30
3.5. Variabel Penelitian
3.5.1. Variabel Bebas
Variabel bebas adalah ekstrak metanol daun sirsak anonna muricata dengan dosis 2 mgkgbb dan 4 mgkgbb.
3.5.2 Variabel Tergantung
Aktivitas proliferasi yaitu proses pembelahan sel, melalui tahapan yang disebut siklus sel. Pembelahan sel terdiri dari 4 tahapan yaitu G1, S, G2dan M, yang akan
memberikan ekspresi positif dengan pewarnaan immuno-histokimia Ki67 pada semua tahapan kecuali tahapan G0, skala rasio.
3.6. Bahan dan Alat
3.6.1. Bahan untuk perlakuan
Bahan-bahan yang dibutuhkan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :
1. Hewan coba adalah tikus strain Wistar dengan umur 8-12 minggu dan berat badan 130-250 gram. Tikus diperoleh dari Laboratorium Biologi FMIPA
USU. Tumor diperoleh dari tikus donor yang diinduksi benzoalphapyrene. Tumor yang mengandung sel kanker dari tikus donor akan ditranplantasikan
ke tikus resipien. Sebelum ditransplantasikan, tumor dari tikus akan diinsisi biopsi dan dilakukan pemeriksaan histologi untuk konfirmasi jenis tumornya.
Universitas Sumatera Utara
31
2. Bahan uji daun sirsak anonna muricata diperoleh dari toko tanaman buah dan diekstraksi di bagian Laboratorium Farmasi Fak. Farmasi USU. Daun
sirsak segar didapat dari pohon sirsak yang sudah pernah berbuah, daun keempat atau kelima kematangan yang sedang dari pucuk ranting. Dosis
ekstrak daun sirsak yang digunakan adalah dosis konversi dosis lazim ekstrak daun sirsak untuk manusia dewasa terhadap dosis tikus dengan berat 130-250
gr. Dosis lazim untuk manusia dewasa tersebut adalah 2 grhr dan 4 grhr. 3. Bahan karsinogen yaitu benzoalphapyrene dikeluarkan oleh Sigma sebanyak
0,3 mg grbbhr dalam oleum olivarium.
3.6.2. Bahan transplantasi jaringan tumor pada tikus
Larutan PBS, alkohol 70, larutan garam fisiologis, es batu, tikus donor bertumor dan tikus resipien.
3.6.3. Bahan untuk pemeriksaan histopatologi dan immunohistokimia
Formalin buffer 10, alkohol 50, 70, 80, 90, absolut, xylol, parafin cair, bahan pengecatan hemtoksilin-eosin HE, canada balsem dan entelan, Ki-67
Antigen.
3.6.4. Alat transplantasi jaringan tumor pada tikus
Cawan petri ukuran 6 cm dan 15 cm, cawan ukuran 10 cm, spuit 1 cc, jarum suntik trocar, gunting lurus 10 cm, gunting bengkok 10 cm, pinset anatomi 10 cm,
alat fiksasi.
Universitas Sumatera Utara
32
3.6.5. Alat-alat untuk pewarnaan HE dan imunohistokimia