akan menginduksi glukosa dari darah ke hati dan sel lain, sehingga kadar glukosa turun dan kembali normal (Simon & Schuster, 1996).

2.5. Pengaruh hormonal dalam pengaturan glukosa darah 2.5.1. Insulin

Insulin adalah suatu polipeptida yang mengandung dua rantai asam amino yang dihubungkan oleh jembatan disulfida. Insulin dibentuk oleh sel beta yang terdapat pada pulau-pulau Langerhans. Satu hari bisa dihasilkan 30-40 unit. Insulin manusia memiliki berat molekul dan berisi 51 asam amino yang disusun oleh 21 rantai A dan 30 rantai B yang membentuk ikatan disulfida (Drury, 1986; Ganong, 2005). Sekali insulin memasuki sirkulasi, maka insulin diikat oleh reseptor khusus yang terdapat pada membran sebagian besar jaringan sehingga memudahkan glukosa menembus membran sel (Katzung, 2002 dalamLumban Raja, 2009).

Menurut Guyton (1990), insulin berperan dalam: 1) menghambat fosforilase, enzim yang menyebabkan glikogen hati pecah menjadi glukosa, 2) meningkatkan ambilan glukosa dari darah oleh sel-sel hati. Ini terjadi dengan

meningkatkan aktivitas enzim glukokinase, yaitu enzim yang menyebabkan fosforilase awal glukosa setelah ia berdifusi ke dalam sel-sel hati. Sekali terfosforilasi, glukosa tertangkap di dalam sel-sel hati, karena glukosa yang telah terfosforilasi tak dapat berdifusi kembali melalui membran sel, 3) meningkatkan aktifitas enzim yang meningkatkan sintesis glikogen. Efek bersih dari kerja di atas adalah meningkatkan jumlah glikogen di dalam hati. Glikogen dapat meningkat sampai total sekitar 5-6 persen dari massa hati, yang hampir sama dengan penyimpanan 100 g glikogen.

Selain pengaruh langsung hiperglikemia dalam meningkatkan ambilan glukosa baik ke hati maupun jaringan perifer, hormon insulin juga mempunyai peranan sentral dalam pengaturan konsentrasi glukosa darah. Hormon ini dihasilkan oleh sel–sel beta pada pulau Langerhans pankreas sebagai reaksi langsung terhadap keadaan hiperglikemia. Konsentrasi glukosa darah menentukan aliran lewat glikolisis, siklus asam sitrat dan pembentukan ATP. Peningkatan konsentrasi ATP akan menghambat saluran K+ yang sensitif terhadap ATP

sehingga menyebabkan depolarisasi membran sel beta, keadaan ini akan meningkatkan aliran masuk Ca2+lewat saluran Ca2+yang sensitif terhadap voltase

dan dengan demikian menstimulasi eksositosis insulin (Stryer, 2000).

2.5.2. Glukagon

Glukagon merupakan hormon yang dihasilkan oleh sel-sel alfa pada pulau-pulau Langerhans pankreas, yang tersusun oleh asam-asam amino. Sekresinya dirangsang oleh keadaan hipoglikemia. Pada saat mencapai hati (lewat vena porta), glukagon menimbulkan glikogenolisis dengan mengaktifkan enzim fosforilase. Sebagian besar glukagon endogen (dan insulin) dibersihkan dari sirkulasi darah oleh hati. Glukagon juga meningkatkan glukoneogenesis dari asam amino dan laktat (Drury, 1986; Stryer, 2000).

Glukosa adalah pengendali terpenting sekresi glukagon dan insulin. Namun glukosa memiliki efek yang berlawanan dengan kedua hormon ini. Hipoglikemia meningkatkan sekresi glukagon; akibat efek hiperglikemik glukagon, konsentrasi glukosa dalam darah kembali normal. Sebaliknya peningkatan konsentrasi glukosa darah menurunkan sekresi glukagon; glukagon

dan insulin menghasilkan efek yang penting, tetapi bertentangan untuk mengatur konsentrasi glukosa darah (Guyton & Hall, 2009).

2.6. Pankreas

Pankreas adalah suatu organ lonjong kira-kira sepanjang 15 cm yang terletak di belakang lambung dan sebagian di belakang hati. Organ ini terdiri dari 98% sel-sel dengan sekresi ekstern yang memproduksi enzim-enzim cerna yang disalurkan ke duodenum. Sisanya terdiri dari kelompok sel (pulau langerhans) dengan sekresi intern, yakni hormon-hormon yang disalurkan langsung ke aliran darah, yang terdiri atas dua jenis jaringan: 1) asini, yang mengeluarkan getah pencernaan melalui duktus pankreatikus ke dalam duodenum atau fungsi eksokrin; dan 2) pulau atau islet Langerhans, yang tidak mengeluarkan sekresinya ke dalam duktus tetapi mengalirkannya ke dalam darah atau fungsi endokrin (Guyton & Hall, 2009; Tjay & Rahardja, 2007).

Menurut Tjay & Rahardja (2007) dalam pankreas terdapat empat jenis sel endokrin, yaitu:

a. Sel alfa, yang memproduksi hormon glukagon

b. Sel beta, dengan banyak granula yang berdekatan membran selnya, yang berisi insulin, yang akan disekresikan dengan bantuan aliran darah diangkut ke hati.

c. Sel delta, memproduksi somatostatin

d. Sel PP, memproduksi PP (pancreatic polypeptide), yang mungkin berperan pada sekresi endokrin dan empedu.

2.7. Limpa

Limpa merupakan salah satu dari organ limpoid pertama yang muncul pada kehidupan embrio, yang aktif pada pembentukan darah selama bagian pertama fetus hidup. Fungsi ini berkurang sampai pada bulan kelima ataupun keenam hidup fetus limpa mencapai karakter yang matang tanpa aktivitas pembentukan darah (Robbins, 1962). Tubuh makhluk hidup memiliki kemampuan melawan berbagai jenis organisme atau toksin yang dapat merusak jaringan dan organ tubuh. Kemampuan ini disebut kekebalan yang merupakan hasil produksi dari jaringan limfoid di dalam tubuh (Guyton, 1977).

Fungsi utama limpa ialah menyimpan darah yang tidak ikut dalam peredaran darah. Pengeluaran darah dari limpa disebabkan oleh kontraksi alat tubuh yang dapat ditimbulkan oleh emosi, kekurangan zat asam (kenaikan kadar CO2 darah, gerak badan ataupun kehilangan darah) dan pada perangsangan nervus simpatikus pada umumnya (Ressang 1984). Selain itu, beberapa fungsi limpa bagi tubuh manusia adalah sebagai sistem pertahanan tubuh terhadap partikel atau benda asing yang masuk ke dalam darah, mendegradasi sel darah merah yang rusak, penghasil antibodi. Limpa dilindung oleh kapsula yang terdiri dari dua lapisan, yaitu lapisan jaringan penyokong dan lapisan otot halus. Melihat dari fungsi limpa sebagai pertahanan melawan penyakit serta sebagai penghancur sel-sel darah yang tidak normal. Limpa sangat beresiko terserang berbagai penyakit, mulai dari infeksi virus atau bakteri yang masuk ke dalam tubuh, racun yang mengkontaminasi sel-sel darah abnormal, maupun gangguan dari fungsi jaringan dalam organ tersebut.

Tikus memiliki suatu bagian populasi stem sel yang ada di limpa yang apabila dimasukkan ke dalam inang yang sakit dapat bermigrasi ke pankreas dan menjadi pulau-pulau yang fungsional yang dapat dapat memperbaiki kadar gula darah menjadi normal. Donor sel limpa setelah ditransfer secara intravena, ditempatkan ke pankreas inang dan akan berdiferensiasi tanpa tanpa pemasukan

sel inang ke dalam sel β (Kodama,et al.,2005)

Menurut Alexandra, et al., (2007) menyatakan bahwa, stem sel sumsum tulang dan stem sel-sel limpa pada mencit diabetes sudah dilaporkan pada penelitian sebelumnya bahwa stem sel sumsum tulang dan stem sel-sel limpa ini akan berdegenerasi untuk menghasilkan sel β pada pankreas atau sebagai sumber potensial untuk menghasilkan sel β pada pankreas akan tetapi pada mencit normal

stem sel sumsum tulang dan stem sel-sel limpanya ini tidak akan menghasilkan atau tidak akan berdegenerasi menjadi sel β pada pankreas.

