Efek Pemberian Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona Muricata L.) Sebagai Imunostimulan Terhadap Mencit Jantan Yang Diinduksi Dengan Prednison

Gambar 2. Daun sirsak (Annona muricata folium)

Gambar 4. Serbuk Simplisia Daun Sirsak

Keterangan: 1. Epidermis atas 5. Serabut

2. Jaringan palisade 6. Rambut penutup

3. Stomata tipe anomasitik 7. Pembuluh kaya dengan penebalan 4. Parenkim bernoktah tangga

a. Berat sampel = 5,001g Volume air = 0,4 ml

Kadar air =

b. Berat sampel = 5,002 g

Volume air = 0,4 ml

Kadar air =

c. Berat sampel = 5,003 g

Volume air = 0,4 ml

Kadar air =

Kadar air rata-rata =

a. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air

a. Berat sampel = 5,012 g Berat sari = 0,188 g Kadar sari =

b. Berat sampel = 5,018 g

Berat sari = 0,186 g Kadar sari =

c. Berat sampel = 5,010 g

Berat sari = 0,194 g

Kadar sari =

Kadar sari rata-rata =

a. Berat sampel = 5,000 g Berat sari = 0,194 g Kadar sari =

b. Berat sampel = 5,012 g

Berat sari = 0,183 g Kadar sari =

c. Berat sampel = 5,001 g

Berat sari = 0,198 g

Kadar sari =

Kadar sari rata-rata =

c. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Total

a. Berat sampel = 2,006 g Berat abu = 0,122 g Kadar abu =

b. Berat sampel = 2,001 g

Berat abu = 0,115 g

Kadar abu =

c. Berat sampel = 2,002 g

Berat abu = 0,110 g

Kadar abu =

Kadar abu total rata-rata =

a. Berat sampel = 2,006 g Berat abu = 0,03 g Kadar abu =

b. Berat sampel = 2,001 g

Berat abu = 0,028 g

Kadar abu =

c. Berat sampel = 2,0002 g

Berat abu = 0,025 g

Kadar abu =

Kadar abu total rata-rata =

1. Perhitungan Penetapan Kadar Air

a. Berat sampel = 5,007g Volume air = 0,1 ml Kadar air =

b. Berat sampel = 5,005 g

Volume air = 0,2 ml

Kadar air =

c. Berat sampel = 5,007 g

Volume air = 0,2 ml

Kadar air =

Kadar air rata-rata =

a. Berat sampel = 5,032 g Berat sari = 0,025 g Kadar sari =

b. Berat sampel = 5,040 g

Berat sari = 0,012 g Kadar sari =

c. Berat sampel = 5,021 g

Berat sari = 0,015 g

Kadar sari =

Kadar sari rata-rata =

d. Perhitungan Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol

a. Berat sampel = 5,031 g Berat sari = 0,297 g Kadar sari =

b. Berat sampel = 5,062 g

Berat sari = 0,323 g Kadar sari =

c. Berat sampel = 5,015 g

Berat sari = 0,294 g

Kadar sari =

Kadar sari rata-rata =

a. Berat sampel = 2,003 g Berat abu = 0,03 g Kadar abu =

b. Berat sampel = 2,013 g

Berat abu = 0,052 g

Kadar abu =

c. Berat sampel = 2,068 g

Berat abu = 0,042 g

Kadar abu =

Kadar abu total rata-rata =

d. Perhitungan Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam

a. Berat sampel = 2,003 g Berat abu = 0,016 g Kadar abu =

b. Berat sampel = 2,013 g

Berat abu = 0,015 g

Kadar abu =

c. Berat sampel = 2,068 g

Berat abu = 0,019 g

Kadar abu =

Kadar abu total rata-rata =

Dibersihkan dari pengotor

Dicuci sampai bersih, ditiriskan ., ditimbang

Dikeringkan pada suhu ± 40oC

Dihaluskan Ditimbang

Berat kering 642 g

623g serbuk simplisia

Maserat I Ampas

Karakterisasi Simplisia

 Pemeriksaan makroskopik  Pemeriksaan mikroskopik  Penetapan kadar abu total  Penetapan kadar abu tidak larut dalam asam

 Penetapan kadar air  Penetapan kadar sari larut

dalam air

 Penetapan kadar sari larut dalam etanol

 Pemeriksaan skrining fitokimia

Ekstraksi (570g)

Dimaserasi menggunakan etanol 96 % yang telah didestilasi (4,3 L) selama 5 hari

Berat basah 1902,6g

Dimaserasi menggunakan etanol 96 % yang telah didestilasi (1,4 L) selama 2 hari

Maserat II Ampas

Diuapkan menggunakan

rotary evaaporator

Ekstrak kental 82,8g

6.1 Cell-Dyn 1800

Mencit 20 g

Tikus 200 g

Marmut 400 g

Kelinci 1,2 kg

Kera 4 kg

Anjing 12 kg

Manusia 70 kg Mencit

20g 1,0 7,0 12,25 27,8 64,1 124,2 387,9 Tikus

200g 0,14 1,0 1,74 3,9 9,2 17,8 56,0

Marmut

400 g 0,08 0,57 1,0 2,25 5,2 10,2 31,5

Kelinci

1,2 kg 0,04 0,25 0,44 1,0 2,4 4,5 14,2

Kera

4 kg 0,016 0,11 0,19 0,42 1,0 1,9 6,1

Anjing

12 kg 0,008 0,06 0,10 0,22 0,52 1,0 3,1 Manusia

pada mencit

- Dosis suspensi ekstrak etanol daun sirsak yang akan dibuat adalah 15 mg/kg bb, 25 mg/kg bb, dan 35 mg/kg bb.

a. Cara pembuatan suspensi ekstrak daun sirsak:

Timbang 15, 25 dan 35 mg ekstrak daun sirsak digerus di dalam lumpang berbeda, kemudian ditambahkan sedikit CMC 0,5% digerus sampai homogen. Dituang ke dalam labu tentukur 10 ml, ditambah CMC 0,5% sampai batas tanda.

b. Berapa volume suspensi ekstrak daun Sirsak yang akan diberikan pada mencit? - Misalnya: BB mencit = 30 g

= 1,5 mg/ml

= 2,5 mg/ml

= 3,5 mg/ml

Jumlah EEDS dosis 15 mg/kg bb =

x 15 mg = 0,45 mg Volume larutan yang diberi =

= 0,3 ml Jumlah EEDS dosis 25 mg/kg bb =

x 25 mg = 0,75 mg Volume larutan yang diberi = 0,75 mg = 0,3 ml

2,5mg/ml Jumlah EEDS dosis 35 mg/kg bb =

analyzer (Cell-Dyn 1800)

