Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Lidah Mertua (Sansevieria trifasciata Prain) Terhadap Mencit Jantan

Lampiran 3. Hasil potongan daun lidah mertua segar

Daun segar

Lampiran 4. Gambar serbuk simplisia dan simplisia daun lidah mertua

Serbuk simplisia

Lampiran 5. Hasil pemeriksaan mikroskopik simplisia daun lidah mertua

Perbesaran 10x40

Keterangan: 1 = stomata tipe parasitik

2 = fragmen epidermis bentuk poligonal

3 = berkas pengangkut dengan penebalan spiral 4 = serabut sklerenkim

5 = kutikula

6 = kristal bentuk jarum

1

2

3

4

5

Lampiran 6. Bagan kerja penelitian

Serbuk simplisia Daun lidah mertua

Simplisia

Dicuci, ditiriskan, dipotong menjadi bagian kecil dan ditimbang sebagai berat basah

Dikeringkan dalam lemari pengering

Ditimbang berat kering Dihaluskan

Ekstraksi

Perkolat

Ekstrak kental

Hasil

Diperkolasi dengan etanol 96%

Diuapkan dengan

rotary evaporator

Diuji toksisitas akut

Karakterisasi simplisia Skrining Fitokimia

−Makroskopik

−Mikroskopik

−Penetapan kadar air

−Penetapan kadar sari yang larut dalam air

−Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol

−Penetapan kadar abu total

−Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam Pemeriksaan: -Alkaloid -Flavonoid -Glikosida -Saponin -Tanin -Steroid/triterpenoid

Lampiran 7. Contoh Perhitungan Dosis

Berat badan mencit 25 g dengan dosis EEDLM 4000 mg/kg bb Dosis pemberian = 4000 mg/kg bb

= 4000 mg/1000 g x 25 g = 100 mg

Jumlah yang diberikan pada mencit = 1% x BB = 1% x 25 g = 0,25 ml

Lampiran 8. Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia

1. Perhitungan Penetapan Kadar Air

a. Berat sampel = 5,018 g Volume air = 0,3 ml Kadar air = _{x 100%}

5,010

0,3 _{= 5,99%}

b. Berat sampel = 5,014 Volume air = 0,25 ml Kadar air = _{x 100%}

5,014

0,25 _{= 4,99%}

c. Berat sampel = 5,008 Volume air = 0,25 ml Kadar air = _{x 100%}

5,008

0,25 _{= 4,99%}

Kadar air rata-rata =

3

% 4,99) 4,99

(5,99+ + _{= 5,32%}

No Berat sampel (g) Volume awal (ml) Volume akhir (ml)

1 5,010 1,4 1,7

2 5,014 1,7 1,95

3 5,008 1,95 2,20

Lampiran 8 (Lanjutan)

2. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air

a. Berat sampel = 5,012 g Berat sari = 0,189 g

Kadar sari = 100% 20

100 5,012 0,189

×

× = 18,85%

b. Berat sampel = 5,008 g Berat sari = 0,129 g

Kadar sari = 100% 20

100 5,008 0,129

×

× = 12,88%

c. Berat sampel = 5,011 g Berat sari = 0,171

Kadar sari = 100%

20 100 5,011 0,171

×

× = 17,06%

Kadar sari rata-rata =

3

% 17,06) 12,88

(18,85+ + _{= 16,26%}

No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g)

1 5,012 43,092 43,281

2 5,008 47,496 47,625

3 5,011 46,204 46,375

Lampiran 8 (Lanjutan)

3. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol

a. Berat sampel = 5,010 g Berat sari = 0,101 g

Kadar sari = 100% 20

100 5,010 0,101

×

× = 10,08%

b. Berat sampel = 5,004 g Berat sari = 0,090 g

Kadar sari = 100% 20

100 5,004 0,090

×

× = 8,99%

c. Berat sampel = 5,009 g Berat sari = 0,096 g

Kadar sari = 100%

20 100 5,009 0,096

×

× = 9,58%

Kadar sari rata-rata =

3

% 9,58) 8,99

(10,08+ + _{= 9,55%}

No Berat sampel (g) Berat cawan kosong (g) Berat cawan sari (g)

1 5,010 43,156 43,257

2 5,004 47,578 47,668

3 5,009 46,082 46,178

Lampiran 8 (Lanjutan)

4. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total

a. Berat sampel = 2,003 g Berat abu = 0,252 g Kadar abu = _{x 100%}

2,003

0,252 _{= 12,58%}

b. Berat sampel = 2,006g Berat abu = 0,261 g Kadar abu = _{x 100%}

2,006

0,261 _{= 13,01%}

c. Berat sampel = 2,003 g Berat abu = 0,246 g Kadar abu = _{x 100%}

2,003

0,246 _{= 12,28%}

Kadar abu total rata-rata =

3

% 12,28) 13,01

(12,58+ + _{= 12,62%}

No Berat sampel (g) Berat abu (g)

1 _{2,003 0,252}

2 _{2,006 0,261}

3 _{2,003 0,246}

Lampiran 8 (Lanjutan)

5. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam

a. Berat sampel = 2,002 g Berat abu = 0,016 g Kadar abu = _{x 100%}

2,002

0,016 _{= 0,8%}

b. Berat sampel = 2,005 g Berat abu = 0,019 g Kadar abu = _{x 100%}

2,005

0,019 _{= 0,95%}

c. Berat sampel = 2,002 g Berat abu = 0,012 g Kadar abu = _{x 100%}

2,002

0,012 _{= 0,6%}

Kadar abu total rata-rata =

3

% 0,6) 0,95

(0,8+ + _{= 0,78%}

No Berat sampel (g) Berat abu (g)

1 _{2,002 0,016}

2 _{2,005 0,019}

3 _{2,002 0,012}

Lampiran 9. Alat dan bahan yang digunakan

Rotary Evaporator

Mikroskop

Lampiran 10. Uji toksisitas akut

Uji Panggung

Lampiran 11. Hasil makroskopik organ

1. Makroskopik organ hati

CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg bb

EEDLM 500 mg/kg bb EEDLM 1000 mg/kg bb

Lampiran 11 (Lanjutan)

2. Makroskopik organ paru-paru

CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg bb

EEDLM 500 mg/kg bb EEDLM 1000 mg/kg bb

Lampiran 11 (Lanjutan)

3. Makroskopik organ jantung

CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg bb

EEDLM 500 mg/kg bb EEDLM 1000 mg/kg bb

Lampiran 11 (Lanjutan)

4. Makroskopik organ ginjal

CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg bb

EEDLM 500 mg/kg bb EEDLM 1000 mg/kg bb

Lampiran 11 (Lanjutan)

5. Makroskopik organ testis

CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg bb

EEDLM 500 mg/kg bb EEDLM 1000 mg/kg bb

Lampiran 12. Hasil pemeriksaan kadar Serum Glutamat Piruvat Transminase

Lampiran 13. Hasil analisis data SPSS Berat Badan pada Minggu I

Descriptives Minggu1

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 5 35.0300 1.63268 .73016 33.0028 37.0572 33.77 37.67

EEDLM 250 mg/kg BB

5 33.6700 3.20599 1.43376 29.6892 37.6508 29.73 37.62

EEDLM 500 mg/kg BB

5 34.3980 3.47938 1.55603 30.0778 38.7182 31.25 39.82

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 33.5740 2.42128 1.08283 30.5676 36.5804 30.83 36.42

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 36.4706 2.62110 1.17219 33.2161 39.7251 33.77 40.75

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 35.4140 1.18614 .53046 33.9412 36.8868 34.27 37.02

Total 30 34.7594 2.54288 .46427 33.8099 35.7090 29.73 40.75

ANOVA Minggu1

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 30.763 5 6.153 .942 .472

Within Groups 156.759 24 6.532

Berat Badan pada Minggu II

Descriptives Minggu2

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 5 33.3580 1.17468 .52533 31.8994 34.8166 32.07 34.85 EEDLM 250

mg/kg BB

5 34.0720 3.26291 1.45922 30.0206 38.1234 28.95 37.45

EEDLM 500 mg/kg BB

5 35.6080 3.24961 1.45327 31.5731 39.6429 32.48 40.33

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 34.2840 2.96638 1.32661 30.6007 37.9673 31.67 38.72

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 37.4260 2.55662 1.14336 34.2515 40.6005 34.65 41.48

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 34.7100 2.18309 .97631 31.9993 37.4207 31.68 37.22

Total 30 34.9097 2.77025 .50578 33.8752 35.9441 28.95 41.48

ANOVA Minggu2

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 51.801 5 10.360 1.456 .241 Within Groups 170.752 24 7.115

Berat Organ Hati

Descriptives Berat hati

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound CMC Na 0.5%

5 5.01260 .670469 .299843 4.18010 5.84510 4.337 5.890

EEDLM 250 mg/kg BB

5 5.83820 .626795 .280311 5.05993 6.61647 5.131 6.821

EEDLM 500 mg/kg BB

5 5.67820 .888080 .397162 4.57550 6.78090 5.108 7.255

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 5.18500 .484622 .216730 4.58326 5.78674 4.637 5.957

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 4.55768 .663150 .296570 3.73427 5.38109 3.426 5.062

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 5.38900 .434447 .194291 4.84956 5.92844 5.068 6.136

Total 30 5.27678 .728699 .133042 5.00468 5.54888 3.426 7.255

ANOVA Berat hati

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 5.421 5 1.084 2.608 .051

Within Groups 9.978 24 .416

Berat Organ Paru-paru

Descriptives Berat paru-paru

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 5 .55340 .123896 .055408 .39956 .70724 .450 .755 EEDLM 250

mg/kg BB

5 .56240 .063850 .028555 .48312 .64168 .469 .638

EEDLM 500 mg/kg BB

5 .54780 .037050 .016569 .50180 .59380 .519 .603

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 .62620 .054815 .024514 .55814 .69426 .589 .722

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 .52740 .058449 .026139 .45483 .59997 .466 .594

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 .64180 .065686 .029376 .56024 .72336 .546 .725

Total 30 .57650 .078707 .014370 .54711 .60589 .450 .755

ANOVA Berat paru-paru

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .054 5 .011 2.036 .110

Within Groups .126 24 .005

Berat Organ Jantung

Descriptives Berat jantung

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 5 .47080 .034456 .015409 .42802 .51358 .429 .511 EEDLM 250

mg/kg BB

5 .47600 .048182 .021548 .41617 .53583 .432 .534

EEDLM 500 mg/kg BB

5 .50020 .060952 .027259 .42452 .57588 .424 .575

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 .52420 .029575 .013226 .48748 .56092 .497 .563

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 .53540 .039342 .017594 .48655 .58425 .485 .574

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 .46880 .012853 .005748 .45284 .48476 .454 .485

Total 30 .49590 .045466 .008301 .47892 .51288 .424 .575

ANOVA Berat jantung

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .021 5 .004 2.532 .056

Within Groups .039 24 .002

Berat Organ Ginjal

Descriptives Berat ginjal

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 5 1.31020 .118957 .053199 1.16250 1.45790 1.133 1.420 EEDLM 250

mg/kg BB

5 1.28280 .138299 .061849 1.11108 1.45452 1.093 1.482

EEDLM 500 mg/kg BB

5 1.33840 .217340 .097198 1.06854 1.60826 1.207 1.721

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 1.18940 .065733 .029397 1.10778 1.27102 1.144 1.305