Pada penelitian yang pernah dilakukan oleh Lonyai et al., (2007) menyatakan bahwa, pada mencit yang diinduksi diabetes dengan STZ, yang menyebabkan diabetes tipe-1 (kekurangan hormon insulin akibat sel β pada

pankreas rusak) dan stem sel-sel limpa ini sangat penting karena berpengaruh

2.8. Aloksan

Aloksan (2,4,5,6-tetraoxypyrimidine; 2,4,5,6-pyrimidinetetrone) merupakan suatu zat yang bersifat diabetagonik. Zat kimia yang memiliki nama lain Mesoxalylurea dan 5-Oxobarbituric acid ini mempunyai rumus kimia C4H2N2O4, yang larut

bebas dalam air. Aloksan diisolasi secara murni pada tahun 1818 oleh Brugnatelli, kemudian diberi nama oleh Friedrich Wöhler dan Justus von Liebig pada tahun 1838. Nama aloksan diambil dari kata “Allantoin” dan “Oxalsaure”atau oxaluric

acid. Aloksan merupakan analog toksik terhadap glukosa, secara selektif bisa merusak sel yang memproduksi insulin dalam pankreas pada tikus dan beberapa spesies hewan lainnya. Hal ini menyebabkan diabetes melitus yang tergantung dengan insulin yang disebut “Alloxan Diabetes” _{pada hewan ini, dengan}

karakteristik yang mirip dengan diabetes melitus tipe I pada manusia. Aloksan secara selektif bersifat toksik terhadap sel beta pankreas yang memproduksi hormon insulin karena aloksan terakumulasi di sel beta yang masuk melalui GLUT2 glukosa transporter. Aktifitas toksik aloksan pada sel beta dipicu oleh radikal bebas yang terbentuk melalui reaksi redoks (Waspandji dalam Syafira Riske, 2008). Aloksan adalah senyawa kimia tidak stabil dan senyawa hidrofilik. Waktu paruh aloksan pada pH 7,4 dan suhu 37ºC adalah 1,5 menit ( Lenzen, 2008).

Aloksan merupakan bahan kimia yang digunakan untuk menginduksi diabetes pada binatang percobaan. Pemberian aloksan adalah cara yang cepat untuk menghasilkan kondisi diabetik eksperimental (hiperglikemik) pada binatang percobaan. Aloksan dapat diberikan secara intravena, intraperitoneal, atau subkutan pada binatang percobaan. Aloksan bereaksi dengan merusak substansi esensial di dalam sel beta pankreas sehingga menyebabkan berkurangnya granula-granula pembawa insulin di dalam sel beta pankreas. Aloksan meningkatkan pelepasan insulin dan protein dari sel beta pankreas tetapi tidak berpengaruh pada sekresi glukagon. Efek ini spesifik untuk sel beta pankreas sehingga aloksan dengan konsentrasi tinggi tidak berpengaruh terhadap jaringan lain (Watkins et al., 2008; Filipponoet al., 2008).

2.9. Hewan Percobaan

Percobaan mengenai diabetes melitus dengan menggunakan hewan percobaan didasarkan pada patogenesis penyakit tersebut pada manusia, namun kondisi patologis hewan percobaan tersebut tidak sepenuhnya menggambarkan kondisi patologis secara nyata pada manusia. Hal ini disebabkan kondisi fisiologi, perbedaan patologis dari beberapa tipe diabetes melitus, ragamnya penyakit diabetes melitus, serta adanya komplikasi yang menyertai dari penyakit tersebut. Menurut Cheta (1998), berdasarkan cara pembuatannya, hewan percobaan diabetes melitus dibedakan menjadi dua yaitu: (1) terinduksi (induced), misalnya melalui pankreaktomi, senyawa kimia (diabetogenik) dan virus; (2) spontan (spontaneous), misalnya menggunakan tikus BB (bio breeding) atau mencit NOD (non-obese diabetic) yang mempunyai karakteristik yang relatif sama dengan kondisi diabetes melitus pada manusia meliputi gejala-gejala penyakit, imunologi, genetik maupun karakteristik klinik lainnya.

Mencit dipilih menjadi subjek eksperimental sebagai bentuk relevansinya pada manusia. Walaupun mencit mempunyai struktur fisik dan anatomi yang jelas berbeda dengan manusia, tetapi mencit adalah hewan mamalia yang mempunyai beberapa ciri fisiologi dan biokomia yang hampir menyerupai manusia terutama dalam aspek metabolisme glukosa melalui perantaraan hormon insulin. Disamping itu, mempunyai jarak gestasi yang pendek untuk berkembang biak (Syahrin, 2006dalamFidzaro, 2010).

BAB 3

METODOLOGI PENELITIAN

3.1. Tempat Pelaksanaan

Penelitian ini dilaksanakan dari bulan April 2012 sampai Juli 2013 di Laboratorium Struktur Hewan, Departemen Biologi, dan Laboratorium Kimia Bahan Alam, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara Medan.

3.2. Alat dan Bahan

Alat dan bahan yang digunakan dalam pemeliharaan hewan percobaan adalah: kandang hewan, timbangan digital dan mencit (Mus musculus L.) jantan. Alat dan bahan yang digunakan untuk pembuatan ekstrak adalah : rotary evaporator, botol gelap, penangas air, etanol 96%, karboksil metil selulosa (CMC). Alat dan bahan yang digunakan untuk penginduksian mencit DM dan perlakuan adalah: aloksan jenis serbuk, ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.), jarum gavage,. Alat yang digunakan untuk memeriksa kadar gula darah adalah : Glukometer (EasyTouch® GCU), EasyTouch® blood glucose test strip. Alat dan bahan yang digunakan untuk pembuatan sediaan mikrostruktur adalah : bak bedah dandissecting set, mikrotom, plat parafin, mikroskop cahaya, alkohol bertingkat, larutan Bouin, pewarna Hematoxylin dan Phloxine, Canada balsam, xylol, parafin.

3.3. Pemeliharaan Hewan Percobaan

Percobaan menggunakan mencit (Mus Musculus L.), jenis kelamin jantan yang sehat, umur mencit ± 3 bulan, belum pernah digunakan untuk percobaan lain dan mempunyai berat badan antara 25–35 g. Mencit percobaan diperoleh dari peternakan mencit enterpreneurship D tik pop, Medan. Mencit ditempatkan di dalam kandang yang terbuat dari bahan plastik ukuran (30x20x10 cm) yang ditutup dengan kawat kasa. Dasar kandang dilapisi dengan sekam padi setebal

0,5-1 cm dan diganti setiap tiga hari. Cahaya ruangan dikontrol persis 12 jam terang (pukul 06.00 sampai dengan pukul 18.00) dan 12 jam gelap (pukul 18.00 sampai dengan pukul 06.00), sedangkan suhu dan kelembaban ruangan dibiarkan berada pada kisaran alamiah. Pakan dan air minum disuplai setiap hari secara berlebihan.

3.3.1. Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan lima perlakuan dan lima kali ulangan. Jumlah hewan uji perkelompok ditentukan dengan rumus :

Pada rumus tersebut, jika adalah perlakuan (dalam penelitian 5 kelompok perlakuan), dan adalah jumlah ulangan per kelompok, maka jumlah yang di harapkan (teoriditis) adalah 5 (Fereder, 1963 dalam Fidzaro, 2010). Sehingga jumlah hewan uji untuk penelitian berjumlah 25 ekor.

