Pembuatan Media Mueller Hinton Agar MHA Pembuatan Media Nutrient NA, Media Agar Miring dan Stok Kultur Bakteri Penyiapan Inokulum Bakteri Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol dan Etil Asetat Daun Benalu Kopi

b. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol dan Etil Asetat Daun Benalu Kopi

1 ml larutan DPPH 0,3 mM Dimasukkan kedalam tabung reaksi Ditambahkan 2,5 ml ekstrak metanol daun benalu kopi sesuai dengan variasi konsentrasi Dihomogenkan Dibiarkan selama 30 menit pada ruang gelap Diukur absorbansi pada panjang gelombang maksimum 515 nm Hasil Dilakukan perlakuan yang sama untuk ekstrak Etil Asetat Daun Benalu Kopi.

3.3.5 Uji Sifat Antibakteri Ekstrak Metanol dan Etil Asetat Daun Benalu Kopi

3.3.5.1 Pembuatan Media Mueller Hinton Agar MHA

7 gram media MHA Mueller Hinton Agar Dilarutkan dengan 250 ml aquadest dalam gelas erlenmeyer Dipanaskan sambil diaduk hingga larut dan mendidih Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit Media MHA Mueller Hinton Agar steril Universitas Sumatera Utara

3.3.5.2 Pembuatan Media Nutrient NA, Media Agar Miring dan Stok Kultur Bakteri

7 gram media NA Nutrient Agar Dilarutkan dengan 250 ml aquadest kedalam gelas erlenmeyer Dipanaskan sambil diaduk hingga larut dan mendidih Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit Media NA Nutrient Agar steril Dituangkan kedalam tabung reaksi sebanyak 3 ml Dibiarkan pada temperatur kamar sampai memadat pada posisi miring membentuk sudut 30-45 o C Diambil biakan bakteri Staphylococcus aureus dari strain utama dengan jarum ose laludigoreskan pada media NA yang telah memadat Diinkubasi pada suhu 35 o C selama 18-24 jam Stok Kultur Bakteri Dilakukan hal yang sama bakteri Escherichia coli. Universitas Sumatera Utara

3.3.5.3 Penyiapan Inokulum Bakteri

6,5 gram Media NB Nutrient Broth Dilarutkan dengan 500 ml aquadest kedalam gelas erlenmeyer Dipanaskan sambil diaduk hingga larut dan mendidih Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit Media NB Nutrient Broth steril Dituangkan kedalam tabung reaksi sebanyak 5 ml Diambil koloni bakteri dari stok kultur bakteri Staphylococcus aureus dengan jarum ose Disuspensikan kedalam Nutrient Broth NB Diinkubasi pada suhu 350 o C selama 2-3 jam Diukur kekeruhan larutan pada panjang gelombang 580-600 nm sampai diperoleh transmitan 25 disamakan kekeruhanna dengan standart Mcfarland Hasil Dilakukan perlakuan yang sama untuk bakteri Escherchia coli. Universitas Sumatera Utara

3.3.5.4 Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Metanol dan Etil Asetat Daun Benalu Kopi

0,1 ml Inokulum Bakteri Dimasukkan kedalam cawan petri steril Ditambah dengan 15 ml media Mueller Hinton Agar MHA dengan suhu 45-50 o C Dihomogenkan sampai media dan bakteri tercampur rata Dibiarkan sampai media memadat Dimasukkan kertas cakram yang telah direndam dengan ekstrak metanol daun benalu kopi dengan berbagai konsentrasi dengan cawan petri yang telah berisi bakteri Diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 35 o C Diukur diameter zona bening di sekitar cakram dengan jangka sorong Hasil Universitas Sumatera Utara BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Hasil Penelitian