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 1.23380 .130766 .058480 1.07143 1.39617 1.041 1.368

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 1.42460 .143608 .064224 1.24629 1.60291 1.282 1.635

Total 30 1.29653 .150853 .027542 1.24020 1.35286 1.041 1.721

ANOVA Berat ginjal

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .170 5 .034 1.662 .182

Within Groups .490 24 .020

Berat Organ Testis

Descriptives Berat testis

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 5 .49580 .054057 .024175 .42868 .56292 .440 .578

EEDLM 250 mg/kg BB

5 .51340 .062348 .027883 .43598 .59082 .438 .601

EEDLM 500 mg/kg BB

5 .52800 .065426 .029259 .44676 .60924 .457 .611

EEDLM 1000 mg/kg BB

5 .56680 .149939 .067055 .38063 .75297 .397 .760

EEDLM 2000 mg/kg BB

5 .57280 .119723 .053542 .42414 .72146 .429 .720

EEDLM 4000 mg/kg BB

5 .55600 .089931 .040218 .44434 .66766 .424 .653

Total 30 .53880 .092514 .016891 .50425 .57335 .397 .760

ANOVA Berat testis

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .024 5 .005 .519 .759

Within Groups .224 24 .009

Hasil Pengukuran Kadar ALT

Descriptives Kadar ALT

N Mean

Std. Deviation

Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower

Bound

Upper Bound

CMC Na 0.5% 3 52.67 20.841 12.032 .90 104.44 30 71

EEDLM 250 mg/kg BB

3 59.00 16.523 9.539 17.96 100.04 42 75

EEDLM 500 mg/kg BB

3 50.00 9.000 5.196 27.64 72.36 41 59

EEDLM 1000 mg/kg BB

3 54.67 8.505 4.910 33.54 75.79 45 61

EEDLM 2000 mg/kg BB

3 87.33 10.504 6.064 61.24 113.43 77 98

EEDLM 4000 mg/kg BB

3 112.00 17.521 10.116 68.47 155.53 95 130

Total 18 69.28 26.468 6.239 56.12 82.44 30 130

ANOVA Kadar ALT

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 9353.611 5 1870.722 8.783 .001 Within Groups 2556.000 12 213.000

Multiple Comparisons Kadar ALT

Tukey HSD (I) Kelompok Perlakuan

(J) Kelompok Perlakuan

Mean Difference (I-J)

Std. Error Sig.

95% Confidence Interval Lower Bound

Upper Bound CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg

BB

-6.333 11.916 .994 -46.36 33.69

EEDLM 500 mg/kg BB

2.667 11.916 1.000 -37.36 42.69

EEDLM 1000 mg/kg BB

-2.000 11.916 1.000 -42.03 38.03

EEDLM 2000 mg/kg BB

-34.667 11.916 .105 -74.69 5.36

EEDLM 4000 mg/kg BB

-59.333* 11.916 .003 -99.36 -19.31

DAFTAR PUSTAKA

Anggraini, D.R. (2008). Gambaran Makroskopis dan Mikroskopis Hati dan Ginjal Mencit Akibat Pemberian Plumbum Asetat. Tesis. Medan: Sekolah Pascasarjana Universitas Sumatera Utara.

BPOM RI. (2014). Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik Secara In Vivo. Badan Pengawasan Obat dan Makanan RI. Halaman 3-4, 16-17, 28.

Casarret, L.J., dan Doull, J. (2008). Toxicology the Basic Science of Poisons. Editor: Curtis D. Klaasen. 7th Edition. New York: McGraw-Hill Companies, Inc. Pages 28, 31, 32.

Chase, M.W., Reveal, J.L., dan Fay, M.F. (2009). A subfamilial classification for the expanded asparagalean families Amaryllidaceae, Asparagaceae and Xanthorrhoeaceae. Botanical Journal of the Linnean Society. 161(2): 132– 136.

Dalimartha, S. (2007). Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Depok: Puspa Swara. Halaman 54-55.

Depkes RI. (1979). Farmakope Indonesia Edisi III. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Halaman 7, 33, 744, 748.

Depkes RI. (1995). Farmakope Indonesia Edisi IV. Departemen Keseharan Republik Indonesia. Halaman 7.

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Depkes RI. Halaman 3-5, 10-11.

Eroschenko, V. P. (2004). Atlas Histologi. Edisi ke-9. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Halaman 249-253.

Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screening of Plants.

Journal of Pharmaceutical Sciences. 55(3): 263-264.

Gaze, D. C. (2007). The Role of Existing and Novel Cardiac Biomarkers for Cardioprotection. Curr Opin Invest Drugs. 8(9): 711-712.

Gupta, D., dan Bhardwaj, S. (2012). Study of Acute, Subacute and Chronic Toxicity Test. International Journal of Advanced Research in

(Jatropha curcas L.). yang Didetoksifikasi. Skripsi. Bogor: Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor.

Hall, R. L. (2007). Clinical Pathology of Laboratory Animals in Animal Model in

Toxicology. 2nd Edition. USA: CRC Press. Pages 804, 815.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia. Bandung: Penerbit ITB Bandung. Halaman 4-7.

Hariana, A. (2007). Tumbuhan Obat dan Khasiatnya. Seri II. Jakarta: Penebar Swadaya. Halaman 106-108.

Hodgson, E., dan Levi, P. E. (2000). A Textbook of Modern Toxicology. Second Edition. New York: McGraw-Hill Companies, Inc. Pages 292, 298, 301, 302.

Husadha, Y. (1996). Fisiologi dan Pemeriksaan Hati. _{Dalam: Buku Ajar Ilmu} Penyakit Dalam. Jilid I. Edisi Ketiga. Jakarta: Balai Penerbit FKUI.

Halaman 224-226.

Irianto, K. (2004). Struktur dan Fungi Tubuh Manusia untuk Paramedis. Bandung: Yrama Widiya. Halaman 225.

Kemenkes RI. (2009). Farmakope Herbal Indonesia. Edisi I. Jakarta: Kementrian Kesehatan RI. Halaman 176.

Klassen, C. D. (2012). Prinsip Toksikologi dan Penanganan Keracunan. Dalam: Goodman., dan Gilman. Dasar Farmakologi dan Terapi. Edisi 10. Volume 1. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran. Halaman 65.

Kotani, S., Ogawa, T. (1987). Analgesic Effect of N-Acetylmuramyl-L-Alanyl-D-Isoglutamine in Decreasing the Acetic Acid-Induced Abdominal-Writhing Response. Japan. Department of Microbiology and Oral Microbiology. Page 494.

Lu, F.C. (1994). Toksikologi Dasar: Asas, Organ Sasaran, dan Penilaian Resiko. Edisi II. Jakarta: UIP. Halaman 85-86.

Mahardika, R.A.D., Hidayat, N., dan Nurika I. (2014). Ekstraksi Antioksidan dari Daun Lidah Mertua (Sansevieria trifasciata Prain) Menggunakan Metode

Microwave Assisted Extraction dan Pulsed Electric FIELD. Malang:

Pribadi, G. A. (2008). Penggunaan Mencit dan Tikus Sebagai Hewan Model Penelitian Nikotin. Skripsi. Bogor: Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor.

Priyanto (2009). Toksikologi: Mekanisme, Terapi Antidotum dan Penilaian

Resiko. Depok: Lembaga Studi dan Konsultasi Farmakologi. Halaman

55-56, 151-152.

Qomariyah, N., Sarto, M., dan Pratiwi, R. (2012). Antidiabetic Effects of a Decoction of Leaves of Sansevieria trifasciata in Alloxan-Induced Diabetic White Rats (Rattus norvegicus L.). Yogyakarta. Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada. Pages 311-315.

Retnomurti, H. R. (2008). Pengujian Toksisitas Akut Ekstrak Buah Merah

(Pandanus conoideus Lam.) Secara In Vivo. Bogor: Fakultas Teknologi

Pertanian Institut Pertanian Bogor. Halaman 30-31.

Rohmanto, K., Hastuti U.S., dan Witjoro, A. (2013). Pengaruh Ekstrak Metanol Daun Sansevieria (Sansevieria trifasciata pvar. Laurentii) Terhadap Penghambatan Pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Escherichia coli Secara In Vitro. Malang: Fakultas MIPA Universitas Negeri Malang. Halaman 8-9.

Rustam, E., Masri, M., dan Arifin, H. (2011). Kajian Toksisitas Ekstrak Tumbuhan Talinum triangularae (Jacq) Willd. Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi. 16(2): 110-120.

Sacher, L. dan Person, M. (2002). Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan

Laboratorium. Edisi 11. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC.

Halaman 369-370.

Sulastry, F. (2009). Uji Toksisitas Akut yang Diukur Dengan Penentuan LD50

Ekstrak Daun Pegagan (Centella asiatica (L.) Urban) Terhadap Mencit Balb/c. Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro. Halaman 18-19.

Sunilson, A.J.J., Jayaraj, P., Varatharajan, R., John, T., Jisha, J., and Muthappan, M. (2009). Analgesic and Antipyretic Effects of Sansevieria trifasciata Leaves. Afr. J. Traditional CAM. 6(4): 531-533.

Supriningrum, R., Jubaidah, S., dan Sapri. (2014). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Akar Tabar Kedayan (Aristolochia foveolata Merr.). Kalimantan: Media

Underwood, J. C. E. (1994). Cedera Hepar Akibat Obat. Editor: Sarjadi. Edisi Patologi Umum dan Sistemik Volume 2. Edisi II. Jakarta: EGC. Halaman 483.

Utami, P. (2008). Buku Pintar Tanaman Obat. Jakarta: PT Agromedia Pustaka. Halaman 166-167.

Utomo, A.W. (2008). Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Jati Belanda (Guazuma ulmifolia Lamk.) pada Tikus Wistar. Skripsi. Semarang: Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro.

Widmann. (1995). Tinjauan Klinis atas Hasil Pemeriksaan Laboratorium. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Halaman 325-400.

Wisaksono, S. (2002). Efek Toksik dan Cara Menentukan Toksisitas Bahan Kimia. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Cermin Dunia Kedokteran. 135(1): 32-36.

WHO (World Health Organization). (1998). Quality Control Methods For

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Lokasi Penelitian

Penelitian dilakukan di Laboratorium Farmakognosi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Laboratorium Farmakologi Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara, Laboratorium Kesehatan Daerah Provinsi Sumatera Utara, dan Laboratorium Rumah Sakit Murni Teguh Medan.