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.7 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.9 91.4 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 6.6 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.0 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 19.2 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.5 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 17.2 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

1. Kontrol Normal

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 10.2 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 9.2 90.3 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.8 7.6 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.1 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 20.4 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.8 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 16.6 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 8.8 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.0 90.5 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 7.4 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.1 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 20.1 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.7 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 17.3 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

3. Kontrol Normal

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.7 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.7 90.0 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.8 7.9 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.1 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 15.3 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 46.5 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 19.0 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.7 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.8 89.3 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.8 8.8 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 1.9 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 4.64 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 19.7 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 23.2 % 37.0 – 51.0 %

MCV 50.1 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 42.5 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 84.9 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 21.4 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 838. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

5. Kontrol Normal

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.8 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.2 93.6 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.5 5.2 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.2 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.80 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 14.3 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 32.8 % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.2 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 21.0 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 43.6 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 16.3 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 899. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 2.7 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 2.2 81.8 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.3 12.5 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M

GRAN 0.2 RM 5.7 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 3.91 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 19.2 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 17.5 % 37.0 – 51.0 %

MCV 44.7 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 49.1 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC >>>> g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 15.7 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 384. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

1. Kelompok Penginduksi

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 2.8 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 2.3 80.4 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.4 13.6 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M

GRAN 0.2 RM 6.0 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 3.74 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 19.3 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 16.6 % 37.0 – 51.0 %

MCV 44.5 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 51.6 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC >>>> g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 15.1 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 372. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

Lampiran 10 (Lanjutan)

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 3.4 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 3.0 87.8 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.3 7.8 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 4.4 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 3.39 M/ µ L H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 12.0 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 15.4 % 37.0 – 51.0 %

MCV 45.5 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 35.4 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 77.9 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 13.9 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 355 K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

3. Kelompok Penginduksi

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 3.9 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 3.6 93.4 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.2 4.5 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 2.1 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.31 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 20.8 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 23.8 % 37.0 – 51.0 %

MCV 44.8 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 39.2 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 87.4 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 20.5 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 926. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 3.9 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 3.7 93.7 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.1 3.6 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 2.7 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.52 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 20.4 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 24.7 % 37.0 – 51.0 %

MCV 44.7 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 37.0 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 82.6 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 20.8 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 933. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

5. Kelompok Penginduksi

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 4.1 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 3.9 94.3 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.1 3.2 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 2.5 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.67 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 19.7 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 25.7 % 37.0 – 51.0 %

MCV 45.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 34.7 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 76.7 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 20.4 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 889. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.2 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.3 88.6 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.8 9.8 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.6 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 22.2 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 45.2 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 14.0 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

1. SEDS 15 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.6 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.7 89.3 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 8.7 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.0 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 4.73 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 19.3 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 21.0 % 37.0 – 51.0 %

MCV 44.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 40.8 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 91.9 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 13.5 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 921. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 8.3 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.3 87.8 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.9 10.9 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.3 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.51 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 22.6 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 29.2 % 37.0 – 51.0 %

MCV 44.9 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 34.7 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 77.4 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 14.8 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 870. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

3. SEDS 15 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 7.7 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 6.9 89.7 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 9.0 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.3 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.70 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 18.7 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 33.4 % 37.0 – 51.0 %

MCV 49.8 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 27.9 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 56.0 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 16.3 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 834. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.0 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 6.3 78.3 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 1.6 19.5 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M

GRAN 0.2 RM 2.2 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.41 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 15.4 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 25.1 % 37.0 – 51.0 %

MCV 46.4 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 28.5 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 61.4 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 15.1 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 773. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

5. SEDS 15 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 7.8 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 5.7 73.1 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 2.0 25.0 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M

GRAN 0.1 RM 1.9 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 3.62 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 8.0 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 15.7 % 37.0 – 51.0 %

MCV 43.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 22.1 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 51.0 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 15.7 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 351. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 8.9 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.9 88.8 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 8.1 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.3 RM 3.1 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.94 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 16.8 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 32.1 % 37.0 – 51.0 %

MCV 46.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 24.2 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 52.3 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 26.0.2 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

1. SEDS 25 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.4 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.4 87.9 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 7.8 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.4 RM 4.3 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µ L H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.3 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 46.6 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 25.9 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.8 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.6 88.0 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 6.5 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.5 RM 5.5 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.6 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 46.8 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 25.5 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

3. SEDS 25 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 10.0 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.9 88.8 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.9 9.3 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 1.9 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 15.6 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.7 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 15.4 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 8.0 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 6.9 86.6 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.8 10.6 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.8 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 18.4 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 15.8 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

5. SEDS 25 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.0 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.4 92.3 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.5 6.2 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.5 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC >>>> M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 18.0 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 16.6 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT >>> K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.6 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.8 91.5 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 5.8 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.3 RM 2.7 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.21 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.8 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 29.5 % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.5 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 28.7 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 60.3 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 18.2 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 708. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

1. SEDS 35 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.2 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.5 92.6 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.5 5.3 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.1 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.87 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.2 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 24.6 % 37.0 – 51.0 %

MCV 41.9 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 29.3 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 69.9 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 20.1 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 731. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 10.1 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 9.3 92.0 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 5.7 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.3 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.28 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.9 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 26.4 % 37.0 – 51.0 %

MCV 42.1 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 28.5 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 67.8 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 19.0 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 820. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

3. SEDS 35 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.6 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.8 91.4 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 6.0 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.6 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.00 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.7 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 28.4 % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.3 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 29.5 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 62.3 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 19.3 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 756. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.9 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 9.0 91.0 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 6.6 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.4 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 6.01 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 17.7 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 25.1 % 37.0 – 51.0 %

MCV 41.7 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 29.5 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 70.5 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 19.1 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 810. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV f L 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

5. SEDS 35 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.2 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 7.4 90.8 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 7.0 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.2 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 4.54 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 13.0 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 18.7 % 37.0 – 51.0 %

MCV 41.1 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 28.6 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 69.5 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 19.7 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 596. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 8.2 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 6.6 80.0 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 1.5 18.2 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.8 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.43 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 20.8 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 26.1 % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.0 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 38.3 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 79.7 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 21.6 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 713 K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