Kontrol yang digunakan adalah kontrol negatif dan kontrol hiperglikemia (pemberian aloksan) 180 mg/kg bb dengan satu kali pemberian (Etuk, 2010). Sedangkan perlakuan yang diberikan adalah dengan pemberian aloksan dan diberi ekstrak biji mahoni dengan dosis yang berbeda. Ekstrak etanol biji mahoni diberikan dengan dosis bertingkat, yaitu dengan dosis 1,4 mg/kg bb dan 2,8 mg/kg bb dan 4,2 mg/bb secara oral dengan pencekokan sekali sehari selama 12 hari dengan volume pemberian 0,1 ml/ 10 g bb .

Tabel 1. Rancangan Penelitian

No Perlakuan Jumlah

mencit Keterangan

1 Kontrol negatif 5 Diberi pakan dan minum tanpa ada perlakuan

2 Kontrol positif 5 Induksi aloksan

3 P1 5 Induksi aloksan 5,04 mg + ekstrak

etanol biji mahoni dosis 1,4 mg

4 P2 5 Induksi aloksan 5,04 mg + ekstrak

etanol biji mahoni dosis 2,8 mg

5 P3 5 Induksi aloksan 5,04 mg + ekstrak

3.4. Pelaksanaan Penelitian

3.4.1. Persiapan dan pembuatan mencit DM

Mencit dibagi menjadi 2 kelompok yaitu kelompok kontrol mencit normal (tidak diabetes) dan kelompok mencit diabetes. Tikus diinduksi diabetes aloksan sebanyak 180 mg/kg BB (Etuk, 2010). Berdasarkan angka konversi, maka untuk membuat diabetes pada mencit, diinduksi aloksan 5,04 mg yang dilarutkan dalam 1 ml NaCl dan diberikan secara intraperitoneal dengan satu kali pemberian. Sebelum pemberian aloksan mencit dipuasakan selama 16 jam dan sekam dikeluarkan dari kandang, agar tidak dimakan oleh mencit (Rahim, 2008). Perlakuan fisiologis (hiperglikemia), yaitu berdasarkan pemberian volume intraperitoneal sebanyak 1 ml (Ritshel, 1974dalamSulastry, 2009)

3.4.2. Pengambilan dan pengolahan ekstrak 3.4.2.1. Pengambilan ekstrak

Pengambilan sampel dilakukan secara purposif yaitu tanpa membandingkannya dengan tumbuhan serupa dari daerah lain, sampel diambil dari hutan Tridharma Universitas Sumatera Utara. Sampel yang diambil adalah biji yang sudah tua yang telah jatuh dari pohonnya dan warna kulit biji hitam kecokelatan.

3.4.2.2. Pengolahan Ekstrak

Biji mahoni dibersihkan dari kulit yang membungkusnya, lalu ditimbang dan diperoleh berat basah, kemudian dikeringkan (tidak pada sinar matahari langsung), biji dianggap kering apabila ditumbuk tidak menggumpal lagi, kemudian diblender hingga menjadi serbuk.

3.4.2.3 . Pembuatan Ekstrak

Pembuatan ekstrak dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol 96%, cara kerjanya sebagai berikut: 500 g serbuk biji kering mahoni yang diperoleh dimasukkan ke dalam wadah botol berwarna gelap, kemudian ditambahkan pelarut etanol 96% sebanyak 2 L. Ditutup dan dibiarkan selama dua hari terlindung dari cahaya sambil diaduk, disaring sehingga dapat maseratnya. Ampas dimaserasi dengan etanol 96% sebanyak 2 L menggunakan prosedur yang

sama, maserasi dilakukan sampai diperoleh maserat yang jernih. Semua maserat etanol digabungkan dan diuapkan dengan menggunakan alat vakum putar pada temperatur sekitar 40oC sampai diperoleh ekstrak etanol kental kemudian dikeringkan menggunakan penangas air (Maksum, 2008 dalam Lumban Raja, 2009).

3.4.2.4. Pembuatan suspensi ekstrak etanol biji mahoni 2%

Sebanyak 0,5 g CMC ditaburkan dalam lumpang yang berisi akuades panas sebanyak 10 ml. Didiamkan 15 menit hingga diperoleh massa yang transparan, dan digerus hingga terbentuk gel. Kemudian ekstrak etanol biji mahoni (2 g) digerus, dan ditambahkan gel CMC sedikit demi sedikit dan terus digerus hingga terbentuk suspensi. Kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 100 ml. Volumenya dicukupkan dengan akuades 100 ml (Lumban Raja, 2009).

3.4.2.5. Pembuatan Preparat Sayatan Limpa

Pembuatan preparat limpa dilakukan dengan metode paraffin (Suntoro, 1983) dan pewarnaan Gomori (Robb, 1960), sebagai berikut:

a. Persiapan organ

Mencit (Mus musculus L.) didislokasi dan dibedah. Limpa diambil dan dicuci dengan larutan NaCl 0,9%. Limpa difiksasi selama 1 hari dengan larutan Bouin. Limpa dicuci dengan alkohol 70% dengan cara dishaker sampai jernih dan direndam selama 1 malam dengan alkohol 70 %. Dehidrasi dilakukan dengan merendam limpa sambil dishaker dengan alkohol bertingkat yaitu dari alkohol 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 96% dan 100% selama 1 jam dalam masing-masing konsentrasi. Clearing (penjernihan) dilakukan dengan merendam limpa ke dalam xylol dalam botol balsem selama 1 malam. Infiltrasi dilakukan dengan merendam limpa ke dalam xylol selama 1 jam kemudian dipindahkan ke dalam xylol yang baru yang berada di dalam oven pada suhu 560C selama 1 jam. Direndam limpa dalam parafin murni I, II, III masing-masing selama 1 jam pada suhu 560C.

b. Embedding (penanaman organ)

Limpa diletakkan pada kotak berbentuk segi empat yang telah dipersiapkan sebelumnya sebagai cetakan. Kemudian kotak-kotak tersebut

diletakkan diatas hot plate. Parafin yang telah cair dituangkan ke dalam kotak tersebut, Limpa ditanam dan diatur posisinya lalu diberi label. Dibiarkan sampai dingin dan membeku sehingga membentuk blok parafin dan dimasukkan ke dalam

freezer. Kemudian blok-blok tersebut dirapikan dengan menggunakan pisau

cutter. Blok-blok parafin diletakkan padaholderyang terbuat dari kayu berukuran 1x1 cm yang berbentuk persegi,

c. Pembuatan pita parafin

Blok parafin yang telah ditempel diholderdipotong dengan menggunakan mikrotom sehingga membentuk pita-pita parafin dengan ukuran ketebalan 6-10 µm. Pita parafin diletakkan pada objek glass, dan dicelupkan pada air dingin dan kemudian pada air hangat. Lalu diletakkan di atashot platebeberapa detik untuk merekatkan pita parafin pada objek glass dan membersihkan sebagian parafin yang melekat pada organ. Sediaan disimpan selama 2-3 hari di dalam freezer

untuk persiapan pewarnaan.

d. Pewarnaan sediaan

Sediaan limpa diwarnai dengan Pewarnaan Gomori.Deparafinasidilakukan dengan cara sediaan dicelupkan pada xylol, sampai parafin habis yaitu kira-kira selama 1 jam. Sediaan dicuci dengan air mengalir selama 15 menit lalu direndam dalam Bouin selama 16-24 jam, dicuci dalam air mengalir selama 15 menit. Kemudian pewarnaan dilakukan dengan cara sediaan dimasukkan ke dalam larutan pewarna Potassium permanganate selama 1 menit kemudian dimasukkan ke dalam Sodium Bisulfit selama 2 menit dan dimasukkan ke dalam air mengalir selama 10 menit. Sediaan dimasukkan ke dalam pewarna Chromium Hematoxilin

selama ± 30 menit, lalu direndam dalam Acid alcohol selama 1 menit. Sediaan dicuci dengan dengan air mengalir 10 menit dan direndam dalam pewarna Phloksin selama 15 menit diamati di bawah mikroskop, selanjutnya dimasukkan ke dalamakuades, lalu dimasukkan ke dalam larutan pewarna Phloksin selama 1 jam dan laru direndam dalam akuades dan dimasukkan ke dalam larutan

Phospotungstic acidselama 1 menit kemudian dicuci dalam air mengalir selama 7 menit dan kemudian preparat dimasukkkan berturut-turut ke dalam alkohol 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 96%, dan alkohol absolut, lalu direndam dalam xylol selama 2-3 malam. Sediaan dimounting dengan menutup preparat dengan

canada balsam, diusahakan supaya tidak terdapat gelembung udara dan diberi label lalu diamati di bawah mikroskop.