3.2 Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan adalah penelitian eksperimental. Penelitian eksperimental bertujuan untuk mencari pengaruh variabel tertentu terhadap variabel lain dalam kondisi yang terkontrol. Penelitian ini meliputi pengumpulan bahan tumbuhan, identifikasi sampel, pembuatan simplisia, karakterisasi simplisia, pembuatan ekstrak etanol daun lidah mertua (Sansevieria trifasciata), karakterisasi ekstrak etanol daun lidah mertua, penyiapan hewan percobaan, pengujian efek toksisitas akut secara oral terhadap mencit jantan kemudian dilakukan pemeriksaan secara makroskopik dan mikroskopik terhadap organ hati mencit jantan.

3.3 Alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat – alat gelas, seperangkat alat penetapan kadar air, oven, blender (Miyako), aluminium foil, kandang hewan, kertas saring, lemari pengering, mikroskop elektrik, neraca listrik (Mettler Toledo), neraca hewan (GW-1500), rotary evaporator (Heidolph WB

3.4 Bahan

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun lidah mertua dan akuades. Bahan kimia yang digunakan adalah α-naftol, amil alkohol, asam asetat anhidrida, asam klorida pekat, asam nitrat pekat, asam sulfat pekat, besi (III) klorida, kloroform, natrium hidroksida, serbuk magnesium, timbal (II) asetat, toluena, etanol (destilasi), formalin, dan Na-CMC (Natrium-Carboxy

Methyl Cellulose). 3.5 Hewan Percobaan

Hewan yang digunakan pada penelitian ini adalah mencit jantan berumur 2 - 3 bulan dengan bobot 20 – 35 g sebanyak 30 ekor yang diperoleh dari Laboratorium Farmakologi Universitas Sumatera Utara. Sebelum pengujian, mencit diaklimatisasi terlebih dahulu selama 7 - 14 hari. Kemudian mencit dibagi dalam 6 kelompok.

3.6 Penyiapan Bahan Tumbuhan 3.6.1 Pengumpulan Tumbuhan

Pengumpulan tumbuhan dilakukan secara purposif, yaitu tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Bahan tumbuhan yang digunakan adalah daun lidah mertua dengan panjang daun 28 – 40 cm yang diperoleh dari tempat penjualan tanaman hias di Jalan Sei Deli No. 147, Sehati Florist, Medan.

3.6.2 Identifikasi Tumbuhan

3.6.3 Pembuatan Simplisia

Tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun lidah mertua. Daun dibersihkan dari kotoran yang melekat dan dicuci dengan air hingga bersih, kemudian ditiriskan dan dipotong menjadi beberapa bagian kecil. Selanjutnya, daun tersebut dikeringkan dalam lemari pengering dengan temperatur ± 40oC sampai daun kering (ditandai bila diremas rapuh). Kemudian ditimbang sebagai berat kering. Simplisia yang telah kering diblender menjadi serbuk lalu dimasukkan ke dalam wadah plastik bertutup untuk mencegah pengaruh lembab dan pengotor lain.

3.7 Karakterisasi Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut air, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut asam (WHO, 1998).

3.7.1 Pemeriksaan Makroskopik

Pemeriksaan makroskopik dilakukan pada daun segar dan simplisia meliputi pemeriksaan bentuk, ukuran, warna, bau, dan rasa daun lidah mertua.

3.7.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik dilakukan terhadap serbuk simplisia daun lidah mertua. Masing – masing serbuk simplisia diletakkan di atas kaca objek yang telah ditetesi dengan larutan kloral hidrat dan ditutup dengan kaca penutup, dipanaskan dan diamati di bawah mikroskop.

3.7.3 Penetapan Kadar Air

Penetapan kadar air dilakukan menurut metode Azeotropi (destilasi toluena). Alat terdiri dari labu alas bulat 500 mL, pendingin, tabung penyambung, tabung penerima 5 mL berskala 0,05 mL, alat penampung dan pemanas listrik. Cara kerja :

Dimasukkan 200 mL toluena dan 2 mL air suling ke dalam labu alas bulat, lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluena dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 mL. Kemudian ke dalam labu yang berisi toluene, dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluena mendidih, kecepatan tetesan diatur 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluena. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluena memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 mL. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (WHO, 1998).

3.7.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air

Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 mL air-kloroform (2,5 mL air-kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan

dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Kadar sari yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI., 1995).

3.7.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol

Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 mL etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 mL filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Depkes RI., 1995).

3.7.6 Penetapan Kadar Abu Total

Sebanyak 2 g serbuk simplisia dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, jika arang masih tidak dapat dihilangkan, ditambahkan air panas, saring melalui kertas saring bebas abu. Pemijaran dilakukan pada suhu 600oC selama 3 jam. Kemudian didinginkan dan ditimbang sampai diperoleh bobot tetap. Kadar abu dihitung (Depkes RI., 1995).

3.7.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam

Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 mL asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas, dipijarkan, kemudian didinginkan dan ditimbang sampai bobot tetap. Kadar abu

3.8 Skrining Fitokimia 3.8.1 Pemeriksaan Alkaloida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan lalu disaring. Filtrat dipakai untuk percobaan berikut:

a. filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes larutan pereksi Mayer akan terbentuk endapan berwarna putih atau kuning

b. filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes larutan pereksi Bouchardat akan terbentuk endapan berwarna coklat-hitam

c. filtrat sebanyak 3 tetes ditambahkan 2 tetes larutan pereksi Dragendorff akan terbentuk endapan berwarna merah atau jingga

Alkaloida dinyatakan positif jika terjadi endapan atau paling sedikit dua atau tiga dari percobaan di atas (Depkes RI., 1995).

3.8.2 Pemeriksaan Flavonoida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 10 g, ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, ke dalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoid positif jika terjadi warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

3.8.3 Pemeriksaan Tanin

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g, disari dengan 10 ml air suling lalu disaring, filtratnya diencerkan dengan air sampai tidak berwarna. Larutan

Warna biru atau hijau kehitaman yang terjadi pada larutan menunjukkan adanya senyawa tanin (Farnsworth, 1966).

3.8.4 Pemeriksaan Glikosida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml campuran dari 7 bagian etanol 96% dengan 3 bagian air suling (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N, kemudian direfluks selama 10 menit, didinginkan, lalu disaring. Diambil 20 ml filtrat ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M dikocok, didiamkan 5 menit lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran isopropanol dan kloroform (2:3), perlakuan ini diulangi sebanyak 3 kali. Sari organik dikumpulkan dan ditambahkan Na2SO4 anhidrat, disaring, kemudian

diuapkan pada temperatur tidak lebih dari 50ºC, sisanya dilarutkan dalam 2 ml metanol. Sari air digunakan untuk percobaan berikut, 0,1 larutan percobaan dimasukkan dalam tabung reaksi, kemudian diuapkan di atas penangas air. Pada sisa ditambahkan 2 ml air dan 5 tetes larutan pereaksi Molish, lalu ditambahkan dengan perlahan-lahan 2 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung, terbentuk cincin ungu pada batas kedua cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (glikon) atau glikosida (Depkes RI., 1995).

3.8.5 Pemeriksaan Saponin

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik. Jika terbentuk busa setinggi 1 sampai 10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Depkes RI., 1995).

3.8.6 Pemeriksaan Steroida/Triterpenoida

Sebanyak 1 g serbuk simplisia dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap. Pada sisa ditambahkan beberapa tetes pereaksi Liebermann-Burchard. Warna biru atau biru kehijauan yang terjadi menunjukkan adanya steroid, sedangkan warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).

3.9 Tahap Penelitian

3.9.1 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Lidah Mertua (EEDLM)

Pembuatan ekstrak etanol daun lidah mertua dilakukan dengan cara perkolasi. Dibasahi 100 g serbuk simplisia dengan etanol 96% dan dibiarkan selama 3 jam. Pindahkan massa sedikit demi sedikit ke dalam perkolator, tuangi dengan cairan penyari etanol sampai semua simplisia terendam dan terdapat selapis cairan penyari diatasnya, mulut tabung perkolator ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam, kemudian kran dibuka. Biarkan cairan menetes dengan kecepatan 1 ml per menit, perkolat ditampung. Perkolasi dihentikan jika 500 mg perkolat yang keluar terakhir diuapkan, tidak meninggalkan sisa. Kemudian dipekatkan dengan alat penguap vakum putar hingga diperoleh ekstrak kental (Depkes RI., 1979).

3.9.2 Pembuatan Suspensi CMC-Na 0,5 %

Sebanyak 0,5 g CMC-Na ditaburkan dalam lumpang yang berisi ±20 mL air suling panas. Didiamkan selama 15 menit lalu digerus hingga diperoleh massa yang transparan, lalu digerus sampai homogen, diencerkan dengan air suling,

3.9.3 Penyiapan dan Pengelompokkan Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan yaitu mencit jantan sebanyak 30 ekor dengan bobot 20 – 35 g. Mencit dibagi ke dalam enam kelompok perlakuan, tiap kelompok terdiri dari lima ekor mencit jantan dimana kelompok I sebagai kelompok kontrol, kelompok II – VI sebagai kelompok perlakuan dengan rincian sebagai berikut:

Kelompok I (K1) : Kontrol, diberikan larutan suspensi CMC-Na 0,5 %

Kelompok II (K2) : Perlakuan, diberikan EEDLM dengan dosis 250 mg/kg BB Kelompok III (K3) : Perlakuan, diberikan EEDLM dengan dosis 500 mg/kg BB Kelompok IV (K4) : Perlakuan, diberikan EEDLM dengan dosis 1000 mg/kg BB Kelompok V (K5) : Perlakuan, diberikan EEDLM dengan dosis 2000 mg/kg BB Kelompok VI (K6) : Perlakuan, diberikan EEDLM dengan dosis 4000 mg/kg BB

3.9.4 Pemberian Sediaan Uji dan Pengamatan Gejala Toksik

Sebelum diberikan perlakuan, hewan uji dipuasakan terlebih dahulu selama 3 – 4 jam dengan tetap diberi minum. Sediaan uji diberikan kepada hewan uji secara peroral menggunakan oral sonde, satu kali selama masa uji. Kemudian dilakukan pengamatan hewan uji terhadap gejala toksik yang muncul. Waktu pengamatan adalah 5 menit, 10 menit, 15 menit, 30 menit, 60 menit, 120 menit, 180 menit, dan 240 menit, dan setelah itu diamati selama 14 hari. Perhatian khusus diberikan akan adanya tremor, salivasi, diare, lemas, gerak–gerik hewan seperti berjalan mundur dan berjalan dengan menggunakan perut, kemudian dilanjutkan dengan beberapa metode pengujian, yaitu:

a. uji panggung

Mencit yang telah diberi ekstrak etanol daun lidah mertua diletakkan di atas meja alas bundar dengan diameter 30 – 40 cm dan tinggi 40 – 45 cm. Pada uji ini yang diamati adalah aktivitas motorik mencit.

b. uji katalepsi

Mencit yang telah diberi ekstrak etanol daun lidah mertua diletakkan di atas pensil yang digerakkan dari bawah ke atas sekitar 2 – 3 cm dari permukaan meja. Dicatat mudah tidaknya kaki depan mencit jatuh kembali ke atas meja. Pada uji ini yang diamati adalah ada tidaknya gangguan neurologi pada mencit.