1. Stimuno 25 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 8.0 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 6.4 80.4 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 1.4 17.0 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.2 RM 2.6 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 4.90 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 18.8 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 23.4 % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.7 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 38.4 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 80.3 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 22.0 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 667. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 7.4 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 6.9 93.1 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.4 5.0 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.9 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 4.76 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 21.5 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 22.7 % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.6 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 45.2 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 94.7 g/dL 31.0 – 36.0 g/dL RDW 14.5 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 699. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

3. Stimuno 25 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 9.1 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.4 92.4 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.6 6.1 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.5 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.22 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB >>>> g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 24.8 % 37.0 – 51.0 %

MCV 47.5 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH pg 26.0 – 32.0 pg MCHC g/dL 31.0 – 36.0 g/dL RDW 14.1 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 888. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

WBC 9.6 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 8.8 91.6 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 0.7 7.1 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M GRAN 0.1 RM 1.3 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.54 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 15.8 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 26.6 % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.0 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 28.5 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 59.4 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 14.4 % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 630. K/µL URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

5. Stimuno 25 mg/kgBB

TEST RESULT FLAG LIMIT REFERENCE RANGE (LIMIT 1) WBC 7.5 K/µL [ *] 4.1 - 10.9 K/µL

LYM 5.7 76.2 %L H [ ]* 0.6 – 4.1 10.0 - 58.5 %L *MID 1.6 21.9 %M [* ] 0.0 – 1.8 0.1 – 24.0 %M

GRAN 0.1 RM 1.9 %G L *[ ] 2.0 – 7.8 37.0 – 92.0 %G RBC 5.70 M/ µL H [ ]* 4.20 – 6.30 M/ µL HGB 20.3 g/dL HH [ ]* 12.0 – 18.0 g/dL HCT 27.4 % 37.0 – 51.0 %

MCV 48.1 fL L *[ ] 80.0 – 97.0 fL MCH 35.6 pg 26.0 – 32.0 pg MCHC 74.1 g/Dl 31.0 – 36.0 g/dL RDW 20.9. % H [ ]* 11.5 – 14.5 %

PLT 603. K/µ L URI HH [ ]* 140.0 – 440 K/µL MPV fL 0.0 - 99.8 fL

* MID cells may include less frequently occurring and rare cells correlating to monocytes, eosinophils, basophils, blast and other precursor white cells.

Uji Homogeneous

WBC

LYM

12.1 Data Orientasi Dosis Prednison (Imunosupresan) Prosedur pengukuran Hematologi

Kelompok 1: Kelompok normal, tidak diberi perlakuan.

Kelompok 2: Mencit diberi suspensi prednison pada hari pertama dengan dosis 5 mg/kg BB, kemudian pada hari kedua hingga hari kedelapan diberi CMC 0,5% per BB mencit/hari secara oral.

Kelompok 3: Mencit diberi suspensi prednison pada hari pertama dengan dosis 10 mg/kg BB, kemudian pada hari kedua hingga hari kedelapan diberi CMC 0,5% per BB mencit/hari secara oral.

Kelompok 4: Mencit diberi suspensi prednison pada hari pertama dengan dosis 15 mg/kg BB, kemudian pada hari kedua hingga hari kedelapan diberi CMC 0,5% per BB mencit/hari secara oral.

Kelompok 5: Mencit diberi suspensi prednison pada hari pertama dengan dosis 20 mg/kg BB, kemudian pada hari kedua hingga hari kedelapan diberi CMC 0,5% per BB mencit/hari secara oral.

Kelompok 6: Mencit diberi suspensi prednison pada hari pertama dengan dosis 25 mg/kg BB, kemudian pada hari kedua hingga hari kedelapan diberi CMC 0,5% per BB mencit/hari secara oral.

Pada hari kedelapan, setelah 4 jam pemberian larutan sesuai dengan masing-masing kelompok, diambil darah dari ekor hewan dengan menggunting ekornya, dimasukkan kedalam vaculab berisi heparin sodium. Diukur parameter hematologi menggunakan alat haematology analyzer yaitu Cell-Dyn 1800.

Perlakuan

Jumlah

Normal Suspensi Prednison 5 mg/kg BB Suspensi Prednison 10 mg/kg BB Suspensi Prednison 15 mg/kg BB Suspensi Prednison 20 mg/kg BB Suspensi Prednison 25 mg/kg BB WBC

(103)

8,8 2,7 2,5 2,5 6,3 2,9

9.2 2,8 2,8 2,2 8,8 2,7

LYM (103)

8,0 2,2 2,1 2,1 5,0 2,5

8,5 2,3 2,4 1,9 7,8 2,3

MID (103)

0,7 0,3 0,2 0,2 1,0 0,2

0,6 0,4 0,2 0,2 0,8 0,2

GRAN (103)

0,2 0,2 0,2 0,2 0,3 0,2

berbagai dosis pada mencit jantan yang telah diinduksi prednison 5 mg/kg BB

Kelompok I: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 50 mg/kg BB secara oral.

Kelompok II: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 100 mg/kg BB secara oral.

Kelompok III: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 200 mg/kg BB secara oral.

Pada hari kedelapan, setelah 4 jam pemberian larutan sesuai dengan masing-masing kelompok, diambil darah dari ekor hewan dengan menggunting ekornya, dimasukkan kedalam vaculab berisi heparin sodium. Diukur parameter hematologi menggunakan alat haematology analyzer yaitu Cell-Dyn 1800.

diinduksi dengan prednison dapat dilihat pada tabel dibawah ini. Perlakuan

Jumlah

Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak

(SEDS) 50 mg/kg BB

Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) 100 mg/kg

BB

Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) 200 mg/kg

BB WBC

(103)

12,8 9,7 5,1

14.2 9,4 4,1

LYM (103)

11,9 8,7 4,7

13,3 8,8 3,7

MID (103)

0,8 0,8 0,2

0,8 0,6 0,3

GRAN (103)

0,2 0,2 0,1

berbagai dosis pada mencit jantan yang telah diinduksi prednison 5 mg/kg BB

Kelompok I: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 15 mg/kg BB secara oral.

Kelompok II: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 25 mg/kg BB secara oral.

Kelompok III: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 35 mg/kg BB secara oral.

Kelompok IV: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg b BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 45 mg/kg BB secara oral.