3.5. Parameter Pengamatan

3.5.1. Pengukuran Kadar Gula Darah Mencit

Pengukuran kadar gula darah mencit diukur dengan menggunakan glukometer pada hari ke-1, ke-4, dan k e-16. Pengambilan darah dilakukan pada pembuluh darah ekor hewan coba. Mencit dikatakan DM bila KGD≥ 200 mg/dl. Jika kadar glukosa mencit menunjukkan kenaikan yang berarti, maka diujikan ekstrak biji mahoni, tetapi jika belum menunjukkan kenaikan yang berarti, maka diinduksi aloksan kembali sampai menunjukkan kenaikan yang berarti.

3.5.2. Pengukuran Berat Badan

Mencit ditimbang dengan menggunakan timbangan digital sebelum dan sesudah diberi perlakuan, untuk melihat perubahan yang terjadi pada berat badan mencit pada masing-masing perlakuan.

3.5.3. Pengamatan Histologis Limpa

Pengamatan mikrostruktur limpa modifikasi dari Prasetiyo et al., (2010). Preparat histologis limpa diamati di bawah mikroskop cahaya untuk mengetahui perubahan yang terjadi pada limpa dilakukan melalui penghitungan tingkat kerusakan limpa pada lima luas bidang pandang yang berbeda, dengan perbesaran 40 x 10 kali setiap satu ekor mencit.

3.6. Analisis Statistik

Data yang didapat dari setiap parameter (variabel) pengamatan dicatat dan disusun ke dalam bentuk tabel. Data kuantitatif (variabel dependen) yang didapatkan, diuji kemaknaannya terhadap pengaruh kelompok perlakuan (variabel independen) dengan bantuan program statistik komputer yakni program SPSS release 15. Urutan uji untuk berat pankreas diawali dengan uji normalitas dan uji homogenitas. Apabila hasil uji menunjukkan p<0,05 maka data tersebut ditransformasi dan dilanjutkan dengan uji non parametrik. Untuk melihat perbedaan dari 2 perlakuan dilanjutkan uji Mann-Whitney. Apabila hasil uji normalitas dan uji homogenitas menunjukkan p>0,05 maka dilanjutkan uji sidik

ragam (ANOVA) satu arah untuk data dengan pengamatan berulang (lebih dari 2 kali) atau lebih dari 2 perlakuan. Jika berbeda nyata (p<0,05) maka dilanjutkan dengan uji analisis Post Hoc-Bonferroni taraf 5%. Sebagai sumber keragaman dari uji sidik ragam (ANOVA) yaitu perbedaan pengamatan berat limpa berdasarkan perbedaan konsentrasi perlakuan yang diberikan. Kemudian data skor tingkat kerusakan limpa dianalisis dengan non-parametrik Kruskal Wallis

(membedakan >2 perlakuan) dan uji Mann-Whitney (membedakan 2 perlakuan) pada taraf 5%.

BAB 4

HASIL DAN PEMBAHASAN

Dari penelitian yang telah dilakukan terhadap efek hipoglikemia ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) pada mencit yang diinduksi diabetes dengan aloksan diperoleh hasil sebagai berikut:

4.1. Pengaruh ekstrak biji mahoni (Swietenia mahogani Jack.) terhadap kadar gula darah pada mencit yang diindulsi diabetes dengan aloksan 4.1.1. Grafik rerata Kadar Gula Darah (KGD) hari ke-1 yang dipuasakan

Hasil pengamatan terhadap rerata kadar gula darah mencit pada hari pertama dimana mencit dipuasakan selama kurang lebih 16 jam, yang kemudian akan diinduksi diabetes dengan aloksan menunjukkan adanya pengaruh terhadap penurunan KGD mencit. Secara statistik, perlakuan mencit yang dipuasakan menyebabkan penurunan KGD yang berbeda nyata (P<0,05) pada KP, P1 dan P3 dibandingkan dengan KN. Sedangkan jika dibandingkan dengan P2, KN memiliki penurunan yang tidak berbeda nyata. Dari data dapat dilihat bahwa rata-rata jumlah KGD pada KN (128,8); KP(76,6); P1(71,4); P2(93,2) dan P(72,6). Hasil selengkapnya disajikan pada Gambar 2.

Gambar 2. Kadar Gula Darah Mencit pada hari ke-1. Keterangan: KN=Kontrol Negatif (Kontrol Normal); KP= Kontrol Positif (Kontrol DM), P1= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 1,4 mg/kg BB; P2= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 2,8 mg/kg BB; P3= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 4,2 mg/kg BB

Penurunan KGD yang dialami oleh mencit tersebut kemungkinan disebabkan oleh perbedaan pola makan setiap mencit perlakuan. Mencit KN kemungkinan mengkonsumsi makanan dalam jumlah yang lebih banyak dibandingkan dengan mencit pada kelompok yang akan diperlakukan. Menurut Niza (2013), mengatur pola makan atau diet yang tepat sangat penting bagi penderita diabetes. Walaupun berolahraga juga penting, namun makanan yang dikonsumsi merupakan faktor paling penting dalam mengontrol diabetes.

4.1.1. Data Rerata KGD hari ke-4

Hasil pengamatan terhadap rerata kadar gula darah mencit pada hari keempat dimana mencit sudah diinduksi diabet dengan aloksan pada hari pertama menunjukkan bahwa aloksan berpengaruh terhadap peningkatan KGD. Secara statistik pemberian aloksan menyebabkan peningkatan KGD yang nyata (P<0,05) pada KP, P1, P2 dan P3 dibandingkan dengan KN. Dari hasil statistik menunjukkan bahwa KP mengalami peningkatan yang berbeda nyata jika dibandingkan dengan P1, namun pada P2 dan P3 menunjukkan peningkatan yang tidak berbeda nyata jika dibandingkan dengan KP. Perlakuan P1 menunjukkan peningkatan yang tidak berbeda nyata jika dibandingkan dengan P2 dan P3. Dari data dapat dilihat rata-rata KGD pada KP(254,8), P1(261,4), P2(250,4), P3(187,2) yang mengalami peningkatan yang nyata jika dibandingkan dengan KN (145,4 mg/dl). Hasil selengkapnya disajikan pada Gambar 3.

Gambar 3. Kadar Gula Darah Mencit pada hari ke-4. Keterangan: KN=Kontrol Negatif (Kontrol Normal); KP= Kontrol Positif (Kontrol DM), P1= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 1,4 mg/kg BB; P2= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 2,8 mg/kg BB; P3= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 4,2 mg/kg BB

Dari Gambar 3. di atas menunjukkan bahwa secara keseluruhan rerata KGD mencit mengalami peningkatan jika dibandingkan dengan hari ke-1. Hal ini mungkin disebabkan oleh penginduksian aloksan yang dapat meningkatkan KGD mencit dimana diduga bahwa aloksan dapat menghasilkan radikal bebas yang dapat menghambat sistem kerja pankreas sebagai penghasil insulin. Menurut Yuriska (2009), meningkatnya kadar glukosa darah pada pemberian aloksan diduga dapat disebabkan oleh dua proses yaitu terbentuknya radikal bebas dan kerusakan permeabilitas membran sel sehingga terjadi kerusakan sel beta pankreas yang berfungsi menghasilkan insulin.

Menurut Watkins et al., (2008) dan Filippono et al. (2008), aloksan bereaksi dengan merusak substansi esensial di dalam sel beta pankreas sehingga menyebabkan berkurangnya granula-granula pembawa insulin di dalam sel beta pankreas. Aloksan meningkatkan pelepasan insulin dan protein dari sel beta pankreas tetapi tidak berpengaruh pada sekresi glukagon. Efek ini spesifik untuk sel beta pankreas sehingga aloksan dengan konsentrasi tinggi tidak berpengaruh terhadap jaringan lain. Hal ini disebabkan oleh aloksan dapat merusak secara selektif sel-sel yang terdapat pada pankreas sehingga menyebabkan berkurangnya insulin yang berperan sebagai sentral dalam pengaturan konsentrasi glukosa darah (Szkudelski, 2001).