Pengamatan meliputi waktu timbul dan hilangnya gejala toksik serta saat terjadinya kematian. Hewan uji yang mati setelah pemberian suspensi sediaan uji sesegera mungkin dibedah pada bagian perut secara melintang, selanjutnya diambil organ hati, paru-paru, jantung, ginjal, dan testis. Sisa hewan uji yang masih hidup sampai masa akhir uji, dikorbankan secara fisik dengan dislokasi leher kemudian dibedah dan diambil organnya. Organ-organ tersebut dicuci dengan NaCl 0,9%, kemudian ditimbang dan dimasukkan kedalam pot yang berisi formalin 10% untuk kemudian dikirim kebagian histopatologi untuk pembuatan preparat histopatologinya. Pengamatan terhadap organ-organ dapat dilakukan dengan dua cara, yaitu: secara makroskopis dengan melihat adanya perubahan warna, bentuk permukaan, dan tekstur organ (untuk organ hati, paru-paru, jantung, ginjal, dan testis), dan secara mikroskopik dengan menggunakan

3.10 Analisis Data

Data jumlah hewan dianalisis secara statistik menggunakan SPSS dengan metode One Way Analysis of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan uji post

hoc Tukey untuk mengetahui perbedaan signifikan berat badan, berat relatif organ

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Identifikasi Bahan Tumbuhan

Hasil identifikasi tumbuhan dilakukan di Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI) Pusat Penelitian dan Pengembangan Biologi Bogor menyebutkan bahwa tumbuhan yang digunakan adalah tumbuhan Lidah Mertua (Sansevieria

trifasciata Prain). Hasil identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 2. 4.2 Karakterisasi Tumbuhan dan Simplisia

4.2.1 Pemeriksaan Makroskopik

Hasil pemeriksaan makroskopik terhadap potongan daun segar lidah mertua diperoleh bentuk agak berdaging, permukaan licin, panjang 1,5 - 2 cm, lebar 1,4 - 2,2 cm, tebal 0,3 - 0,5 cm dengan organoleptik warna hijau tua dan kuning cerah dengan corak yang tidak beraturan, dan memiliki rasa dan bau yang khas. Gambar potongan daun segar lidah mertua dapat dilihat pada Lampiran 3.

Hasil pemeriksaan makroskopik terhadap simplisia daun lidah mertua diperoleh bentuk melengkung dengan sebagian menggulung, tipis dan bila diremas rapuh, permukaan kasar dan berkerut, panjang 0,5-1,2 cm, lebar 1,8-2,2 cm, dan tebal ± 0,1 cm dengan organoleptik warna hijau dan kuning cerah pada sampel segar menjadi warna hijau dan kuning lemah pada simplisia, memiliki rasa dan bau yang khas. Gambar simplisia daun lidah mertua dapat dilihat pada Lampiran 4.

4.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Hasil pemeriksaan mikroskopik pada serbuk simplisia diperoleh adanya fragmen epidermis bentuk poligonal, stomata tipe parasitik, serabut sklerenkim, berkas pengangkut dengan penebalan spiral, hablur kristal kalsium oksalat bentuk jarum dan kutikula. Gambar hnasil mikroskopik serbuk simplisia dapat dilihat pada Lampiran 5.

Uraian mikroskopik mencakup pengamatan terhadap bagian simplisia dan fragmen pengenal dari serbuk simplisia (Depkes RI., 1995). Pada tumbuhan, epidermis dan kristal kalsium oksalat dapat digunakan sebagai identitas tumbuhan. Lapisan kutikula pada epidermis merupakan sifat khas tumbuhan di atas tanah (Kemenkes RI., 2009).

Serbuk simplisia daun lidah mertua memiliki fragmen pengenal berupa epidermis bentuk poligonal, kutikula, stomata tipe parasitik dilingkupi epidermis bentuk lingkaran serta kristal kalsium oksalat bentuk jarum.

4.2.3 Pemeriksaan Karakterisasi

Hasil pemeriksaan karakterisasi dari serbuk simplisia daun lidah mertua dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Karakterisasi serbuk simplisia daun lidah mertua

No. Karakterisasi Hasil Pemeriksaan (%)

1. Penetapan kadar air 5,32

2. Penetapan kadar sari larut dalam air 16,26 3. Penetapan kadar sari larut dalam etanol 9,55

Monografi simplisia daun lidah mertua belum tercantum dalam Materia Medika Indonesia (MMI), sehingga tidak ada acuan dalam menentukan parameternya.

Tabel 4.1 menunjukkan kadar air simplisia daun lidah mertua sebesar 5,32%, kadar tersebut memenuhi persyaratan umum yaitu lebih kecil dari 10%. Kadar air yang lebih besar dari 10% dapat menjadi media pertumbuhan kapang dan jasad renik lainnya (Depkes RI., 1995).

Penetapan kadar sari yang larut dalam air menyatakan jumlah zat yang tersari dalam pelarut air seperti glikosida, gula, gom, protein, enzim, zat warna dan asam-asam organik, sedangkan penetapan kadar sari yang larut dalam etanol seperti glikosida, antrakinon, steroid, flavonoid, klorofil, saponin, tannin, dan yang larut dalam jumlah sedikit yaitu lemak (Depkes RI., 1995).

Penetapan kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam bertujuan untuk memberikan jaminan bahwa simplisia tidak mengandung logam berat tertentu melebihi nilai yang ditetapkan karena dapat berbahaya (toksik) bagi kesehatan. Penetapan kadar abu total menyatakan jumlah kandungan senyawa anorganik dalam simplisia misalnya Mg, Ca, Na, Zn, dan K. Kadar abu tidak larut dalam asam untuk mengetahui kadar senyawa anorganik yang tidak larut dalam asam, misalnya silikat. Abu total terbagi dua, yaitu abu fisiologis dan abu non fisiologis. Abu fisiologis adalah abu yang berasal dari jaringan tumbuhan itu sendiri, sedangkan abu non fisiologis adalah sisa setelah pembakaran yang berasal dari bahan-bahan luar yang terdapat pada permukaan simplisia (WHO, 1998).

asam klorida (WHO, 1998). Perhitungan pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia daun lidah mertua dapat dilihat pada Lampiran 7.

4.3 Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia terhadap serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun lidah mertua dilakukan untuk mendapatkan informasi golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat di dalamnya. Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun lidah mertua dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun lidah

mertua

No. Skrining Fitokimia

Hasil

Simplisia Ekstrak

1. Alkaloid - -

2. Flavonoid + +

3. Glikosida + +

4. Tanin + +

5. Saponin + +

6. Steroid/Triterpenoid + +

Keterangan : ( + ) Positif : mengandung golongan senyawa ( - ) Negatif : tidak mengandung golongan senyawa

Berdasarkan hasil skrining fitokimia yang telah diperoleh pada Tabel 4.2, maka golongan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun lidah mertua adalah flavonoid, glikosida, tanin, saponin, dan steroid/triterpenoid.

4.4 Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Lidah Mertua (EEDLM)

2000, dan 4000 mg/kg bb, dimana dosis yang sering digunakan masyarakat baik sebagai antidiabetes maupun anti alergi adalah 100, 150, dan 200 mg/kg bb. Pengamatan dilakukan selama 14 hari terhadap gejala toksik yang terjadi, meliputi jumlah kematian hewan, gejala klinis, berat badan, berat organ relatif, kadar ALT, gambaran makropatologi, dan histopatologi.

4.4.1 Pengamatan Gejala Toksik

Waktu pengamatan adalah tiap 5 menit, 10 menit, 15 menit, 30 menit, 60 menit, 120 menit, 180 menit, dan 240 menit (total waktu pengamatan 4 jam). Pada kelompok perlakuan, dilakukan pengamatan terhadap ada tidaknya gejala toksik dan pengujian yang meliputi uji panggung dan uji katalepsi. Hasil pengamatan gejala klinis dapat dilihat pada Tabel 4.3 dan hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 4.4 dan Tabel 4.5.

Tabel 4.3 Pengamatan gejala toksik

Kelompok Tremor Salivasi Diare Lemas Perubahan bulu

Jalan mundur

Jalan dengan

perut

K1 - - - -

K2 - - - -

K3 - - - -

K4 - - - -

K5 - - - -

K6 - - - +

Keterangan: K1 = kontrol; K2 = dosis 250 mg/kg bb; K3 = dosis 500 mg/kg bb; K4 = dosis 1000 mg/kg bb; K5 = dosis 2000 mg/kg bb; K6 = dosis 4000 mg/kg bb; bb = berat badan; (+) = menunjukkan adanya gejala, (-) = tidak menunjukkan gejala

Berdasarkan Tabel 4.3 terlihat bahwa pemberian ekstrak etanol daun lidah mertua pada pengamatan intensif selama 4 jam pertama tidak ditemukan gejala

yaitu berjalan dengan perut. Hal ini menunjukkan bahwa pada dosis 4000 mg/kg bb, terjadi kontraksi atau nyeri pada bagian abdomen yang menyebabkan kaki belakang mencit memanjang kebelakang dan berjalan dengan menyeret perut (writhing) (Kotani, 1987).

Hal tersebut menunjukkan adanya hubungan antara dosis dan efek toksik, dimana makin besar dosis yang diberikan makin besar efek toksik yang timbul (Lu, 1994). Zat dapat menimbulkan efek yang tidak diinginkan berkaitan dengan dosis yang diberikan yaitu efek samping, efek merugikan dan efek toksik (Priyanto, 2009).

Tabel 4.4 Uji panggung

Kelompok _Dosis Waktu (menit)

5 10 15 30 60 120 180 240

K1 Kontrol - - - -

K2 250 - - - -

K3 500 - - - -

K4 1000 - - - -

K5 2000 - - - + +

K6 4000 - - - + + +

Keterangan: (+) = menunjukkan adanya gejala, (-) = tidak menunjukkan gejala

Berdasarkan Tabel 4.4 terlihat bahwa pemberian ekstrak etanol daun lidah mertua tidak ditemukan gejala toksik pada dosis 250 – 1000 mg/kg bb, namun pada kelompok dosis 2000 - 4000 mg/kg bb ditemukan gejala toksik pada menit ke 120, 180 dan 240 berupa penurunan aktivitas motorik mencit. Gejala abnormal mencit ditunjukkan dengan perilaku berjalan berputar-putar, menggosok hidung, dan menggeliat (Supriningrum, 2014).

Tabel 4.5 Uji katalepsi Kelompok Dosis

Waktu (menit)

5 10 15 30 60 120 180 240

K1 Kontrol - - - -

K2 250 - - - -

K3 500 - - - -

K4 1000 - - - -

K5 2000 - - - -

K6 4000 - - - -

Keterangan: (+) = menunjukkan adanya gejala, (-) = tidak menunjukkan gejala

Berdasarkan Tabel 4.5 terlihat bahwa pemberian ekstrak etanol daun lidah mertua untuk semua dosis tidak ditemukan gejala toksik, yaitu mudahnya kaki depan mencit mencapai permukaan meja yang ditaruh pada pensil yang digerakkan dari atas ke bawah (Supriningrum, 2014).