Pada hari kedelapan, setelah 4 jam pemberian larutan sesuai dengan masing-masing kelompok, diambil darah dari ekor hewan dengan menggunting ekornya, dimasukkan kedalam vaculab berisi heparin sodium. Diukur parameter hematologi menggunakan alat haematology analyzer yaitu Cell-Dyn 1800.

diinduksi dengan prednison dapat dilihat pada tabel dibawah ini. Suspensi

Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS)

15 mg/kg BB

Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS)

25 mg/kg BB

Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS)

35 mg/kg BB

Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS)

45 mg/kg BB WBC

(103)

8,3 8,0 8,2 5,5

10,1 7,6 7,9 5,7

LYM (103)

7,3 7,0 7,4 5,0

8,7 7,1 7,1 5,2

MID (103)

0,9 0,7 0,6 0,3

1,3 0,4 0,6 0,3

GRAN (103)

0,1 0,2 0,2 0,2

jantan yang telah diinduksi prednison 5 mg/kg BB

Kelompok I: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Stimuno (SS) dengan dosis 25 mg/kg BB secara oral.

Kelompok II: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Stimuno (SS) dengan dosis 50 mg/kg BB secara oral.

Kelompok III: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Stimuno (SS) dengan dosis 100 mg/kg BB secara oral. Pada hari kedelapan, setelah 4 jam pemberian larutan sesuai dengan masing-masing kelompok, diambil darah dari ekor hewan dengan menggunting ekornya, dimasukkan kedalam vaculab berisi heparin sodium. Diukur parameter hematologi menggunakan alat haematology analyzer yaitu Cell-Dyn 1800.

prednison dapat dilihat pada tabel dibawah ini.

Perlakuan Jumlah

Suspensi Stimuno (SS) ddosis 25

mg/kg BB

Suspensi Stimuno (SS) dengan dosis 50

mg/kg BB

Suspensi Stimuno (SS) dengan dosis 100

mg/kg BB

WBC (103)

6,7 11,1 6,2

14.25,9 5,1

LYM (103)

6,0 9,4 5,5

5,2 4,3

MID (103)

0,5 1,4 0,6

0,4 0,7

GRAN (103)

0,2 0,2 0,1

Baratawidjaja, K.G. (2000). Imunologi Dasar. Edisi IV. Jakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Hal. 3-8.

Campbell, T.W. (2004). Veterinary Hematology and Clinical Chemistry. Philadelphia: Lippincott Wilkins, A wolters Kluwer Company. Hal. 211-216, 219-220.

Coles, E.H. (1986). Veterinary Clinical Pathology. Edisi keempat. Philadelphia: W.B. Saunders Company. Hal. 47-49, 65-69.

Ditjen POM. (1989). Materia Medika Indonesia. Jilid V. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 41.

Ditjen POM. (1995). Farmakope Indonesia. Edisi Ke IV. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 969.

Ditjen POM. (1997). Farmakope Indonesia. Edisi Ke III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal. 7, 33, 744, 748.

Ditjen POM. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Cetakan Pertama. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Hal.5,10-11.

Ganong WF. (1999). Review of Medical Physiology. 18 ed New Jersey: Prentice Hall. Hal. 331, 338, 340.

Girindra, A. (1998). Biokimia Patologi Hewan. Bogor: PAU IPB. Hal 17.

Farnsworth, N.R. (1966). Biological and Phytochemical Screeening of Plants. J. Pharm. Hal. 225.

Guyton, A.C., dan Hall, J.E. (2007). Buku Ajar Fisiologi Kedokteran. Editor: Luqman Yanuar Rahman, Huriawati Hartanto, andita Novrianti dan Nanda Wulandari. Edisi Kesebelas. Jakarta: EGC. Hal 439-459.

Handojo, I. (2003). Pengantar Imunoasai Dasar. Surabaya: Airlangga University Press. Hal.1.

Harborne, J.B. (1987). Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa

Tumbuhan. Terjemahan K. Padmawinata. Edisi II. Bandung: ITB Press.

Hal. 152.

Junquerira, L.C., dan Carneiro, J. (2007). Histologi Dasar. Editor: Frans Dany. Edisi Kesepuluh. Jakarta: EGC. Hal. 235.

Kapit, W., Macey, R.I., Meisami, E. (1987). The Physiology Coloring Book. New York: Harper Collins Publishers. Hal 139.

Kuby, J. (1994). Immunology. Edisi kedua. New York: W.H. Freeman and Company. Hal 25.

Kusmardi, S.K., dan Enif, E.T. (2007). Efek Imunomodulator Ekstrak Daun Ketepeng Cina (Cassia alata. L) Terhadap Aktivitas dan Kapasitas Fagositosis Makrofag. Makara Kesehatan. 11(2): 50-51.

Mackinon, L.T. (1992). Exercise and Immunology. Champaign: Human Kenetics Publisher Inc. Hal 35.

Mardiana, L., dan Ratnasari, J. (2011). Ramuan dan Khasiat Sirsak. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal. 17, 38-40.

Martindale (1995). The Extra Pharmacopoeia Evaluated Information on the world’s Drug and Medicines. Edisi Tiga Puluh Satu. The Royals Pharmaceutical Society. Hal. 39-40, 70.

Meredith, A., dan Crossley, D.A. (2002). BSAV Manual of Exotic Pets. Editor: Anna Meredith, Sharon Redrobe. Edisi Keempat. Barcelona: Grafos. Hal. 78.

Meyer, D.J., Coles, E.H., dan Rich, L.J. (1992). Veterinary Laboratory Medicine

Interpretation and Diagnosis. Philadelphia: Saunders Company. Hal. 88.

Norin, A.J. (1989). Introduction to Immunobiologic. Dalam: Despressive Disorders and Immunity. Editor Andrew H. Miller. Washington: American Psychiatric Press Inc. Hal. 15, 18.

Peakman, M., dan Vergoni, D. (1997). Basic and Clinical Immunologi. London: Churchill Livingstone. Hal. 30.

Prabowo, S.B. (2012). Uji Normalitas. Tanggal akses 06 Juni 2012. Dikutip dari www.parametric.com.

Puri, A., Saxene, R., Saxena, R.P., dan Saxena, K.C.(1993). Imunostimulant

Manual of Small Aninzal Practice. Editor; Stephen Birchard, Robert Sherding. Edisi Kedua. Philadelphia: W.B. Saunders Company. Hal 165-168.

Sari, M.H. (2012). Uji Aktivitas Antimielosupresi Ekstrak Etanol Rimpang Temu Mangga (Curcuma mangga Valeton & v.Zijp) Pada Mencit Jantan yang Diinduksi dengan Siklofosfamid. Skripsi. Medan: Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara.

Sherwood, L. (2001). Fisiologi Manusia dari Sel ke Sistem. Edisi Kedua. Jakarta: Penerbit Buku Kedokteran EGC. Hal. 346-348.