Peningkatan KGD yang diamati dari hasil penelitian bervariasi. Salah satu faktornya adalah adanya daya tahan individu tikus yang berbeda terhadap aloksan sehingga menyebabkan kondisi awal keadaan diabetes tidak seragam (Kim et al.,

2006), Perbedaan KGD yang terdapat di antara masing-masing perlakuan mungkin disebabkan oleh perbedaan respon masing-masing mencit terhadap penyuntikan aloksan. Menurut Setiawan (2010), respon tubuh masing-masing tikus putih tidak sama terhadap penyuntikan aloksan. Peningkatan kadar gula darah yang bervariasi ini mungkin disebabkan oleh faktor endogen masing-masing tikus putih yang bersifat individual dan banyak dipengaruhi oleh beberapa faktor non fisik dan lingkungan

4.1.2. Data rerata KGD hari ke-16 setelah pemberian ekstrak etanol biji mahoni

Hasil pengamatan terhadap rerata kadar gula darah mencit pada hari ke 16 setelah pemberian ekstrak biji mahoni setiap hari yang dimulai dari hari kelima perlakuan berpengaruh terhadap penurunan KGD mencit diabetes. Dari hasil uji statistika menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji mahoni pada dosis P1 dan P3 memberikan pengaruh yang nyata (P<0,05) dibandingkan dengan KP dalam menurunkan kadar gula darah mencit diabetes, dan pada P2 dapat menurunkan KGD mencit diabetes secara tidak nyata bila dibandingkan dengan KP. Sedangkan jika dibandingkan dengan KN, P1, P2 dan P3 menunjukkan penurunan KGD yang berbeda nyata. Dari data dapat dilihat hasil bahwa rata-rata KGD pada KN (127,6); KP(263,2); P1(184,4); P2(213,6); P3(161,6). Hasil selengkapnya disa jikan pada Gambar 4.

Gambar 4. Kadar Gula Darah Mencit pada hari ke-16. Keterangan: KN=Kontrol Negatif (Kontrol Normal); KP= Kontrol Positif (Kontrol DM), P1= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 1,4 mg/kg BB; P2= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 2,8 mg/kg BB; P3= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 4,2 mg/kg BB Dari hasil pengamatan di atas dapat kita lihat bahwa terjadi penurunan KGD mencit perlakuan. Dosis optimal yang dapat menurunkan KGD yaitu pada dosis 1,4 mg/kg BB. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji mahoni dapat menurunkan KGD mencit diabetes yang kemungkinan disebabkan oleh senyawa yang dikandung oleh ekstrak biji mahoni dapat menghasilkan antioksidan yang dapat mencegah radikal bebas. Penurunan KGD yang dialami oleh masing-masing perlakuan kemungkinan disebabkan oleh ekstrak biji mahoni yang mengandung senyawa flavonoid (Hariana, 2007dalamLumban Raja, 2008).

Menurut Djuanda (2011), senyawa aktif flavonoid yang terkandung di dalam buah makasar diduga mempunyai peran dalam memulihkan kerusakan pada pankreas. Pada penelitian ini pemberian aloksan merupakan hal yang cepat untuk membuat kondisi diabetes (hiperglikemik) pada hewan percobaan. Efek diabetogenik aloksan ini dapat dicegah oleh senyawa penangkap radikal hidroksil, pernyataan ini juga sesuai dengan penelitian (Ocktarini, 2010) menyatakan bahwa hiperglikemia juga terlibat dalam proses pembentukan radikal bebas oleh karena itu kandungan senyawa kimia flavonoid pada biji mahoni yaitu sebagai antioksidan sangat berpengaruh dalam penangkapan radikal bebas.

Penurunan kadar gula darah seperti hal tersebut di atas sama halnya dengan hasil penelitian yang berjudul pengaruh pemberian graecum dan gambaran yang terpapar ekstrak biji kablet (Trigonella foenum) terhadap kadar glukosa darah dan histologi pankreas mencit induksi streptozotocin (Fidzaro, 2010).

4.2. Data rerata berat badan mencit setelah pemberian ekstrak etanol biji mahoni

Pemberian ekstrak etanol biji mahoni tidak berpengaruh (P>0,05) terhadap berat badan mencit. Pemberian ekstrak etanol biji mahoni tidak dapat meningkatkan berat badan mencit pada kelompok P1, P2 dan P3. Dari hasil analisis statistik menunjukkan bahwa tidak ada perbedaan yang nyata terhadap peningkatan berat badan mencit antara KN dibandingkan dengan KP, P1, P2 dan P3. Dari data dapat dilihat bahwa rata-rata berat badan pada KN (31,8), KP(32,2), P1(30,8), P2(29,6), P3(28,9).

Table 2. Data rerata berat badan

NO PERLAKUAN BERAT BADAN

1 KN 31,814 ± a

2 KP 32,224 ± a

3 P1 30,81 ± a

4 P2 29,668 ± a

5 P3 28,928 ± a

Dari Tabel 2 di atas diperoleh bahwa ekstrak biji mahoni berbeda secara tidak nyata terhadap berat badan mencit antara masing-masing perlakuan. Hasil

analisis selengkapnya disajikan pada lampiran analisis statistik pada halaman 53. Hal ini berbeda dengan hipotesis awal yang harapannya bahwa pemberian ekstrak biji mahoni dapat memperbaiki berat badan mencit sama seperti proses pemulihan kadar gula darah mencit. Hal ini mungkin disebabkan oleh kandungan ekstrak etanol biji mahoni memiliki kemampuan untuk menurunkan berat badan, yang juga didukung oleh penurunan berat badan mencit akibat diabetes.

Menurut Ganong (2003), efek hiperglikemia dapat menimbulkan gejala yang terjadi akibat hipermolaritas darah dan terjadi glikosuria (kehilangan banyak cairan). Dehidrasi yang terjadi mengaktifkan mekanisme yang mengatur asupan air sehingga timbul polidipsia. Terjadi pengeluaran Na+dan K+melalui urin yang juga cukup banyak. Untuk setiap gram glukosa yang dikeluarkan, tubuh kehilangan 4,1kkal. Peningkatan asupan kalori untuk menutupi pengeluaran ini akan menyebabkan peningkatan gukosa plasma lebih lanjut dan memperparah glukosuria, sehingga mobilisasi protein endogen dan simpanan lemak serta penurunan berat tidak terhambat.

4.3. Gambaran mikrostruktur limpa mencit pengaruh ekstrak etanol biji mahoni

Limpa merupakan suatu organ yang berperan sebagai stem sel bagi sel β

pankreas yang dapat memperbaiki penghasilan insulin bagi penderita DM (Kodama et al., 2005). Pada penelitian ini, dengan menggunakan pewarnaan Gomori dan perbesaran 400x, pada sediaan limpa belum didapatkan sel yang spesifik berperan sebagai stem sel pankreas, akan tetapi gambaran mikrostruktur yang terlihat adalah sekelompok penumpukan sel yang menunjukkan adanya infeksi pada jaringan yang sering disebut dengan sel raksasa (Yanet al., 2008).

Sel raksasa di dalam limpa dibentuk sebagai pertahanan tubuh untuk radikal bebas. Adanya radikal bebas di dalam tubuh akan mengakibatkan terjadinya reaksi oksidasi yaitu untuk penangkapan radikal bebas sehingga akan terjadi pengurangan radikal bebas di dalam tubuh, oleh karena itu, senyawa aloksan mungkin berpengaruh terhadap kerusakan limpa karena mempengaruhi sistem imunitas di dalam tubuh. Oleh karena itu, masuknya benda asing kemungkinan akan menyebabkan meningkatnya pembentukan jumlah sel raksasa

pada limpa sebagai pertahanan bagi tubuh atau antibodi untuk mengurangi radikal bebas. Salah satu organ yang berperan dalam sistem kekebalan tubuh adalah limpa. Selain berfungsi sebagai pertahanan dalam melawan mikroorganisme, limpa juga merupakan tempat utama destruksi sel-sel eritrosit tua oleh makrofag dan dapat bereaksi terhadap antigen-antigen yang dibawa dan memfiltrasi darah secara imunologis (Irawan, 2006). Hasil lebih jelas terdapat pada Gambar 5.