4.4.2 Pengamatan Berat Badan

Penimbangan berat badan dilakukan setiap hari selama 14 hari, sedangkan yang dianalisis secara statistik dilakukan seminggu sekali. Hasil rata-rata berat badan mencit dapat dilihat pada Tabel 4.6.

Tabel 4.6 Rata-rata berat badan mencit setelah pemberian ekstrak etanol

daun lidah mertua minggu I dan II

Minggu Rata-rata berat badan (g) ± SD

K1 K2 K3 K4 K5 K6

I 35,03 ± 1,63 33,67 ± 3,21 34,40 ± 3,48 33,57 ± 2,42 36,47 ± 2,62 35,41 ± 1,19 II 33,36 ±

1,17 34,07 ± 3,26 35,60 ± 3,25 34,28 ± 2,97 37,43 ± 2,56 34,71 ± 2,18 Keterangan: K1 = kontrol; K2 = dosis 250 mg/kg bb; K3 = dosis 500 mg/kg bb; K4 = dosis 1000 mg/kg bb; K5 = dosis 2000 mg/kg bb; K6 = dosis 4000 mg/kg bb; bb = berat badan; SD = standar deviasi; g = gram

Berdasarkan Tabel 4.6 terlihat bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan, dimana nilai p > 0,05. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun lidah mertua tidak berpengaruh terhadap berat badan mencit. Untuk mengetahui efek toksik dari suatu zat, ada beberapa parameter yang merupakan indikator sensitif, yaitu gejala klinis, berat badan, dan konsumsi makanan (Gupta dan Bhardwaj, 2012).

4.4.3 Pengamatan Kematian

Hasil pengamatan kematian hewan selama waktu pemberian sediaan uji dapat dilihat pada Tabel 4.7.

Tabel 4.7 Pengamatan kematian mencit setelah pemberian ekstrak etanol daun

lidah mertua selama 14 hari

Kelompok _Dosis Jumlah Mencit Jumlah Mencit

Mati

K1 Kontrol 5 0

K2 250 5 0

K3 500 5 0

K4 1000 5 0

K5 2000 5 0

K6 4000 5 0

Berdasarkan Tabel 4.7 terlihat bahwa tidak ada satu mencit pun yang mati setelah pemberian ekstrak etanol daun lidah mertua. Menurut Sulastry (2009), jika pada batas dosis maksimum tercapai, namun belum menimbulkan kematian, maka dosis tertinggi tersebut dinyatakan sebagai LD50 semu (LD0). Tetapi dalam

menyebabkan kematian namun menimbulkan gejala toksik sehingga nilai LD50

tidak dapat diketahui pasti.

4.4.4 Berat Organ Relatif

Organ-organ pada mencit yang masih hidup sampai akhir periode pengamatan diotopsi dan ditimbang beratnya. Hasil berat organ relatif yang didata pada akhir perlakuan ditunjukkan pada Tabel 4.8.

Tabel 4.8 Nilai rata-rata berat relatif organ pada akhir perlakuan

Organ

Rata-rata berat organ (g) ± SD

K1 K2 K3 K4 K5 K6

Paru-paru 0,55 ± 0,12 0,56 ± 0,06 0,55 ± 0,04 0,63 ± 0,05 0,53 ± 0,06 0,64 ± 0,07 Hati 5,01 ±

0,67 5,84 ± 0,63 5,68 ± 0,89 5,19 ± 0,48 4,56 ± 0,66 5,39 ± 0,43 Ginjal 1,31 ±

0,12 1,28 ± 0,14 1,34 ± 0,22 1,19 ± 0,07 1,23 ± 0,13 1,42 ± 0,14 Jantung 0,47 ±

0,03 0,48 ± 0,05 0,50 ± 0,06 0,52 ± 0,03 0,54 ± 0,04 0,47 ± 0,01 Testis 0,50 ±

0,05 0,51 ± 0,06 0,53 ± 0,07 0,57 ± 0,15 0,57 ± 0,12 0,57 ± 0,09 Keterangan: K1 = kontrol; K2 = dosis 250 mg/kg bb; K3 = dosis 500 mg/kg bb; K4 = dosis 1000 mg/kg bb; K5 = dosis 2000 mg/kg bb; K6 = dosis 4000 mg/kg bb; bb = berat badan; SD = Standard Deviasi

Berdasarkan Tabel 4.8, tidak ada perbedaan signifikan pada berat hati, paru-paru, ginjal, jantung, dan testis. Hal ini menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh ekstrak etanol daun lidah mertua terhadap bobot organ mencit.

4.4.5 Makroskopik Hati Mencit

Pengamatan secara makropatologi organ merupakan salah satu indikator yang berguna bagi toksisitas untuk mengetahui adanya gejala kerusakan pada

Tabel 4.9 Pengamatan makroskopik organ hati mencit

Kelompok Dosis

Pengamatan

Warna Konsistensi Permukaan

K1 Kontrol Merah kecoklatan Kenyal Licin

K2 250 Merah kecoklatan Kenyal Licin

K3 500 Merah kecoklatan Kenyal Licin

K4 1000 Merah kecoklatan Kenyal Licin

K5 2000 Merah kecoklatan Kenyal Licin

K6 4000 Merah kecoklatan Kenyal Licin

Berdasarkan Tabel 4.9, terlihat bahwa organ hati pada semua kelompok perlakuan masih dalam keadaan normal. Hati dan ginjal yang normal berwarna kecoklatan, permukaannya licin, dan konsistensinya kenyal. Kriteria normal pada organ hati dan ginjal bila tidak ditemukannya perubahan warna, perubahan struktur, dan perubahan konsistensi (Anggraini, 2008).

4.4.6 Pengukuran Kadar ALT

Pada umumnya, aktivitas serum ALT, yang lebih umum dikenal dengan Serum Glutamat Piruvat Transaminase (SGPT), adalah enzim yang paling spesifik untuk mengidentifikasi adanya kerusakan pada sel hati (Hall, 2007). Enzim ini dapat ditemukan pada berbagai jaringan, tetapi paling banyak terdapat pada sel hati (hepatosit). Hasil analisis darah mencit untuk pengujian kandungan ALT dilakukan pada akhir perlakuan yaitu hari ke-15 dan dapat dilihat pada Tabel 4.10.

Tabel 4.10 Pengukuran rata-rata kadar ALT mencit setelah diberikan ekstrak

etanol daun lidah mertua

Kelompok _Dosis Rata-rata kadar ALT

(IU/L) ± SD

K1 Kontrol 52,67 ± 20,841

K2 250 59 ± 16,523

K3 500 50 ± 9,000

K4 1000 54,67 ± 8,505

K5 2000 87,33 ± 10,504

K6 4000 _{112 ± 17,521}

_*

Keterangan: SD = Standard Deviasi, * = adanya perbedaan signifikan (p < 0,05)

Berdasarkan Tabel 4.10 terlihat bahwa tidak ada perbedaan signifikan antara kadar ALT pada kelompok kontrol dengan kadar ALT kelompok dosis 250 – 2000 mg/kg bb, tetapi pada kelompok dosis 4000 mg/kg bb terdapat perbedaan yang signifikan terhadap kelompok kontrol. Menurut Hall (2007), kadar ALT darah mencit normal adalah 25-200 IU/L, sehingga kadar ALT mencit pada kelompok dosis 4000 mg/kg bb masih tergolong normal / memenuhi persyaratan.

Diantara enzim yang dihasilkan oleh hati dan peka terhadap kelainan fungsi hati adalah enzim SGPT dan SGOT. Enzim SGPT lebih spesifik sebagai indikator adanya gangguan fungsi hati bila dibandingkan dengan enzim SGOT (Rustam, 2011).

4.4.7 Gambaran Histopatologi Organ Hati

dilihat kerusakan organ yang tidak terlihat bila hanya diamati secara makroskopik. Hasil pengamatan gambaran histopatologi sel hati mencit dapat dilihat pada Gambar 4.1, 4.2, dan 4.3.

Keterangan: 1 = Hepatosit, 2 = Vena Sentral, 3 = Sinusoid

Gambar 4.1 Histopatologi hati mencit dengan pemberian CMC Na 0,5% dan EEDLM 250 mg/kg bb

Keterangan: 1 = Hepatosit, 2 = Vena Sentral, 3 = Sinusoid, 4 = Kariopiknosis

Gambar 4.2 Histopatologi hati mencit dengan pemberian EEDLM

500 mg/kg bb dan 1000 mg/kg bb

CMC Na 0.5% EEDLM 250 mg/kg bb

1

2

3

EEDLM 500 mg/kg bb EEDLM 1000 mg/kg bb

1

2

3

4

Keterangan: 1 = Hepatosit, 2 = Vena Sentral, 3 = Sinusoid, 4 = Kariopiknosis, 5 = Karioreksis

Gambar 4.3 Histopatologi hati mencit dengan pemberian EEDLM

2000 mg/kg bb dan 4000 mg/kg bb

Berdasarkan dari gambar di atas dapat dilihat bahwa gambaran histopatologi pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dengan dosis 250 mg/kg bb masih dalam keadaan normal yaitu hepatosit tersusun secara radial dalam lobulus hati dan belum ada terlihat terjadinya degenerasi hidropik maupun nekrosis, sedangkan pada kelompok perlakuan dengan dosis 500, 1000, 2000, dan 4000 mg/kg bb terlihat bahwa hati mulai mengalami kerusakan yang ditandai dengan susunan sinusoid yang tidak teratur dan sebagian hepatosit mulai mengalami nekrosis.

Nekrosis adalah kematian sel atau jaringan pada organime hidup. Inti sel yang mati dapat terlihat lebih kecil, kromatin dan serabut retikuler menjadi berlipat-lipat. Inti menjadi lebih padat (piknotik) yang dapat hancur bersegmen-segmen (karioreksis) dan kemudian sel menjadi eosinofilik (kariolisis). Sel hepar

1

2

3

4

5

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun lidah mertua (EEDLM) tidak menunjukkan gejala toksik pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dosis 250, 500, dan 1000 mg/kg bb, tetapi pada kelompok perlakuan dengan dosis 2000 dan 4000 mg/kg bb ditemukan adanya gejala toksik yang ditandai dengan adanya penurunan aktivitas motorik mencit dan aktivitas berjalan dengan perut.

5.2 Saran

Diperlukan penelitian lebih lanjut untuk meneliti potensi toksisitas subkronis dan kronis dari ekstrak etanol daun lidah mertua dengan rentang dosis yang lebih bervariatif.

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA 2.1 UraianTumbuhan Lidah Mertua

2.1.1 Sistematika Tumbuhan

Menurut Chase, dkk (2009), sistematika dari tumbuhan lidah mertua adalah sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Divisi : Spermatophyta Kelas : Monocotyledonae Ordo : Asparagales Suku : Asparagaceae Genus : Sansevieria

Spesies : Sansevieria trifasciata

2.1.2 Nama Lain

Di Indonesia, tumbuhan ini umumnya di kenal dengan sebutan lidah mertua. Nama daerah dari tumbuhan lidah mertua, yaitu ki kolo, letah menyawak (Sumatera), nanas belanda (Sunda), pacing towo (Jawa) dan mandafika (Madura) (Utami, 2008).