Sri, I.Y. (2012). Khasiat Sirsak. Surabaya: Tribun Media. Hal. 4-6. Subowo. (1993). Imunobiologi. Bandung: Angkasa. Hal. 134-137.

Suherman, Suharti, K., dan Ascobat, P. (2007). Adrenokortikotropin,

Adrenokortikosteroid, Analog Sintetik dan Antagonisnya.Dalam:

Farmakologi dan Terapi. Edisi 5. Editor: Sulistia Gan Gunawan, Rianto Setiabudi, dan Nafrialdi. Jakarta: Gaya Baru. Hal. 496-513.

Sukara, E. (2000). Sumber Daya Alam Hayati dan Pencarian Bahan Baku Obat (Bioprospekting). Bogor: Prosiding Simposium Nasional II Tumbuhan Obat dan Aromatik. Puslitbang Biologi-LIPI. Hal. 31-37.

Sunarjono, H. (2005). Sirsak dan Srikaya. Cetakan Pertama. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal. 14-15, 22-25.

Tan, H.T., dan Rahardja, K. (2007). Obat-Obat Penting, Khasiat, Penggunaan

dan Efek-Efek Sampingnya. Edisi Kelima. Jakarta: Penerbit PT. Elex

Media Komputindo. Hal. 787-789.

Taylor, L. (2002). Technical Data Report for Graviola Annona muricata. Tanggal akses 05 Mei 2011. Dikutip dari www.books.google.co.id. Hal. 1.

Usmar, Syukur, R., Tayeb, R., dan Abdullah, N. (2010). Uji Aktivitas Imunomodulator Kasumba Turate (Carthamus tinctorius Linn) Sebagai Upaya Pembuatan Sediaan Terstandar Menuju Prototipe Skala Industri Kecil. Majalah Farmasi dan Farmakologi. 14(1): 17-20.

Widianto, B.M. (1987). Immnomodulator. Cermin Dunia Kedokteran. (2): 44-46. Vantsteenhouse, J.L. 92006). Clinical Pathology. Dalam: Clinical Textbook for

Veterinary Technicians. Editor: Dennis Mccumin, Joanna Bassert. Edisi Keenam. Missouri: Elsevier Saunders. Hal. 184-196.

Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan tahapan penelitian yaitu penyiapan sampel, karakterisasi simplisia, pembuatan ekstrak, karakterisasi ekstrak, penyiapan hewan percobaan dan penghitungan total dan diferensial sel darah putih pada hewan percobaan. Data hasil penelitian dianalisis secara ANAVA (analisis variansi) dan dilanjutkan dengan uji post hoc Duncan meggunakan program SPSS (Statistical Product and Service Solution) versi 15.

3.1 Alat dan Bahan 3.1.1 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah alat-alat gelas laboratorium, aluminium foil, neraca listrik (Vibra), seperangkat alat destilasi penetapan kadar air, rotary evaporator, freeze dryer (Edward), blender (National), mikroskop (Olympus), mortir dan stamfer, neraca hewan (Presica), spuit 1 ml (Terumo), oral sonde, kertas saring, penggaris, gunting bedah, haematology

analyzer (Cell-Dyn 1800), dan vaculab. Gambar alat-alat yang digunakan dapat

dilihat pada Lampiran 6, halaman, 65. 3.1.2 Bahan-Bahan

Bahan tumbuhan yang digunakan pada penelitian ini adalah daun sirsak (Annona muricata L.). Bahan kimia yang digunakan adalah etanol 96% (teknis), pereaksi Bouchardat, Dragendorff, Mayer, besi (III) klorida 4,5% b/v, molish,

asetat, serbuk seng, serbuk magnesium, isopropanol, Na-CMC (Natrium-Carboxy

Methyl Cellulose), tablet prednison, kapsul Stimuno®, heparin sodium (Inviclot®) dan akuades (teknis).

3.1.3 Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam percobaan adalah mencit jantan dengan berat 30 - 40 gram berumur 2 - 3 bulan. Sebelum digunakan sebagai hewan percobaan, semua mencit dipelihara dahulu selama kurang lebih satu minggu untuk penyesuaian lingkungan, mengontrol kesehatan dan berat badan serta menyeragamkan makanannya (Kusmardi dan Enif, 2007). Gambar hewan percobaan dapat dilihat pada Lampiran 7, halaman, 66.

3.2 Penyiapan Sampel

Penyiapan sampel meliputi pengambilan sampel, identifikasi sampel, dan pengolahan sampel.

3.2.1 Pengambilan Sampel

Sampel yang digunakan adalah daun Sirsak yang masih segar dan tua. Pengambilan sampel dilakukan secara purposif tanpa membandingkan dengan tumbuhan yang sama dari daerah lain. Sampel diambil di Jl. Binjai Km 10 Gg. Damai Desa Payageli, Kecamatan Sunggal, Kabupaten Deli Serdang.

3.2.2 Identifikasi Sampel

Identifikasi tumbuhan dilakukan di Herbarium Bogoriense Pusat Penelitian Biologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Cibinong.

bawah air mengalir, ditiriskan, dan ditimbang berat basahnya (1,903 kg). Daun Sirsak selanjutnya dikeringkan di lemari pengering hingga kering, dibuang benda-benda asing atau pengotoran-pengotoran lain yang masih tertinggal pada simplisia (sortasi kering), kemudian ditimbang berat keringnya (642 gram) dan disimpan dalam wadah plastik yang tertutup rapat.

3.3 Skrining Fitokimia

Skrining fitokimia serbuk simplisia meliputi pemeriksaan senyawa golongan flavoinoid, alkaloid, saponin, tanin, glikosida dan steroid/triterpenoid. 3.3.1 Pemeriksaan Flavanoid

Sebanyak 10 g serbuk ditambahkan 10 ml air panas, dididihkan selama 5 menit dan disaring dalam keadaan panas, kedalam 5 ml filtrat ditambahkan 0,1 g serbuk magnesium dan 1 ml asam klorida pekat dan 2 ml amil alcohol, dikocok dan dibiarkan memisah. Flavonoida positif jika terjadi warna merah atau kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Farnsworth, 1966).

3.3.2 Pemeriksaan Alkaloid

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g kemudian ditambahkan 1 ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling, dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit, didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh dipakai untuk tes alkaloid. Diambil 3 tabung reaksi, lalu ke dalamnya dimasukkan 0,5 ml filtrat. Pada masing-masing tabung reaksi:

b. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Bouchardat c. Ditambahkan 2 tetes pereaksi Dragendorff

Alkaloid positif jika terjadi endapan atau kekeruhan pada dua dari tiga percobaan diatas (Ditjen POM, 1995).