SR SR

SR

SR

Gambar 5.Gambaran Mikrostruktur Limpa Mencit (Mus musculus L.) yang Dipengaruhi oleh Pemberian Ekstrak Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahogani Jack.). Pewanaan Gomori dan Perbesaran 4x10. Keterangan: SR: Sel Raksasa, KN= kontrol Negatif (Kontrol Normal); KP= Kontrol Positif (Kontrol DM); P1=Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 1,4 mg/kg BB; P2= Diabetes+ekstrak etanol biji mahoni 2,8 mg/kg BB.

Limpa sebagai organ limfoid sekunder terbesar mengandung bermacam-macam sel-sel imunitas. Peningkatan jumlah sel-sel tersebut tercermin dari

KN KP

perubahan struktur limpa itu sendiri, baik secara makroskopis atau mikroskopisnya (Prasetyoet al., 2010).

Menurut Efendi (2003), apabila cukup dirangsang sel-sel dapat bertumbuh besar, membentuk sel epiteloid (yn epi=diatas + th ele = putting + eidos = seperti sel) atau beberapa melebur menjadi sel datia (sel raksasa) multinukleus, jenis-jenis sel yang ditemukan dalam keadaan patologis.

4.4. Tingkat perbandingan jumlah sel raksasa yang terdapat pada Limpa masing-masing perlakuan

Hasil pengamatan terhadap jumlah sel raksasa pada masing-masing perlakuan menunjukkan bahwa pemberian ekstrak etanol biji mahoni berpengaruh terhadap peningkatan jumlah sel raksasa. Pemberian ekstrak etanol biji mahoni dapat meningkatkan jumlah sel raksasa yang signifikan (P<0,05) pada dosis P1, P2 dan P3 bila dibandingkan dengan perlakuan KN. Pada perlakuan penginduksian aloksan juga dapat menyebabkan peningkatan jumlah sel raksasa yang tidak berbeda nyata dibandingkan dengan perlakuan kontrol normal (KN). Dari data dapat dilihat hasil rata-rata jumlah sel raksasa pada KN(28), KP(56), P1(61), P2(66), P3(67). Hasil selengkapnya disajikan pada Gambar 6.

Gambar 6. Tingkat Kerusakan Mikrostruktur Limpa yang dilihat dari jumlah sel raksasa pada masing-masing perlakuan ; KN=Kontrol blank (tanpa pemeberian perlakuan), KP= Kontrol diabetes (diinduksi aloksan), dan P1, P2,P3 (diinduksi aloksan dan diberi ekstrak biji mahoni dengan dosis bertingkat 1,4 mg, 2,8 mg, 4,2 mg.

Berdasarkan Gambar 5 tersebut di atas dapat dilihat bahwa pemberian aloksan dapat meningkatkan jumlah sel raksasa pada mencit secara tidak nyata. Hal ini mungkin disebabkan oleh diinduksikannya aloksan ke dalam tubuh mencit

yang mempengaruhi sel-sel beta dalam pankreas tidak mampu secara normal menghasilkan insulin yang akan mengubah gula darah menjadi gula otot. Sehingga hal itu menyebabkan organ tubuh yang lain pun seperti limpa menjadi bekerja tidak normal dan untuk mengantisipasinya, maka sel-sel yang terdapat dalam limpa membentuk sel-sel raksasa.

Menurut Efendi (2003), bila cukup dirangsang sel-sel ini dapat bertumbuh besar, membentuk sel epiteloid (yn epi=diatas + thele = putting + eidos = seperti sel) atau beberapa melebur menjadi sel datia (sel raksasa) multinukleus, jenis-jenis sel yang ditemukan dalam keadaan patologis.

Sel raksasa di dalam limpa dibentuk sebagai pertahanan tubuh untuk radikal bebas yang berasal dari virus, bakteri, jamur maupun senyawa kimia. Adanya radikal bebas di dalam tubuh akan mengakibatkan terjadinya reaksi oksidasi yaitu untuk penangkapan radikal bebas sehingga akan terjadi pengurangan radikal bebas di dalam tubuh, oleh karena itu, senyawa aloksan mungkin berpengaruh terhadap kerusakan limpa karena mempengaruhi sistem imunitas di dalam tubuh. Oleh karena itu, masuknya benda asing kemungkinan akan menyebabkan meningkatnya pembentukan jumlah sel raksasa pada limpa sebagai pertahanan bagi tubuh atau antibodi untuk mengurangi radikal bebas. Salah satu organ yang berperan dalam sistem kekebalan tubuh adalah limpa. Selain berfungsi sebagai pertahanan dalam melawan mikroorganisme, limpa juga merupakan tempat utama destruksi sel-sel eritrosit tua oleh makrofag dan dapat bereaksi terhadap antigen-antigen yang dibawa dan memfiltrasi darah secara imunologis (Irawan, 2006).

Pada pemberian ekstrak biji mahoni yang ditunjukkan pada perlakuan P1, P2 dan P3 jumlah sel raksasa juga meningkat bila dibandingkan dengan kontrol negatif maupun kontrol positif. Hal ini kemungkinan disebabkan oleh waktu dari penginduksian biji mahoni yang kurang efektif dalam pemulihan sel raksasa tersebut. Kemungkinan membutuhkan waktu yang lebih efektif lagi untuk pemulihan jumlah sel raksasa tersebut

BAB 5

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa: a. Ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogany Jack.) dapat menurunkan

kadar gula darah namun tidak dapat meningkatkan berat badan mencit (Mus musculusL.) yang telah diinduksi diabetes dengan aloksan.

b. Dosis ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogany Jack.) yang memberi efek penurunan kadar gula darah pada mencit diabetes adalah 1,4 mg/kgBB. c. Pengaruh ekstrak etanol biji mahoni (Swietenia mahogany Jack.) terhadap

gambaran mikrostruktur limpa mencit diabetes yang teramati adalah meningkatkan jumlah sel raksasa. Sejauh ini belum dapat dipastikan hubungan

pemberian tersebut dengan perbaikan sel β pankreas.

5.2 Saran

Diharapkan penelitian lebih lanjut untuk meningkatkan lamanya waktu dan konsentrasi pemberian ekstrak biji mahoni (Swietenia mahogany Jack.) pada mencit untuk mengetahui waktu yang efektif dari ekstrak biji mahoni dalam memulihkan gambaran histologis limpa.

DAFTAR PUSTAKA

Agus. 2009.Biji Mahoni Enyahkan Hipertensi. Diakses 16 Februari 2012.

Ale xandra, E. Huang, A. Rao, N. Bhushan, A. Hogan, J. Rizza, Rand and Butler, P. 2007. [Hematopoietic Stem Cells Derivid From Adult Donors Are Not

a Source of Pancreatic β In Adult Nondiabetic Human]. Department of Phatology and Laboratory Medicine. University of California Los Angeles. California.Diabetes.56: 1810-1816.

Almatsier S. Karbohidrat. Dalam: Prinsip dasar ilmu gizi. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama, 2004 : 28–47.

Anindhita. 2009. Efek Aloksan Terhadap Kadar Glukosa Darah Tikus Wistar. Fakultas Kedokteran. [Skripsi]. Universitas Diponegoro. Semarang.

Beaglehole, R., Unwin, N., Marlin and Roglic, G. 2004. Diabetes Action Now.

World Health Organization: Switzerland.

Burhani, R. 2011. “Penderita Diabetes Meningkat 2-3 kali pada 2030”. Antara NewsSenin, 14 November 2011.