2.1.3 Morfologi

Lidah mertua merupakan herba menahun, tinggi mencapai 1,8 m dengan akar rimpang berwarna merah-kuning. Daun tunggal, kaku dan keras, permukaan licin, berkumpul sebagai roset akar, yaitu 2-6 helai daun tumbuh berkumpul di

permukaan daun berwarna hijau dengan garis-garis bergelombang horizontal dan tepi daun berwarna kuning cerah, panjang 5-175 cm, lebar 4-9 cm. Bunga majemuk dalam tandan dengan panjang 30-80 cm. Kuntum bunga 3-8 kuntum berkumpul membentuk bulir, berwarna hijau muda, harum dan mekar sepanjang malam. Buah buni, berbiji 1-3, bulat dengan diameter 3 mm dan berwarna merah tua (Dalimartha, 2007).

2.1.4 Kandungan Kimia dan Kegunaan

Bagian tumbuhan yang digunakan sebagai bahan obat adalah daun. Daun lidah mertua mengandung saponin dan polifenol (Dalimartha, 2007). Daun lidah mertua digunakan untuk mengobati flu, batuk, kekurangan vitamin C, bisul, borok, bengkak (memar) dan penyubur rambut (Dalimartha, 2007; Hariana, 2007).

2.2 Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah proses penarikan kandungan kimia yang dapat larut sehingga terpisah dari bahan yang tidak larut dengan pelarut cair. Tujuan utama dari ekstraksi adalah untuk mendapatkan atau memisahkan sebanyak mungkin zat-zat yang memiliki khasiat pengobatan. Zat aktif yang terdapat dalam simplisia tersebut dapat digolongkan ke dalam golongan minyak atsiri, alkaloid, flavonoid dan lain-lain (Ditjen POM. 2000).

Ekstraksi adalah suatu proses pemisahan kandungan senyawa kimia dari jaringan tumbuhan maupun hewan dengan pelarut yang sesuai. Sebelum ekstraksi dilakukan biasanya bahan dikeringkan terlebih dahulu kemudian dihaluskan pada

Menurut Ditjen POM (2000), ada beberapa metode ekstraksi yang sering digunakan yaitu cara dingin dan cara panas.

2.2.1 Cara Dingin

Ekstraksi menggunakan pelarut dengan cara dingin terdiri dari: a. maserasi

Maserasi adalah penyarian simplisia dengan cara perendaman menggunakan pelarut disertai sesekali pengadukan pada temperatur kamar. Maserasi yang dilakukan pengadukan secara terus menerus disebut maserasi kinetik sedangkan yang dilakukan penambahan ulang pelarut setelah dilakukan penyaringan terhadap maserat pertama dan seterusnya disebut remaserasi.

b. perkolasi

Perkolasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan alat perkolator dengan pelarut yang selalu baru sampai terjadi penyarian sempurna yang umumnya dilakukan pada temperatur kamar. Proses perkolasi terdiri dari tahap pengembangan bahan, tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya (penetesan/penampungan ekstrak) terus menerus sampai diperoleh perkolat.

2.2.2 Cara Panas

Ekstraksi menggunakan pelarut dengan cara panas terdiri dari: a. refluks

Refluks adalah proses penyarian simplisia pada temperatur titik didihnya menggunakan alat dengan pendingin balik dalam waktu tertentu dimana pelarut akan terkondensasi menuju pendingin dan kembali ke labu.

temperatur 40 - 50°C. c. sokletasi

Sokletasi adalah proses penyarian menggunakan pelarut yang selalu baru, dilakukan dengan menggunakan alat khusus (soklet) dimana pelarut akan terkondensasi dari labu menuju pendingin, kemudian jatuh membasahi sampel. d. infundasi

Infundasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada temperatur 90°C selama 15 menit.

e. dekoktasi

Dekoktasi adalah proses penyarian dengan menggunakan pelarut air pada temperatur 90°C selama 30 menit.

2.3 Toksisitas

Toksisitas adalah kemampuan suatu zat asing dalam menimbulkan kerusakan pada organisme baik saat digunakan atau saat berada dalam lingkungan (Priyanto, 2009). Menurut Wisaksono (2002), toksisitas adalah potensi bahan kimia untuk meracuni tubuh orang yang terpapar.

Obat sebelum dipasarkan atau digunakan harus menjalani serangkaian uji untuk memastikan efektivitas dan keamanannya (Priyanto, 2009). Uji toksisitas dilakukan untuk memperoleh informasi yang dapat digunakan untuk mengevaluasi resiko akibat pajanan bahan kimia yang terjadi (Klassen, 2012). Uji toksisitas adalah suatu uji untuk mendeteksi efek toksik suatu zat pada sistem biologik dan untuk memperoleh data dosis-respon yang khas dari sediaan uji. Data

ditentukan dosis penggunaannya demi keamanan pemakainya (OECD, 2008).

Penelitian toksisitas konvensional pada hewan coba sering mengungkapkan serangkaian efek akibat pajanan toksikan dalam berbagai dosis untuk berbagai masa pajanan. Penelitian toksikologi biasanya dibagi menjadi tiga kategori (Lu, 1994):

a. uji toksisitas akut dilakukan dengan memberikan bahan kimia yang sedang diuji sebanyak satu kali atau beberapa kali dalam jangka waktu 24 jam.

b. uji toksisitas jangka pendek (dikenal dengan subkronik) dilakukan dengan memberikan bahan kimia berulang-ulang, biasanya setiap hari, selama jangka waktu kurang lebih tiga bulan untuk tikus dan satu atau dua tahun untuk anjing. c. uji toksisitas jangka panjang dilakukan dengan memberikan bahan kimia berulang-ulang selama masa hidup hewan coba atau sekurang-kurangnya sebagian besar dari masa hidupnya, misalnya 18 bulan untuk mencit, 24 bulan untuk tikus dan 7-10 tahun untuk anjing dan monyet.

Efek toksik dari uji toksisitas sangat bervariasi dalam sifat, organ sasaran, maupun mekanisme kerjanya. Semua efek toksik terjadi karena interaksi biokimiawi antara toksikan dengan struktur reseptor tertentu dalam tubuh. Sifat efek toksik pun dapat berbeda-beda. Beberapa efek toksik yang dapat ditimbulkan antara lain (Lu, 1994):

a. efek lokal dan sistemik

sistemik terjadi hanya setelah toksikan diserap dan tersebar ke bagian lain tubuh. Umumnya toksikan hanya mempengaruhi satu atau beberapa organ saja.

b. efek berpulih dan nirpulih

Efek toksik disebut berpulih (reversibel) jika efek itu dapat hilang dengan sendirinya. Sebaliknya, efek nirpulih (ireversibel) akan menetap atau justru bertambah parah setelah pajanan toksikan dihentikan. Efek nirpulih di antaranya karsinoma, mutasi, kerusakan saraf dan sirosis hati.

c. efek segera dan tertunda

Efek segera yaitu efek yang timbul segera setelah satu kali pajanan, sedangkan efek tertunda timbul beberapa waktu setelah pajanan.

d. efek morfologis, fungsionalis dan biokimiawi

Efek morfologis berkaitan dengan perubahan bentuk luar dan mikroskopis pada morfologi jaringan. Efek fungsionalis biasanya berupa perubahan berpulih pada fungsi organ sasaran. Efek biokimiawi adalah efek toksik yang tidak menyebabkan perubahan morfologis.

2.3.1 Uji Toksisitas Akut

Uji toksisitas akut secara umum merupakan uji yang pertama dilakukan. Uji ini memberikan data pada toksisitas relatif yang meningkat dari dosis tunggal hingga dosis berganda. Uji standar tersedia dalam pemberian secara oral, dermal dan inhalasi (Gupta dan Bhardwaj, 2012). Parameter-parameter dasar dalam pengujian toksisitas akut dapat dilihat pada Tabel 2.1.

Tabel 2.1 Parameter dasar pengujian toksisitas akut

Spesies Tikus lebih disukai pada uji oral dan inhalasi, kelinci lebih disukai pada uji secara dermal

Umur Dewasa

Jumlah Hewan 5 jenis setiap jenis kelamin per level dosis

Dosis Tiga level dosis yang direkomendasikan, pemberian secara dosis tunggal selama 24 jam untuk uji oral dan dermal dan 4 jam untuk uji inhalasi

Waktu Pengamatan 14 hari

(Gupta dan Bhardwaj, 2012) Prinsip uji toksisitas akut yaitu sediaan uji dalam beberapa tingkat dosis diberikan pada beberapa kelompok hewan uji dengan satu dosis per kelompok, kemudian dilakukan pengamatan terhadap adanya efek toksik dan kematian. Hewan yang mati selama percobaan dan yang hidup sampai akhir percobaan diotopsi untuk dievaluasi adanya gejala-gejala toksik (BPOM RI., 2014). Tujuan toksisitas akut adalah untuk mendeteksi toksisitas dari suatu zat, menentukan organ sasaran dan kepekaan spesies, memperoleh informasi bahaya setelah pemaparan suatu zat secara akut dan untuk memperoleh informasi awal yang dapat digunakan untuk merancang uji toksisitas selanjutnya serta untuk memperoleh nilai LD50 suatu sediaan (BPOM RI., 2014).

Penelitian uji toksisitas akut sebagian besar dirancang untuk menentukan dosis letal median (LD50) toksikan. LD50 didefinisikan sebagai “dosis tunggal

suatu bahan yang secara statistik diharapkan akan membunuh 50% hewan coba”. Pengujian ini juga dapat menunjukkan organ sasaran yang mungkin dirusak dan efek toksik spesifiknya, serta memberikan petunjuk tentang dosis yang sebaiknya

menghasilkan kematian 50% dari populasi di bawah kondisi yang ditentukan dari tes atau LC50 merupakan konsentrasi perkiraan, dalam lingkungan hewan yang

terpapar, yang akan membunuh 50% dari populasi di bawah kondisi yang ditentukan dari tes (Hodgson dan Levi, 2000).

Nilai LD50 sangat berguna untuk hal-hal sebagai berikut:

a. klasifikasi lazim zat kimia sesuai dengan toksisitas relatifnya dapat dilihat pada Tabel 2.2 (BPOM RI., 2014):

Tabel 2.2 Klasifikasi lazim zat kimia

Tingkat Toksisitas LD50 Klasifikasi

1 ≤ 1 mg/kg Sangat toksik

2 1-50 mg/kg Toksik

3 50-500 mg/kg Toksik sedang

4 500-5000 mg/kg Toksik ringan 5 5-15 g/kg Praktis tidak toksik

6 ≥ 15 g/kg Relatif tidak membahayakan

b. evaluasi dampak keracunan yang tidak sengaja; perencanaan penelitian toksisitas subkronik dan kronik pada hewan, memberikan informasi tentang mekanisme toksisitas, pengaruh umur, seks, faktor penjamu dan faktor lingkungan lainnya dan variasi respons antar spesies dan antar strain hewan; memberikan informasi tentang reaktivitas suatu populasi hewan (Lu, 1994).

