Nutrient Agar NA Lactose broth LB Eosin Methylene Blue Agar EMBA

UIN Syarif Hidayatullah Jakarta 2. Uji Penguat Confirmed Test Hasil uji dugaan dilanjutkan dengan uji penguat. Hasil tabung yang positif terbentuk asam dan gas terutama pada masa inkubasi 1x24 jam, suspensi ditanamkan pada media Eosin Methylen Blue Agar EMBA secara aseptik dengan menggunakan jarum inokulasi. Koloni bakteri Escherichia coli tumbuh berwarna merah kehijauan dengan kilat metalik atau koloni berwarna merah muda dengan lendir untuk kelompok coliform lainnya. 3. Uji Pelengkap Completed Test Pengujian selanjutnya dilanjutkan dengan uji pelengkap untuk menentukan bakteri Escherichia coli. Hasil positif pada uji penguat diinokulasikan ke dalam medium Lactose Broth dan medium medium agar miring Nutrient Agar NA dengan ose secara aseptik dan diinkubasikan pada suhu 37 ᵒ C selama 1x24 jam. Hasil positif terbentuk asam dan gas pada media Lactose Broth yang menunjukan sampel positif mengandung bakteri Escherichia coli. Uji pelengkap juga bisa dilakukan untuk membedakan bakteri golongan coli dari bakteri golongan coli fekal berasal dari tinja hewan berdarah panas. Bakteri yang telah diinokulasikan pada media Lactose Brothdiinkubasi pada suhu 37 ˚ C untuk golongan coli dan satu seri diinkubasi pada suhu 42 ˚ C untuk golongan coli fekal. Bakteri golongan coli tidak dapat tumbuh dengan baik pada suhu 37 ˚ C, sedangkan golongan coli fekal dapat tumbuh dengan baik pada suhu 42 ˚ C Widiyanti dkk., 2004.

2.7 Media Pertumbuhan

2.7.1 Nutrient Agar NA

Nutrient Agar NA merupakan media kultur dasar untuk pertumbuhan mikroorganisme dan media pemurnian sebelum dilakukan uji biokimia dan serologi Norris dkk., 1969. Komposisi Nutrient Agar adalah pepton, ekstrak daging, natrium klorida, dan agar dengan pH 7,3 ± 0,1. UIN Syarif Hidayatullah Jakarta

2.7.2 Lactose broth LB

Lactose broth merupakan media yang digunakan pada uji penduga untuk melihat adanya bakteri coliform pada air. Komposisi media Lactose Broth adalah bubuk Lab-Lemco, pepton, dan laktosa dengan pH 6,9 ± 0,2 pada suhu 25 ᵒ C. Hasil fermentasi laktosa akan menghasilkan gas pada tabung durham APHA, 1989.

2.7.3 Eosin Methylene Blue Agar EMBA

Eosin Methylene Blue Agar EMBA merupakan media yang digunakan untuk isolasi bakteri coliform fekal. Komposisi media Eosin Methylene Blue Agaradalah pepton, laktosa, kalium hidrogen fosfat, eosin Y, methylene blue dan agar dengan pH 6,8± 0,2 pada suhu 25 ᵒ C. Pewarna menghambat pertumbuhan organisme Gram positif dalam kondisi asam dan memproduksi kompleks ungu gelap disertai dengan kilap hijau metalik. Kilap hijau metalik merupakan indikator hasil fermentasi laktosa oleh bakteri coliform fekal Leboffe dan Pierre, 2010.

2.7.4 SulfideIndole Motility SIM