Cheta D. 1998. Animal models of type I (insulin-dependent) diabetes melitus.

Journal of Pediatric Endocrinology & Metabolism11:11-19.

Ching, J. M. 2010. Potensi antihiperglikemia ekstrak Kulit Kayu Mahoni (Swietenia Macrophylla King) Pada tikus yang Diinduksi Aloksan. [Skripsi]. Fakultas Matetatika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Bogor

Djuanda, A. 2011. Potensi Fraksi Air Buah Makasar (Brucea javanica (L.) Merr) terhadap Gambaran Histopatologi Pankreas Tikus yang Diinduksi Aloksan. [Skripsi]. Departemen Biokimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor. Bogor.

Drury, 1986. M. Diabetes Melitus. Second Edition. London: Billing and Sons. Efendi. 2003. Daya Fagositosis Makrofag Pada Jaringan Longgar Tubuh. Fakultas

Kedokteran: Universitas Sumatera Utara.

Eroschencko, V. 2010. Atlas Histologi diFiore. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Etuk. E. U. 2010. Animals Model for Studying Diabetes Melitus.Agriculture and Biology Journal Of North America.1(2):130-134

Filipponi P, Gregorio F, Cristallini S, Ferrandina C, Nicoletti I and Santeusani F. 2008. Selective impairment of pancreatic A cell suppreession by glucose durin acute alloxan – induced insulinopenia: in vitro study on isolated perfused ratpancreas. Diakses pada 21 Desember 2011.

Fidzaro. 2010. Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji Kablet (Trigonella foenum graecum L) Terhadap Kadar Glukosa Darah Dan Gambaran Histologi Pankreas Mencit (Mus musculus) Yang Terpapar Streptozotocin. [Skripsi]. Fakultas Sains dan Teknologi UIN Maulana Malik Ibrahim. Malang.

Ganong, W. F. 1998. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Edisi XXII. Jakarta: Penerbit EGC. Hal. 347-348

Gunawan, D. dan Mulyani, S. 2004. Ilmu Obat Alam (Farmakognosi). Penebar Swadaya, Jakarta.

Guyton, A. 1990. Fisiologi Manusia dan Mekanisme Penyakit. Edisi III. Jakarta: Penerbit EGC.

Guyton dan Hall. 2009. Fisiologi Kedokteran.Edisi 11. Jakarta: Penerbit EGC. Irawan, B. 2006. Gambaran Histopatologik Limpa Tikus Wistar yang Diinduksi

Karsinogenesis Kolon dan Induksi Karsinogenesis Kolon plus Diet

Amorphophallus Onchopyllus.Universitas Diponegoro. Semarang.

Khasiat Mahoni sebagai Penurun Tekanan Darah Tinggi (Hipertensi

).

31 Agustus 2011.file:///D:/diabet/khasiat-mahoni-sebagai-penurun-tekanan.html.

Kim, S., S. Jun Seop, K. Hyun Jung, K. C. Fisher, L. Mi-Ji Kim,S., S. and K. C. Han-WHA. 2007. Streptozotocin Induced Diabetes can be Reversed by Hepatic Oval Cell Activation Through Hepatic Transdifferentiation and Pancreatic Islet Regeneration.Lab. Investigation87: 702-712.

Kirana, L. 2008. Hewan Uji dalam Eksperimen Farmakologi. Jurnal Metode Farmakologi dan ToksikologiInstitut Teknologi Bandung.

Kodama S., Miriam D., and Faustman., 2005. Regenerative medicine: a radical reappraisal of the spleen.Molecular article. 10(10): 252-255.

Kumar, E.K, Ramesh, A. And Kasiviswanath, R. 2005. Hypoglicemic and Antihipoglycemis. Effect of Gmelina asiatica Linn. in normal and in Alloxan Induced Diabetic Rats. Andhra Pradesh: Departemen of Pharmaceutical Science. Page 729.

Lenzen S. 2008. The mechanism of alloxan and streptozotocin induced diabete. Diakses pada 21 Desember 2011.

Lonyai, A. Kodama, S. Burger, Davis, Faustman. 2008. The Promise of Hox 11+ Stem Cells of The Spleen For Treating Autoimmune Disease. Horm Metab Res.40: 137–146

Lumban Raja, L. 2009. Uji Efek Ekstrak Etanol Biji Mahoni(Swietenia mahagoni, Jack) terhadap Penurunan Kadar Gula Tikus Putih. [Skripsi]. Fakultas Farmasi, Universitas Sumatera Utara, Medan.

Nafri, E. 2007.MahoniSebagai Pohon Pelindung. Palembang: Dinas Pertanian. Nur, P. 2001. Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Ciplukan (Physalis minima L.) terhadap

Jumlah Sel Endotel Pada Pembuluh Darah Tikus(Rattus norvegicusstrain Wistar)Diabetes Melitus yang Diinduksi STZ. [Skripsi]. Fakultas Farmasi. Universitas Muhammadyah. Surakarta.hal 2-4.

Ocktarini, R. 2010. Pengaruh Ekstrak Herba Anting-Anting (Acalypha australis

l.) Terhadap Kadar Glukosa Darah Mencit balb/c Induksi Streptozotocin.

[Skripsi]. Universitas Sebelas Maret. Surakarta.

Perkumpulan Endokrinologi Indonesia. Konsensus pengelolaan dan pencegahan diabetes melitus tipe 2 di Indonesia. 2006. Jakarta : PB.Perkeni.

Prasetiyo, W., Noor, Y. dan Awal, P. 2010. Gambaran Histopatologik Limpa Tikus Wistar Yang Diberi Diet Selulosa Dan Diinduksi Karsinogenesis Kolon.Media Medika Muda.4:11-18.

Rahim, R. 2008. Pengaruh Pemberian Minyak Jinten Hitam (Nigella sativa) Terhadap Motilitas Spermatozoa Mencit Diabetes Melitus Yang Diinduksi aloksan. [Skripsi]. Universitas Diponegoro. Semarang.

Riyadi, S. dan Sukarmin. 2008. Asuhan Keperawatan pada Pasien dengan Gangguan Eksokrin dan Endokrin pada Pankreas. Edisi Pertama. Jakarta: Penerbit Graha Ilmu.

Rizmahardian Ashari Kurniawan 2008. Kaitan antara Metabolisme Karbohidrat dan Diabetes Melitus. [Skripsi]. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Pontianak, Pontianak.

Robb, The Development of Islet of Langerhans in The Human Fetus.Exp Physiol.

Edinburg University. Scotlandia.

Setiawan, 2011. Pengaruh Pemberian Ekstrak Kelopak Bunga Rosela (Hibiscus sabdariffa l) terhadap Penurunan Kadar Gula Darah Tikus putih (Rattus norvegicus) yang Diinduksi Aloksan. [Skripsi]. Fakultas Kedokteran. Universitas Sebelas Maret, Surakarta.

Soehadi, K. 1996.Diabetes.Surabaya : Airlangga University Press. hal. 1.

Stryer L. alih bahasa Sadikin Mohamad dkk. 2000. Glikolisis. Dalam: Biokimia. Jakarta : penerbit Buku Kedokteran EGC

Suharyanto, E. 2010. 18 Februari 2012. Manajemen Diabetes.

Sulastri, F. 2009. Uji Toksisitas Akut yang Diukur dengan Penentuan LD50

Ekstrak Daun Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban ) terhadap Mencit

Balb / C. [Skripsi]. Fakultas Kedokteran. Universitas Diponegoro. Semarang.

Suntoro, S.H. 1983. Metode Pewarnaan. Jakarta: Bhrarata Karya Aksara. hal. 11, 48-72.

Suryowinoto, S. 1997. Tanaman Peneduh.Yogyakarta: Penerbit Kanisius.

Syafira. 2009. Efek diet rumput laut eucheuma sp. Terhadap Jumlah trombosit tikus wistar yang disuntik Aloksan. [Skripsi]. Fakultas Kedokteran. Universitas Diponegoro. Semarang.