2.3.2 Uji Toksisitas Subkronik

Uji toksisitas subkronik dilakukan dengan memberikan bahan berulang, setiap hari /lima hari seminggu, selama jangka waktu 10% dari masa hidup hewan

Tujuan toksisitas subkronik oral pada rodensia adalah untuk memperoleh informasi (BPOM RI., 2014):

a. efek toksik zat yang tidak terdeteksi pada uji toksisitas akut.

b. efek toksik setelah pemaparan sediaan uji secara berulang dalam jangka waktu tertentu.

c. dosis yang tidak menimbulkan efek toksik (No Observed-Adverse

Effect-Level/NOAEL).

d. mempelajari adanya efek kumulatif dan efek reversibilitas setelah pemaparan sediaan uji secara berulang dalam jangka waktu tertentu.

Pengamatan yang dilakukan dalam pengujian toksisitas subkronis adalah pengamatan pada awal pemberian senyawa meliputi penampakan fisik (kematian, membran mucus, kulit dan lain sebagainya), konsumsi makanan, berat badan, respon neurologi, kelakuan yang tidak normal, pernafasan, ECG, EEG, hematologi, pemeriksaan darah, urin. Pengamatan pada akhir pengujian meliputi nekropsi dan histologi (Hodgson dan Levi, 2000).

2.3.3 Uji Toksisitas Kronik

Uji toksisitas kronik oral adalah suatu pengujian untuk mendeteksi efek toksik yang muncul setelah pemberian sediaan uji secara berulang sampai seluruh umur hewan. Perlu dilakukan uji toksisitas kronik mengingat pemakaian obat seringkali memerlukan waktu yang relatif panjang, bahkan mungkin sepanjang masa hidup si pemakai (OECD, 2008).

memerlukan waktu yang lebih lama dan melibatkan kelompok yang lebih besar dari hewan pada uji toksisitas subkronik (Gupta dan Bhardwaj, 2012). Pada tikus, paparan kronik biasanya 6 bulan sampai 2 tahun. Untuk hewan selain tikus biasanya selama satu tahun tetapi mungkin lebih lama (Cassaret dan Doull, 2008).

2.4 Pengujian In Vivo

Pengujian secara in vivo adalah pengujian yang dilakukan dengan menggunakan hewan percobaan untuk mengetahui metabolisme suatu senyawa di dalam tubuh. Hewan percobaan yang digunakan pada percobaan secara in vivo harus dari jenis mamalia, karena hasilnya dapat diterapkan pada manusia. (Retnomurti, 2008). Mencit sebagai hewan percobaan sangat praktis digunakan untuk penelitian yang bersifat kuantitatif karena sifatnya yang mudah berkembangbiak. Selain itu, dalam bidang peternakan mencit tidak membutuhkan biaya yang mahal, efisien dalam waktu, dan kemampuan reproduksi tinggi dengan waktu yang singkat (Hadriyanah, 2008).

Sistem taksonomi mencit adalah sebagai berikut (Pribadi, 2008). Kingdom: Animalia

Filum: Chordata Subfilum: Vertebrata Kelas: Mamalia Ordo: Rodentia Famili: Muridae Genus: Mus

Mencit memiliki beberapa data biologis, diantaranya (Retnomurti, 2008): Lama hidup: 1-2 tahun

Lama produksi ekonomis: 9 bulan Lama hamil: 19-21 hari

Umur dewasa: 35 hari Umur dikawinkan: 8 minggu

Berat dewasa: 20-40 gram (jantan); 18-35 gram (betina)

2.5 Hati

2.5.1 Anatomi Hati

Hati adalah organ terbesar yang terdapat di dalam tubuh kita, letaknya di rongga perut di sebelah kanan bawah diafragma. Hati berwarna merah tua dan beratnya ± 1,5 kg. Hati terbagi dalam dua belahan utama, kanan dan kiri. Permukaan atas berbentuk cembung dan terletak di bawah diafragma, permukaan bawah tidak rata dan memperlihatkan lekukan yang disebut fisura tranversus (Irianto, 2004).

Hati tersusun oleh beberapa tipe sel, yaitu: a. hepatosit

Sel-sel ini merupakan 70% dari semua sel di hati dan 90% dari berat hati total. Hepatosit tersusun dalam unit-unit fungsional yang disebut asinus atau lobules. Setiap lobules memiliki sebuah vena sentral (vena terminalis) dan traktus portal yang terletak di perifer.

hepar, dengan ukuran dan garis tengahnya secara bertahap membesar. c. sel vaskular

Hati memiliki pendarahan ganda. Organ ini menerima darah melalui arteri hepatika dan vena porta. Arteri hepatika dan vena porta masuk ke hati di porta hepatis lalu bercabang menjadi pembuluh yang lebih halus berjalan sejajar sampai mencapai vena sentralis.

d. sinusoid

Sinusoid hati adalah saluran darah yang melebar dan berliku-liku, sinusoid hati dipisahkan dari hepatosit dibawahnya oleh spatium perisinusoideum (disse) subendotelial. Akibatnya, zat makanan yang mengalir di dalam sinusoid memiliki akses langsung melalui dinding endothelial yang tidak utuh dengan hepatosit. Struktur dan jalur sinusoid yang berliku di hati memungkinkan pertukaran zat yang efisien antara hepatosit dan darah. Selain sel endotel, sinusoid hati juga mengandung makrofag, yang disebut sel kuppfer (macrophagocytus stellatus), terletak di sepanjang sinusoid.

e. kandung empedu

Kandung empedu adalah organ kecil berongga yang melekat pada permukaan bawah hati. Empedu diproduksi oleh hepatosit dan kemudian mengalir melalui kanalikuli dan disimpan di dalam kandung empedu (Eroschenko, 2004).

Hati menerima darah dari dua sumber yaitu darah arteri dari arteri hepatika kiri dan kanan, dan darah vena dari vena porta hepatika yang mengalir dari saluran pencernaan dan limpa (Underwood, 1994). Sebanyak 80% dari aliran

meninggalkan hati melalui vena hepatika yang mengalir menuju vena kava inferior (Underwood, 1994).

2.5.2 Fungsi Hati

Organ hati terlibat dalam metabolisme zat makanan serta sebagian besar obat dan toksikan (Lu, 1994). Hati mempunyai fungsi yang sangat banyak dan kompleks yang penting untuk mempertahankan hidup (Husadha, 1996) yaitu: a. fungsi pembentukan dan eksresi empedu

Hal ini merupakan fungsi utama hati yaitu mengeksresikan sekitar satu liter empedu setiap hari. Garam empedu penting untuk pencernaan dan absorbsi lemak dalam usus halus.

b. fungsi metabolik

Hati berperan penting dalam metabolisme karbohidrat, lemak, protein, vitamin dan juga memproduksi energi. Hati mengubah ammonia menjadi urea untuk dikeluarkan melalui ginjal dan usus.

c. fungsi pertahanan tubuh

Hati mempunyai fungsi detoksifikasi dan perlindungan yang dilakukan oleh enzim-enzim hati untuk melakukan oksidasi, reduksi, hidrolisis atau konjugasi zat yang kemungkinan membahayakan dan mengubahnya menjadi zat yang secara fisiologis tidak aktif. Fungsi perlindungan dilakukan oleh sel kupffer yang terdapat di dinding sinusoid hati.

2.5.3 Biokimia Hati

a. ALT (alanin aminotransferase)

Enzim ini mengkatalis pemindahan satu gugus amino antara lain alanin

dan α-ketoglutarat menjadi glutamate dan piruvat yang bersifat reversibel.

Terdapat banyak di hepatosit dan konsentrasinya relatif rendah di jaringan lain. Aktivitas normal dalam darah 5 – 35 U/L pada manusia (Husadha, 1996), pada mencit adalah 25 – 200 IU/L (Hall, 2007). ALT lebih sensitif dibandingkan AST (Sacher dan Person, 2002).

b. AST (aspartat aminotransferase)

Enzim ini berfungsi sebagai katalisator reaksi antara asam aspartat dan asam α-ketoglutarat menjadi glutamate dan oksalasetat yang bersifat reversibel. AST terdapat lebih banyak di jantung dibandingkan di hati, selain itu enzim ini juga terdapat di otot rangka, otak dan ginjal. Aktivitas normal dalam darah 10 – 40 U/L dan meningkat tajam apabila terjadi infark miokardium (Husadha, 1996). Enzim ini kurang spesifik untuk penyakit hati (Gaze, 2007).

Ketika sel hati mengalami kerusakan, enzim transaminase tersebut berada di dalam darah, sehingga dapat diukur aktivitasnya. Hal ini disebabkan karena terjadi kerusakan pada struktur dan fungsi membran sel hati, aktivitas ALT lebih dini dan lebih cepat meningkat dari aktivitas AST (Widmann, 1995).

2.5.4 Gangguan Fungsi Hati Akibat Zat Toksik

Jenis-jenis kerusakan hati yang disebabkan oleh zat toksik antara lain (Lu, 1994):

b. kolestasis

Kolestasis bersifat akut dan lebih jarang ditemukan jika dibandingkan steatosis dan nekrosis. Contoh penyebabnya yaitu klorpromazin dan eritromisin laktobionat.

c. karsiogenesis

Karsinoma hepatoseluler adalah jenis neoplasma ganas yang paling umum pada hati. Contoh penyebab karsiogenesis seperti vinil klorida, aflaktosin dan dioksin.

d. nekrosis

Nekrosis adalah kematian hepatosit. Nekrosis dapat bersifat sentral atau perifer, dan biasanya nekrosis merupakan kerusakan akut. Beberapa zat kimia telah dilaporkan dan terbukti sebagai penyebab nekrosis hati. Nekrosis hati merupakan suatu manifestasi toksik yang berbahaya, tetapi tidak selalu kritis karena mempunyai kapasitas yang luar biasa untuk pertumbuhan kembali. Contoh penyebab nekrosis hati yaitu karbon tetraklorida (CCl4), kloroform, isoniazida dan

parasetamol. Nekrosis hati oleh parasetamol bersifat sentrilobular. e. sirosis

Sirosis ditandai oleh adanya septa kolagen yang tersebar di sebagian besar hati. Pada sebagian besar kasus, sirosis disebabkan nekrosis sel tunggal karena kurangnya mekanisme perbaikan sehingga terjadi fibroblastik dan pembentukan jaringan parut. Penyebab sirosis yang paling penting adalah penggunaan kronis alkohol.

dapat dibedakan dari hepatitis virus. Pada umumnya, obat itu mempunyai ciri-ciri berikut:

i. kerusakan hati semacam itu tidak dapat diperlihatkan pada hewan. ii. tampaknya beberapa efek pada manusia tidak berkaitan dengan dosis. iii. masa laten sangat beragam.

iv. toksisitas hanya muncul pada beberapa individu yang rentan. v. gambaran histopatologi lebih beragam.

vi. biasanya pasien memperlihatkan tanda-tanda hipersensitivitas lain dan kadang- kadang bereaksi terhadap suatu dosis tantangan.

vii. demam, ruam dan eosinofilia sering ditemukan.