3.3.3 Pemeriksaan Saponin

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 0,5 g dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan, kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 menit. Jika terbentuk busa setinggi 1-10 cm yang stabil tidak kurang dari 10 menit dan buih tidak hilang dengan penambahan 1 tetes asam klorida 2 N menunjukkan adanya saponin (Ditjen POM, 1995).

3.3.4 Pemeriksaan Tanin

Sebanyak 0,5 g serbuk simplisia disari dengan 10 ml air suling lalu disaring, filtratnya diencerkan dengan air suling sampai tidak berwarna. Diambil 2 ml larutan dan ditambahkan 1-2 tetes pereaksi besi (III) klorida 1%. Jika terjadi warna biru kehitaman atau hijau kehitaman menunjukkan adanya tanin (Ditjen POM, 1995).

3.3.5 Pemeriksaan Glikosida

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 3 g, lalu disari dengan 30 ml campuran etanol 96%-air (7:3) dan 10 ml asam klorida 2 N, direfluks selama 2 jam, didinginkan dan disaring. Diambil 20 ml filtrat, ditambahkan 25 ml air suling dan 25 ml timbal (II) asetat 0,4 M, dikocok, didiamkan selama 5 menit, lalu disaring. Filtrat disari dengan 20 ml campuran kloroform-isopropanol (3:2) sebanyak 3 kali. Pada kumpulan sari lapisan isopropanol diuapkan pada suhu tidak lebih dari 50oC. Sisanya dilarutkan dengan 2 ml metanol untuk larutan

asam sulfat, terbentuk cincin berwarna ungu pada batas cairan, menunjukkan adanya ikatan gula (Ditjen POM, 1995).

3.3.6 Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid

Serbuk simplisia ditimbang sebanyak 1 g, dimaserasi dengan 20 ml n-heksan selama 2 jam, disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap dan pada sisanya ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard melalui dinding cawan. Apabila terbentuk warna ungu atau merah yang berubah menjadi biru ungu atau biru hijau menunjukkan adanya triterpenoid/steroid (Harborne, 1987).

3.4 Pemeriksaan Karakteristik Simplisia

Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan makroskopik, mikroskopik, penetapan kadar air, penetapan kadar sari larut dalam air, penetapan kadar sari larut dalam etanol, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut dalam asam (Ditjen POM, 1995).

3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik dan Organoleptik

Pemeriksaan makroskopik dan organolepik dilakukan dengan mengamati bentuk, bau dan rasa dari daun Sirsak segar dan serbuk simplisia daun Sirsak. 3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik

Pemeriksaan mikroskopik terhadap serbuk simplisia dilakukan dengan cara meneteskan kloralhidrat diatas kaca objek, kemudian di atasnya diletakkan serbuk simplisia, lalu ditutup dengan kaca penutup dan dilihat dibawah

Penetapan kadar air dilakukan dengan metode destilasi toluen. Alat terdiri dari labu alas 500 ml, alat penampung, pendingin, tabung penyambung dan tabung penerima.

Cara kerja:

Dimasukkan 200 ml toluena dan 2 ml air suling ke dalam labu alas bulat, lalu didestilasi selama 2 jam. Setelah itu, toluena dibiarkan mendingin selama 30 menit, dan dibaca volume air pada tabung penerima dengan ketelitian 0,05 ml. Kemudian ke dalam labu tersebut dimasukkan 5 g serbuk simplisia yang telah ditimbang seksama, labu dipanaskan hati-hati selama 15 menit. Setelah toluena mendidih, kecepatan tetesan diatur lebih kurang 2 tetes tiap detik sampai sebagian besar air terdestilasi, kemudian kecepatan tetesan dinaikkan hingga 4 tetes tiap detik. Setelah semua air terdestilasi, bagian dalam pendingin dibilas dengan toluena. Destilasi dilanjutkan selama 5 menit, kemudian tabung penerima dibiarkan mendingin pada suhu kamar. Setelah air dan toluena memisah sempurna, volume air dibaca dengan ketelitian 0,05 ml. Selisih kedua volume air yang dibaca sesuai dengan kandungan air yang terdapat dalam bahan yang diperiksa. Kadar air dihitung dalam persen (Ditjen POM, 1995).

3.4.4 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Air

Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml air-kloroform (2,5 ml kloroform dalam air suling sampai 1 liter) dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam, lalu disaring. Sejumlah 20 mL filtrat pertama diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah ditara dan sisa

1995).

3.4.5 Penetapan Kadar Sari Larut dalam Etanol

Sebanyak 5 g serbuk simplisia, dimaserasi selama 24 jam dalam 100 ml etanol 96% dalam labu bersumbat sambil dikocok sesekali selama 6 jam pertama, kemudian dibiarkan selama 18 jam. Kemudian disaring cepat untuk menghindari penguapan etanol. Sejumlah 20 mL filtrat diuapkan sampai kering dalam cawan penguap yang berdasar rata yang telah dipanaskan dan ditara. Sisa dipanaskan pada suhu 105oC sampai bobot tetap. Kadar dalam persen sari yang larut dalam etanol 96% dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Ditjen POM, 1995). 3.4.6 Penetapan Kadar Abu Total

Sebanyak 2 g serbuk simplisia dimasukkan dalam krus porselin yang telah dipijar dan ditara, kemudian diratakan. Krus dipijar perlahan-lahan sampai arang habis, jika arang masih tidak dapat dihilangkan, ditambahkan air panas, saring melalui kertas saring bebas abu. Pijarkan sisa dan kertas saring dalam krus yang sama. Masukkan filtrat ke dalam krus, uapkan, pijarkan hingga bobot tetap, timbang. Kadar abu dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan (Ditjen POM, 1995).

3.4.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut dalam Asam

Abu yang diperoleh dalam penetapan kadar abu dididihkan dalam 25 ml asam klorida encer selama 5 menit, bagian yang tidak larut dalam asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, cuci dengan air panas,

(Ditjen POM, 1995).

