Kultur Mikroorganisme Landasan Teori 1. Makanan Jajanan dan Pencemarannya

pembuatannya harus disterilisasi terlebih dahulu dan menerapkan aseptis untuk menghindari kontaminasi pada media. 28, 42, 43 Dalam kultur mikroorganisme terdapat 3 metode atau prosedur untuk melakukan kultur mikroorganisme sehingga diperoleh koloni-kolomi terpisah discrete colonies, tiga metode tersebut adalah 1. Metode streak plate Prinsip metode ini merupakan teknik pengenceran dengan goresan dari satu ose biakan campuran yang diinokulasikan pada permukaan agar plate. Berbagai model penggoresan dapat dilakukan untuk mendapatkan koloni- koloni yang terpisah dan koloni-koloni yang terpisah hanya tumbuh pada permukaan medium agar. 2. Metode pour plate Dalam metode ini diperlukan suatu serial pengenceran dari kultur campuran dengan menggunakan jarum ose, koloni-koloni yang terpisah akan tumbuh pada seluruh medium agar plate dan tidak hanya tumbuh pada permukaan medium agar plate, prosedur isolasi dapat digunakan untuk menghitung secara kuantitatif jumlah sel viable dari suatu kultur. 3. Metode spread plate Dalam metode ini menggunakan campuran mikroorganisme yang telah diencerkan terlebih dahulu kemudian satu ose penuh loopful diinokulasi yang sudah diencerkan dan diinokulasikan secara aseptik dibagian tengah medium agar dan diratakan dengan batang L drigalsky steril. Dengan metode ini koloni-koloni akan tumbuh hanya dipermukan medium agar plate saja, prosedur ini dapat digunakan untuk menghitung secara kuantitatif jumlah sel viable dari suatu kultur bakteri. 41, 42, 43, 49

2.1.6. Metode Perhitungan Bakteri

Perhitungan bakteri dapat dilakukan dengan cara langsung maupun tidak langsung. Metode dengan cara langsung yaitu petrof hausser cell counter, mikroba akan dihitung secara keseluruhan baik yang mati ataupun hidup dengan alat haemocytometer sedangkan dengan cara tidak langsung dapat dilakukan dengan berbagai cara seperti hitung cawan plate count, filtrasi atau penyaringan, pengukuran aktivitas metabolisme, pengukuran berat kering sel, dan pengukuran konsumsi nutrien. 18, 47 Perhitungan koloni bakteri metode cawan dapat dilakukan dengan perhitungan Standar Plate Count SPC yang merupakan salah satu metode yang dapat dilakukan adalah Uji Total Plate Count, Uji TPC merupakan sebuah uji untuk mendeteksi kuantitas jumlah dari sel-sel bakteri yang berada pada bahan yang diujikan, setiap koloni yang terbentuk baik besar maupun kecil dan menjalar dianggap menjadi satu koloni. Uji TPC ini dimulai dari pengenceran bahan yang dijadikan sampel, kemudian dihomogenisasi dengan Nutrient Broth NB dengan pengenceran 10 sampai dengan pengenceran 10 -7 dan hasil pengenceran diinokulasi dalam media Nutrient Agar NA dengan menggunakan metode spread plate lalu diinkubasi dalam suhu 37 C selama 24 jam. Setelah diinkubasi dan bakteri yang tumbuh akan dihitung jumlah koloni yang terbentuk dngan menggunakan colony counter atau menghitung secara manual dengan kriteria inklusi jumlah bakteri dalam 1 cawan adalah 30-300 koloni. 29, 47, 48, Setelah jumlah bakteri dalam satu cawan telah dihitung dan masuk dalam rentang 30-300 koloni maka akan dimasukkan ke dalam rumus sebagai berikut: Contoh sampel 1: Pada pengenceran 10 -4 Jumlah koloni= 85 Koloni per ml = jumlah koloni x 1 Konsentrasi pengenceran