Cara kerja dan teknik pengumpulan data

40  Pasien diseleksi berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi dan dicari data rekam medis pasien tersebut.  Pada blok parafin dilakukan pemeriksaan imunohistokimia vimentin. Pemeriksaan imunohistokimia adalah pemeriksaan jaringan yang telah dilabel dengan antibodi spesifik untuk melihat ekspresi protein antigen spesifik dengan mikroskop.  Pembacaan hasil pemeriksaan imunohistokimia dilakukan oleh dua dokter spesialis Patologi Anatomi.  Hasil interpretasi sediaan tersebut dilakukan analisis statistik. 3.8 Prosedur Pemeriksaan Imunohistokimia 3.8.1 Alat dan Bahan Penelitian Alat-alat yang diperlukan untuk penelitian ini adalah: mikrotom, waterbath, hot plate, freezer, incubator, staining jar, rak object glass, pipet mikro, kertas saring, tabung sentrifuge 15ml, coated object glass, kaca penutup, entelan dan mikroskop cahaya,Microwave Samsung R Triple Distribution System, Korea , mikroskop. Bahan-bahan yang diperlukan untuk penelitian ini adalah xylene, alkohol absolut 70, alkohol absolut 80, akuades, target retrieval solution TRS, wash buffer WB, Dako FLEX tm peroxidase,Dako FLEX tm Diamino Benzidine DAB, phosphate buffer saline PBS, hematoxylin, mounting medium, Antibodi primer : Monoclonal Mouse Anti-Vimentin Clone V9. 41

3.8.2 Cara kerja

- Blok parafin yang telah dikumpulkan, disimpan dalam freezer sampai cukup dingin, selanjutnya dipotong tipis dengan menggunakan mikrotom dengan tebal 4µm dan ditempelkan pada coated object glass. - Warnai dengan metode imunohistokimia dengan tahap sebagai berikut 1. Deparaffinizing and rehidrasi 2. Penerimaan antigen 3. Pewarnaan immunohistokimia antibody primer 4. Counterstaining 5. Dehidrasi and stabilisasi dengan mounting medium 6. Melihat pewarnaan di bawah mikroskop Tabel 3.1. Tahapan Pewarnaan Vimentin Panaskan slide hasil potongan microtome pada hotplate suhu 60 C 60 menit Xylene 2 kali 10 menit Rehidrasi Alkohol absolut, 80, 70 15 menit Bilas dengan air mengalir keran 5 menit Akuades 5 menit Masukkan slide ke dalam TRS yang sudah dihangatkan Masukkan ke dalam Microwave Samsung TDS dengan kondisi sbb: 800 Watt 3 menit 100 Watt 20 menit