3.5 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak (EEDS)

Pembuatan ekstrak etanol daun Sirsak dilakukan dengan metode maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Menurut Depkes, (1979) caranya: Sebanyak 570 serbuk simplisia dimasukkan ke dalam sebuah bejana, dituangi dengan 4,3 liter etanol, ditutup, dibiarkan selama 5 hari terlindung dari cahaya sambil sesekali diaduk, diserkai. Ampas dicuci dengan etanol secukupnya hingga diperoleh 5,7 liter. Pindahkan kedalam bejana tertutup, biarkan di tempat sejuk terlindung dari cahaya selama 2 hari, saring. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan alat rotary evaporator pada suhu 40oC sampai diperoleh ekstrak kental.

3.6 Pembuatan Bahan Uji

Pembuatan pereaksi mencakup pembuatan suspensi Na-CMC 0,5%, pembuatan suspensi prednison dosis 5 mg/kgBB, pembuatan suspensi EEDS dosis 15 mg/kg BB, 25 mg/kg BB, 35 mg/kg BB, dan pembuatan suspensi Stimuno® dosis 25 mg/kg bb.

3.6.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC 0,5%

Sebanyak 0,5 g Na-CMC ditaburkan dalam lumpang yang berisi ±10 ml air suling panas. Didiamkan selama 15 menit lalu digerus hingga diperoleh massa yang transparan, lalu digerus sampai homogen, diencerkan dengan air suling, dihomogenkan dan dimasukkan ke labu tentukur 100 ml, dicukupkan volumenya dengan air suling hingga 100 ml.

ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% b/v sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen, volume dicukupkan hingga 10 ml.

3.6.3 Pembuatan Suspensi Stimuno dosis 0,25% (SS)

Sebanyak 25 mg serbuk Stimuno, diambil dan dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% b/v sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen, volume dicukupkan hingga 10 ml.

3.6.4 Pembuatan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS)

Dalam pengujian akan digunakan 3 variasi dosis yakni dosis 15 mg/kg bb, 25 mg/kg bb, dan 35 mg/kg bb. Sejumlah 15 mg, 25 mg, dan 35 mg ekstrak etanol daun sirsak masing-masing dimasukkan ke dalam lumpang dan ditambahkan suspensi Na-CMC 0,5% b/v sedikit demi sedikit sambil digerus sampai homogen hingga 10 ml. Diperoleh sediaan ekstrak etanol daun sirsak dengan konsentrasi 0,15%, 0,25% dan 0,35%.

3.7 Penyiapan Hewan Percobaan

Hewan percobaan yang digunakan dalam penelitian adalah mencit jantan dengan berat badan 30-40 g. Pada metode ini digunakan sebanyak 36 ekor mencit dibagi dalam 6 kelompok, setiap kelompok terdiri dari 6 ekor mencit. kelompok tersebut adalah: 1 kelompok kontrol normal, 1 kelompok penginduksi, 1 kelompok kontrol positif, 3 kelompok uji.

Sebelum pengujian dikondisikan terlebih dahulu selama 1 minggu dengan kondisi lingkungan, makanan, suhu, dan minuman yang sama. Setelah 1 minggu,

Hewan percobaan dikelompokkan menjadi 6 kelompok, masing-masing terdiri dari 6 ekor hewan percobaan. Kelompok tersebut adalah:

Kelompok I : Kontrol normal, tidak diberi perlakuan.

Kelompok II: Kelompok kontrol penginduksi pada hari pertama diinduksi dengan Suspensi Prednison (SP) 5 mg/kg BB secara oral., pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan suspensi CMC 0,5% per BB mencit/hari secara oral.

Kelompok III: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Ekstrak Etanol Daun Sirsak (SEDS) dengan dosis 15 mg/kg BB secara oral.

Kelompok IV:Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan SEDS dengan dosis 25 mg/kg BB secara oral.

Kelompok V: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan SEDS dengan dosis 35 mg/kg BB secara oral.

Kelompok VI: Kelompok uji, pada hari pertama diinduksi dengan SP 5 mg/kg BB secara oral pada hari kedua hingga hari kedelapan diberikan Suspensi Stimuno dengan dosis 25 mg/kg BB secara oral.

ekornya, dimasukkan kedalam vaculab berisi heparin sodium. Diukur parameter hematologi (Sari, 2012).

3.8.1 Pengukuran Parameter Hematologi Menggunakan Alat haematology

Analyzer

Pengukuran parameter hematologi menggunakan alat haematology

analyzer yaitu Cell-Dyn 1800 yang terdapat di Laboratorium Penelitian, Fakultas

Farmasi, Universitas Sumatera Utara.

Pengukuran dilakukan dengan cara: diambil 0,25 ml darah hewan. Sampel diukur dengan menggunakan Cell-Dyn 1800. Hasilnya terlihat pada alat. Pengukuran dilakukan lebih dari 2 kali dan hasil paling stabil diprint out. Dari hasil pengukuran diambil parameter yaitu jumlah total sel darah putih dan jumlah diferensiasi sel darah putih (limfosit,mid sel (terdiri dari monosit, eosinofil, basofil, sel blast dan prekursor sel darah putih), granulosit).

3.9 Analisis Data

Data hasil penellitian dianalisis dengan menggunakan program SPSS 15. Data hasil penelitian ditentukan homogenitas dan normalitasnya untuk menentukan analisis statistik yang digunakan. Data dianalisis dengan menggunakan uji ANAVA satu arah untuk menentukan perbedaan rata-rata di antara perlakuan. Jika terdapat perbedaan, dilanjutkan dengan menggunakan uji post hoc Duncan untuk mengetahui variabel mana yang memiliki perbedaan. Berdasarkan nilai signifikansi, p < 0,05 dianggap signifikan.

HASIL DAN PEMBAHASAN

4.1 Simplisia dan Ekstrak

Tumbuhan yang digunakan telah diidentifikasi di Herbarium Bogoriense, Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi-LIPI. Hasil identifikasi tumbuhan dapat dilihat pada Lampiran 1, halaman 50.

Hasil pemeriksaan karakteristik simplisia secara makroskopik (Lampiran 2, halaman 51) yaitu daun tunggal, rapuh, warna kuning kecoklatan, bentuk bundar panjang, lanset atau bundar telur terbalik, ujung dan pangkal daun runcing, tepi rata.

Hasil pemeriksaan mikroskopik serbuk simplisia dijumpai adanya epidermis atas, epidermis bawah dengan stomata tipe anomositik, rambut penutup, pembuluh kayu, sel batu dan berkas pengangkut. Pengamatan serbuk simplisia menggunakan mikroskop dapat dilihat pada Lampiran 2, halaman 53.

Hasil skrining fitokimia pada simplisia dan ekstrak daun sirsak dapat dilihat pada Tabel 4.1.

