30
3.5. Variabel Penelitian
3.5.1. Variabel Bebas
Variabel  bebas  adalah  ekstrak  metanol  daun  sirsak  anonna  muricata  dengan dosis 2 mgkgbb dan 4 mgkgbb.
3.5.2 Variabel Tergantung
Aktivitas  proliferasi  yaitu  proses  pembelahan  sel,  melalui  tahapan  yang  disebut siklus sel. Pembelahan sel terdiri dari 4 tahapan yaitu G1, S, G2dan M, yang akan
memberikan  ekspresi  positif  dengan  pewarnaan  immuno-histokimia  Ki67  pada semua tahapan kecuali tahapan G0, skala rasio.
3.6. Bahan dan Alat
3.6.1. Bahan untuk perlakuan
Bahan-bahan yang dibutuhkan dalam penelitian ini adalah sebagai berikut :
1.  Hewan  coba adalah tikus strain  Wistar dengan umur  8-12 minggu dan  berat badan  130-250  gram.  Tikus  diperoleh  dari  Laboratorium  Biologi  FMIPA
USU.  Tumor  diperoleh  dari  tikus  donor  yang  diinduksi  benzoalphapyrene. Tumor  yang  mengandung  sel  kanker  dari  tikus  donor  akan  ditranplantasikan
ke  tikus  resipien.  Sebelum  ditransplantasikan,  tumor  dari  tikus  akan  diinsisi biopsi dan dilakukan pemeriksaan histologi untuk konfirmasi jenis tumornya.
Universitas Sumatera Utara
31
2.  Bahan  uji  daun  sirsak  anonna  muricata  diperoleh  dari  toko  tanaman  buah dan  diekstraksi  di  bagian  Laboratorium  Farmasi  Fak.  Farmasi  USU.  Daun
sirsak  segar  didapat  dari  pohon  sirsak  yang  sudah  pernah  berbuah,  daun keempat  atau  kelima  kematangan  yang  sedang  dari  pucuk  ranting.  Dosis
ekstrak daun sirsak yang digunakan adalah dosis konversi dosis lazim ekstrak daun sirsak untuk manusia dewasa  terhadap dosis tikus dengan berat 130-250
gr. Dosis lazim untuk manusia dewasa tersebut adalah 2 grhr dan 4 grhr. 3.  Bahan  karsinogen  yaitu  benzoalphapyrene  dikeluarkan  oleh  Sigma  sebanyak
0,3 mg grbbhr dalam oleum olivarium.
3.6.2. Bahan transplantasi jaringan tumor pada tikus
Larutan PBS, alkohol 70, larutan garam fisiologis, es batu, tikus donor bertumor dan tikus resipien.
3.6.3. Bahan untuk pemeriksaan histopatologi dan immunohistokimia
Formalin buffer 10, alkohol 50, 70, 80, 90, absolut, xylol, parafin cair, bahan  pengecatan  hemtoksilin-eosin  HE,  canada  balsem  dan  entelan,  Ki-67
Antigen.
3.6.4. Alat transplantasi jaringan tumor pada tikus
Cawan  petri  ukuran  6  cm  dan  15  cm,  cawan  ukuran  10  cm,  spuit  1  cc,  jarum suntik trocar, gunting lurus 10 cm, gunting bengkok 10 cm, pinset anatomi 10 cm,
alat fiksasi.
Universitas Sumatera Utara
32
3.6.5. Alat-alat untuk pewarnaan HE dan imunohistokimia