Syaifuddin. 2009. Fisiologi Tubuh Manusia. Edisi 2. Jakarta : Penerbit Salemba Medika. hal. 168-169

Szkudelski T. 2001. The Mechanism Of Alloxan And Streptozotocin Action In B Cells Of The Rat Pancreas. Physiol. Res.50: 536-546.

Tjay. T.H., Rahardja, K.007. Obat-Obat Penting: Khasiat, Penggunaan dan Efek-efek Samping. Edisi VI. Jakarta: Elex Media Komputindo. hal. 738-740 Tjitrosoepomo, G. 2000. Taksonomi Tumbuhan Spermatophyta. Jogjakarta:

UGM.

Watkins D, Cooperstein SJ, and Lazarow A. 2008. Effect of alloxan on permeability of pancreatic islet tissue in vitro.Diakses pada 21 Desember 2011.

Yan, Chenghong Peng, Weiping Yang, Chenghua Wu, Jiazeng Ding, Ting Shi, and Hongwei Li. 2008. Inflammatory pseudotumour of the spleen: report of 2 cases and literature review. Canadian Medical Association. (51) 1: 75-76.

Lampiran B. Tabel Konversi Perhitungan Dosis untuk Berbagai Jenis Hewan dan Manusia (berdasarkan luas permukaan tubuh)

Mencit 20 g Tikus 200g Marmut 400 g Kelinci 2 kg Kucing 2 kg Kera 4 Kg Anjing 12 Kg Manusia 70 Kg Mencit 20 g

1,0 7,0 12,25 27,8 29,7 64,1 124,2 387,9

Tikus 200g

0,14 1,0 1,74 3.9 4,2 9,2 17,8 56,0

Marmut 400 g

0,08 0,57 1,0 2,25 2,4 5,2 10,2 31,5

Kelinci 2 kg

0,04 0,25 0,44 1,0 1,08 2,4 4,5 14,2

Kucing 2 kg

0,03 0,23 0,41 0,92 1,0 2,2 4,1 13,0

Kera 4 Kg

0,016 0,11 0,19 0,42 0,45 1,0 1,9 6,1

Anjing 12 Kg

0,008 0,06 0,10 0,22 0,24 0,52 1,0 3,1

Manusia 70 Kg

0,0036 0,018 0,031 0,07 0,076 0,16 0,32 1,0

Sumber : Percobaan Hewan Laboratorium (Soehardjono, 1993 dalam Wibowo, 2009)

Lampiran C. Penentuan Dosis Aloksan

Pada peneliatian ini dengan menggunakan metode Etuk (2009), yaitu dengan menggunakan aloksan dengan dosis 180 mg/kg bb pada tikus untuk menginduksi diabetes melitus.

Faktor konversi dosis untuk tikus dengan berat badan 200 g pada mencit dengan berat badan 20 g adalah 0,14.

Dosis untuk mencit dengan berat 20 g adalah =

=

= 36 mg x 0,14 = 5,04 mg

Lampiran D. Penentuan Dosis Ekstrak

Pada penelitian ini dengan menggunakan metode Lumban Raja (2009), yaitu dengan menggunakan ekstrak etanol biji mahoni dengan dosis bertingkat, yaitu 50mg/kg bb, 100mg/kg bb, 150mg/kg bb yang diberikan pada tikus.

Faktor konversi dosis untuk tikus dengan berat badan 200 g, pada mencit dengan berat badan 20 g adalah 0,14.

Dosis 1 untuk mencit dengan 20 g = 1,4 mg =

=

=10 mgx0,14 =1,4 mg

Dosis 2 untuk mencit dengan 20 g = 2,8 mg =

=

=20 mgx0,14 =2,8 mg

Dosis 3 untuk mencit dengan 20 g = 4,2 mg =

=

=30 mgx0,14 =4,2 mg

P3 _{5 8,00 40,00}

Total 10

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U ,000

Wilcoxon W _15,000

Z -2,660

Asymp. Sig. (2-tailed) _,008 Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] ,008(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

Jumlah_Giant_Cell KP _{5 5,30 26,50}

P1 5 5,70 28,50

Total 10

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U _11,500

Wilcoxon W 26,500

Z -,210

Asymp. Sig. (2-tailed) _,834 Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] ,841(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

Jumlah_Giant_Cell KP _{5 5,10 25,50}

P2 5 5,90 29,50

Total ₁₀

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U _10,500

Wilcoxon W 25,500

Z _-,419

Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] ,690(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

Jumlah_Giant_Cell KP _{5 5,20 26,00}

P3 5 5,80 29,00

Total 10

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U 11,000

Wilcoxon W _26,000

Z -,317

Asymp. Sig. (2-tailed) _,751 Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] ,841(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

Jumlah_Giant_Cell P1 5 5,40 27,00

P2 _{5 5,60 28,00}

Total 10

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U 12,000

Wilcoxon W _27,000

Z -,105

Asymp. Sig. (2-tailed) _,916 Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] 1,000(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

Jumlah_Giant_Cell P1 _{5 5,60 28,00}

Total ₁₀

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U _12,000

Wilcoxon W 27,000

Z _-,106

Asymp. Sig. (2-tailed) ,915 Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] 1,000(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

NPar Tests

Mann-Whitney Test

Ranks

Perlakuan N Mean Rank Sum of Ranks

Jumlah_Giant_Cell P2 5 5,50 27,50

P3 _{5 5,50 27,50}

Total 10

Test Statistics(b)

Jumlah_Giant_ Cell

Mann-Whitney U _12,500

Wilcoxon W 27,500

Z _,000

Asymp. Sig. (2-tailed) 1,000 Exact Sig. [2*(1-tailed

Sig.)] 1,000(a)

a Not corrected for ties. b Grouping Variable: Perlakuan

Lampiran J. Alur Penelitian

Pemeliharaan mencit

Puasa ± 16

Diberi diet

standar

Induksi

aloksan 180

mg/kg BB

Induksi

aloksan 180

mg/kg BB +

ekstrak

etanol

biji

mahoni

dosis

50

mg/kg BB

Induksi

aloksan 180

mg/kg BB +

ekstrak

etanol biji

mahoni

dosis 100

mg/kg BB

Induksi

aloksan 180

mg/kg BB +

ekstrak

etanol biji

mahoni

dosis 150

mg/kg BB

Pengukuran Kadar Gula

darah

Pengukuran Berat

badan

Lampiran K. Prosedur Pengolahan Ekstrak Biji Mahoni

Dibersihkan dari kulit pembungkusnya

Dikeringkan tidak pada sinar matahari secara langsung

Dihaluskan

Lampiran L. Prosedur Ekstrak Etanol Biji Mahoni

Dimasukkan ke dalam botol berwarna gelap

Ditambahkan pelarut etanol 96%

Ditutup dan dibiarkan selama dua hari terlindung dari

cahaya

Disaring

Diuapkan menggunakan vakum putar pada suhu 40

0

C

Dikeringkan

Lampiran M. Prosedur Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Biji Mahoni

Ditaburkan dalam lumpang yang berisi aquades panas 10

ml

Didiamkan 15 menit

Digerus hingga berbentuk gel

Ditambahkan gel CMC sedikit demi sedikit

Digerus sampai terbentuk suspensi

Dicukupkan volumenya sampai 100 ml dengan akuades

Biji mahoni

Serbuk biji mahoni

Serbuk biji mahoni

Maserat

Ekstrak Etanol

biji mahoni

0,5 g CMC

Gel CMC

Ekstrak etanol biji mahoni

Lampiran N. Prosedur Pembuatan Preparat Histologis Limpa

Difiksasi selama 1 hari

Dicuci dengan alkohol 70%

Didehidrasi dengan alkohol bertingkat

Dijernihkan dengan Xylol

Diinfiltrasi

Ditanam dalam kotak kecil yang berisi parafin

Dipotong pita parafin dengan menggunakan mikrotom

Direndam dalam air dingin

Direndam dalam air hangat

Ditempelkan pada objek gelas

Direkatkan dengan pemanasan di atas hot plate

Dideparafinasi

Diwarnai

Ditutup dengan

Canada balsam

Organ Limpa