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Lidah Mertua atau snake plant (tanaman ular) merupakan nama lain dari tanaman Sansevieria. Sansevieria trifasciata Prain termasuk dalam divisi Spermatophyta, kelas Monocotyledonae, ordo Asparagales, famili Asparagaceae, genus Sansevieria, dan spesies S. trifasciata Prain (Chase, 2009).

Lidah Mertua telah lama dikenal oleh banyak orang dan mulai dibudidayakan sebagai tanaman hias mulai abad ke-19. Selain sebagai tanaman hias, lidah mertua juga digunakan sebagai bahan baku tekstil dengan cara diambil seratnya, yang banyak digunakan di Cina dan New Zealand (Purwanto, 2006). Di Afrika, getah dari tanaman tersebut dapat digunakan sebagai anti racun ular dan serangga. Beberapa penelitian telah dilakukan untuk menggali potensi tanaman ini. Menurut Ulya dan Rusman (2012), S. hyacinthoides mengandung senyawa fenol, proantosianidin, dan flavonoid yang berpotensi terhadap antibakteri dan antioksidan. Adanya zat-zat alami pada daun lidah mertua yang bekerja sebagai antioksidan, diharapkan dapat menanggulangi perkembangan sel kanker.

Uji toksisitas akut adalah salah satu uji praklinik penting untuk menentukan efek toksik suatu senyawa yang akan terjadi pada waktu yang singkat setelah pemberiannya dalam takaran tertentu (Utomo, 2008). Prinsip uji toksisitas akut oral yaitu, sediaan uji dalam beberapa tingkat dosis diberikan pada beberapa

Tujuan uji toksisitas akut adalah untuk mendeteksi toksisitas intrinsik suatu zat, menentukan organ sasaran dan kepekaan spesies dan untuk memperoleh nilai LD50 suatu bahan/sediaan dan penentuan penggolongannya dalam pelabelan (Lu,

1994). Uji toksisitas tidak menunjukkan bahwa bahan kimia itu aman, akan tetapi untuk mengkarakterisasikan efek racun kimia yang dapat dihasilkan (Casarret, 2008).

Sifat kimiawi daun Lidah Mertua adalah berasa pedas dengan efek farmakologis untuk mengobati demam, flu, batuk, sakit tenggorokan, sakit gigi, sariawan, gusi berdarah, kencing manis, kekurangan vitamin C, menghilangkan dahak dan haus. Manfaat Lidah Mertua lainnya yaitu untuk mengobati darah tinggi, radang saluran pernapasan, diare, sífilis, TBC kelenjar (Tuberculous lymphadenopathy), ambeien (wasir), astringent, hipotensif, mengobati bengkak (edema), eksim, bisul, digigit lipan, digigit ular berbisa, sakit gigi, penyubur rambut (Ulya dan Rusman, 2012).

Beberapa efek biologis yang sudah terbukti dari ekstrak etanol daun lidah mertua adalah efek analgesik dan antipiretik (Sunilson, et al., 2009), antibakteri (Rohmanto, 2013) dan antioksidan (Mahardika, 2014). Selain itu, daun lidah mertua juga memiliki efek antidiabetes (Qomariyah, 2012). Oleh karena penggunaan obat antidiabetes dalam jangka waktu yang panjang atau seumur hidup pasien, maka disarankan untuk melakukan uji toksisitas agar dapat diketahui tingkat keamanan dalam penggunaannya.

Berdasarkan uraian di atas, maka peneliti tertarik untuk meneliti apakah daun lidah mertua memiliki potensi ketoksikan akut.

1.2Perumusan Masalah

Berdasarkan latar belakang di atas, maka rumusan masalah penelitian ini adalah apakah ekstrak etanol daun lidah mertua (Sansevieria trifasciata Prain) mempunyai potensi ketoksikan akut pada mencit?

1.3.Hipotesis

Berdasarkan perumusan masalah di atas, maka hipotesis penelitian ini adalah ekstrak etanol daun lidah mertua (Sansevieria trifasciata Prain) mempunyai potensi ketoksikan akut terhadap mencit.

1.4 Tujuan Penelitian

Berdasarkan hipotesis di atas, maka tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi toksisitas akut ekstrak etanol daun lidah mertua (Sansevieria

trifasciata Prain) terhadap mencit. 1.5 Manfaat Penelitian

Adapun manfaat dari penelitian ini adalah memberikan informasi tentang: a. keamanan dari ekstrak etanol daun lidah mertua.

b. pengaruh pemberian ekstrak etanol daun lidah mertua terhadap perilaku.

c. pengaruh pemberian ekstrak etanol daun lidah mertua terhadap berat badan dan organ.

1.6 Kerangka Pikir Penelitian

Pada penelitian ini terdapat dua variabel sebagai variabel bebas yaitu larutan suspensi CMC-Na 0,5% dan ekstrak etanol daun lidah mertua (EEDLM) dosis 250, 500, 1000, 2000 dan 4000 mg/kg bb. Potensi ketoksikan akut yang

kadar ALT dan gambaran histopatologi hati sebagai variabel terikat seperti yang ditunjukkan pada Gambar 1.1.

Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter

Gambar 1.1Skema kerangka pikir penelitian

Larutan suspensi CMC-Na 0,5 %

Potensi ketoksikan akut Perilaku fisik Ekstrak Etanol Daun Lidah Mertua (EEDLM) dosis 250, 500, 1000, 2000, 4000

mg/kg bb Jumlah mencit yang mati Gambaran histopatologi hati Kadar ALT Mencit Jantan Berat badan Berat organ Waktu pengamatan selama 14 hari Serbuk

Simplisia

2.1.4 Kandungan kimia dan kegunaan ... 6

2.2 Metode ekstraksi ... 6

2.2.1 Cara dingin ... 7

2.2.2 Cara panas ... 7

2.3 Toksisitas ... 8

2.3.1 Uji Toksisitas Akut ... 10

2.3.2 Uji Toksisitas Subkronik ... 12

2.3.3 Uji Toksisitas Kronik ... 13

2.4 Pengujian In Vivo ... 14

2.5 Hati ... 15

2.5.1 Anatomi Hati ... 15

2.5.2 Fungsi Hati ... 17

2.5.3 Biokimia Hati ... 17

2.5.4 Gangguan Fungsi Hati Akibat Zat Toksik ... 18

BAB III METODOLOGI PENELITIAN ... 21

3.1 Lokasi Penelitian ... 21

3.2 Jenis Penelitian .. ... 21

3.3 Alat ... 21

3.4 Bahan ... 22

3.5 Hewan Percobaan ... 22

3.6 Penyiapan Bahan Tumbuhan ... 22

3.6.1 Pengumpulan Tumbuhan ... 22

3.6.2 Identifikasi Tumbuhan ... 22

3.7 Karakterisasi Simplisia ... 23

3.7.1 Pemeriksaan makroskopik ... 23

3.7.2 Pemeriksaan mikroskopik ... 23

3.7.3 Penetapan kadar air ... 24

3.7.4 Penetapan kadar sari yang larut dalam air ... 24

3.7.5 Penetapan kadar sari yang larut dalam etanol ... 25

3.7.6 Penetapan kadar abu total ... 25

3.7.7 Penetapan kadar abu yang tidak larut dalam asam ... 25

3.8 Skrining Fitokimia ... 26

3.8.1 Pemeriksaan alkaloid ... 26

3.8.2 Pemeriksaan flavonoid ... 26

3.8.3 Pemeriksaan tanin ... 26

3.8.4 Pemeriksaan glikosida ... 27

3.8.5 Pemeriksaan saponin ... 27

3.8.6 Pemeriksaan steroid/triterpenoid ... 28

3.9 Tahap Penelitian ... 28

3.9.1 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Lidah Mertua (EEDLM) ……… 28

3.9.2 Pembuatan Suspensi CMC-Na 0,5% ... 28

3.9.3 Penyiapan dan Pengelompokkan Hewan Uji ... ... 29

3.9.4 Pemberian Sediaan Uji dan Pengamatan Gejala Toksik ……… .... .. 29

3.10 Analisis Data ……….. 31

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ... .. 32

4.2 Karakterisasi Tumbuhan dan Simplisia ... 32

4.2.1 Pemeriksaan Makroskopik ... 32

4.2.2 Pemeriksaan Mikroskopik ... 33

4.2.3 Pemeriksaan Karakterisasi ……… ... 33

4.3 Skrining Fitokimia ... 35

4.4 Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Lidah Mertua (EEDLM) ……… 35

4.4.1 Pengamatan Gejala Toksik ... 36

4.4.2 Pengamatan Berat Badan ... 38

4.4.3 Pengamatan Kematian ... 39

4.4.4 Berat Organ Relatif ... 40

4.4.5 Makroskopik Hati Mencit ………. ... 40

4.4.6 Pengukuran Kadar ALT ………. ... 41

4.4.7 Gambaran Histopatologi Organ Hati ……… ... 42

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ... 45

5.1 Kesimpulan ... 45

5.2 Saran ... ... 45

DAFTAR PUSTAKA ... 46

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman 2.1 Parameter dasar pengujian toksisitas akut ………. 11 2.2 Klasifikasi lazim zat kimia ……... 12 4.1 Karakterisasi serbuk simplisia daun lidah mertua ... 33 4.2 Skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak

etanol daun lidah mertua ………. ... 35 4.3 Pengamatan gejala toksik ... 36 4.4 Uji panggung ... 37

4.5 Uji katalepsi ... 38 4.6 Rata-rata berat badan mencit setelah pemberian ekstrak

etanol daun lidah mertua minggu I dan II ………. ... 38 4.7 Pengamatan kematian mencit setelah pemberian ekstrak

etanol daun lidah mertua selama 14 hari ……… .... 39 4.8 Nilai rata-rata berat relatif organ pada akhir perlakuan ... 40 4.9 Hasil pengamatan makroskopik organ hati mencit ... 41 4.10 Pengukuran rata-rata kadar ALT mencit setelah

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Kerangka pikir penelitian ... 4 4.1 Hasil histopatologi hati mencit dengan pemberian

CMC Na 0,5% dan EEDLM 250 mg/kg bb ……… ... 43 4.2 Hasil histopatologi hati mencit dengan pemberian

EEDLM 500 mg/kg bb dan 1000mg/kg bb ... 43 4.3 Hasil histopatologi hati mencit dengan pemberian

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Hasil persetujuan etik ... 50

2 Hasil identifikasi tumbuhan ... 51

3 Hasil potongan daun lidah mertua segar ... 52

4 Gambar serbuk simplisia dan simplisia daun lidah mertua .... 53

5 Hasil pemeriksaan mikroskopik simplisia daun lidah mertua ... 54

6 Bagan kerja penelitian ... 55

7 Contoh perhitungan dosis ………. 56

8 Perhitungan pemeriksaan karakteristik serbuk simplisia ... 57

9 Alat dan bahan yang digunakan ... 62

10 Uji toksisitas akut ... 64

11 Hasil makroskopik organ ... 65

12 Hasil pemeriksaan kadar Serum Glutamat Piruvat Transaminase ……… 70