Tabel 4.1 Hasil skrining fitokimia serbuk simplisia dan ekstrak daun sirsak

No. Golongan Senyawa Hasil

Simplisia Ekstrak

1. Alkaloida + +

2. Flavonoida + +

3. Tanin + +

4. Steroid/Triterpenoida + +

5. Saponin + +

6. Glikosida + +

Keterangan: ( + ) = Positif ( - ) = Negatif

serbuk simplisia dan ekstrak daun sirsak.

Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia daun sirsak dapat dilihat pada Tabel 4.2.

Tabel 4.2 Hasil pemeriksaan karakterisasi serbuk simplisia daun sirsak

No. Parameter Hasil (%) Persyratan MMI (%)

1. Kadar air 7,99 -

2. Kadar sari larut dalam air 18,9 ≥ 18 3. Kadar sari larut dalam etanol 19,1 ≥ 12 4. Kadar abu total 5,77 ≤ 6 5. Kadar abu tidak larut dalam asam 1,37 ≤ 1,5

Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia dapat dilihat pada Lampiran 3, halaman 54. Hasil pemeriksaan karakterisasi simplisia yaitu kadar air, kadar sari larut air, kadar sari larut etanol, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam memenuhi syarat yang telah tercantum dalam Materia Medika Indonesia (1989).

Hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak daun sirsak dapat dilihat pada Tabel 4.3.

Tabel 4.3 Hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak daun sirsak

Perhitungan hasil pemeriksaan karakterisasi ekstrak dapat dilihat pada

No. Parameter Hasil (%)

1. Kadar air 3,32

2. Kadar sari larut dalam air 1,72

3. Kadar sari larut dalam etanol 30,23

4. Kadar abu total 2,03

secara nasional mengenai parameter karakterisasi simplisia daun sirsak agar ada sebua acuan bagi peneliti dalam melakukan karakterisasi terhadap ekstrak daun sirsak.

Hasil penyarian 570 g serbuk simplisia daun sirsak dengan pelarut etanol 96% diperoleh ekstrak kental yang kemudian diuapkan dengan menggunakan rotary evapator, diperoleh 82,8 g ekstrak (rendemen 14,53%).

4.2 Pengujian Aktivitas Imunostimulan

Pada penelitian ini, pengujian aktivitas imunostimulan dilakukan secara in

vivo pada mencit jantan dengan metode imunosupresan yaitu diinduksi dengan

prednison dengan cara mengukur parameter hematologi menggunakan alat

haematology analyzer (Cell Dyn 1800). Metode dilakukan dengan cara

menginduksi hewan percobaan dengan prednison 5 mg/kg BB (setelah dilakukan orientasi dosis) yang diberikan secara oral pada hari pertama penelitian. Pengukuran parameter hematologi dilakukan pada hari kedelapan dengan menggunakan alat haematology analyzer Cell Dyn 1800 (untuk mengukur sel-sel darah (sel darah putih dan diferensiasi sel darah putih)). Data orientasi dosis prednison terlihat pada Lampiran 12, halaman 91.

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dengan pemberian ekstrak secara oral, dengan dosis 15, 25 dan 35 mg/kg BB (setelah dilakukan orientasi dosis), serta pemberian sedian pembanding Stimuno® 25 mg/kg BB, ternyata aktivitas imunostimulan semua dosis berbeda-beda, ditandai dengan didapatnya hasil yang berbeda-beda dari pengukuran parameter hematologi yang diukur.

DAFTAR ISI

Halaman

JUDUL ……… i

HALAMAN JUDUL ……….. ii

HALAMAN PENGESAHAN ……… iii

KATA PENGANTAR ………. iv

ABSTRAK ………... vi

ABSTRACT ………... vii

DAFTAR ISI ……… viii

DAFTAR TABEL ……… xii

DAFTAR GAMBAR ………... xiii

DAFTAR LAMPIRAN ……… xiv

BAB I PENDAHULUAN ……… 1

1.1 Latar Belakang ……… 1

1.2 Perumusan Masalah ………. 4

1.3 Hipotesis ……….. 5

1.4 Tujuan Penelitian ………. 5

1.5 Manfaat penelitian ………... 5

1.6 Kerangka Pikir Penelitian ……….... 6

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ……… 8

2.1 Uraian Tumbuhan ……… 8

2.1.1 Sistematika Tumbuhan ……… 8

2.1.2 Nama Daerah dan Nama Asing ………... 8

2.1.2.1 Nama Daerah ……… 8

2.1.2.2 Nama Asing ………. 9

2.1.4 Morfologi Tumbuhan ………... 9

2.1.5 Kandungan Kimia ……… 10

2.1.6 Khasiat Tumbuhan ………... 11

2.2 Ekstrasi ……... 11

2.2.1 Metode-Metode Ekstrasi ……….. 11

2.3 Sistem Imun ………. 13

2.4 Darah ……….. 15

2.4.1 Leukosit ………. 16

2.5 Prednison ………. 22

BAB III METODE PENELITIAN ……….. 24

3.1 Alat dan Bahan ………... 24

3.1.1 Alat-alat ………. 24

3.1.2 Bahan-bahan ……….. 24

3.1.3 Hewan Percobaan ……….. 25

3.2 Penyiapan Sampel ……….. 25

3.2.1 Pengambilan Sampel ………. 25

3.2.2 Identifikasi Sampel ……… 25

3.2.3 Pengolahan Sampel ………. 26

3.3 Pemeriksaan Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia ……… 26

3.3.1 Pemeriksaan Flavonoid ………. 26

3.3.2 Pemeriksaan Alkaloid ……….. 26

3.3.3 Pemeriksaan Saponin ……… 27

3.3.4 Pemeriksaan Tanin ………... 27

3.3.5 Pemeriksaan Glikosida ………... 27

3.3.6 Pemeriksaan Steroida/Triterpenoida ………. 28

3.4.1 Pemeriksaan Makroskopik ………... 28

3.4.2 Pemeriksaan Mikroskopik ……… 28

3.4.3 Penetapan Kadar air Simplisia ……….. 29

3.4.4 Penetapan Kadar Sari yang Larut Dalam Air ……… 29

3.4.5 Penetapan Kadar Sari yang Larut Dalam Etanol ………….. 30

3.4.6 Penetapan Kadar Abu Total ……….. 30

3.4.7 Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam ……….. 30

3.5 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak ………. 31

3.6 Pembuatan Bahan Uji ………. 31

3.6.1 Pembuatan Suspensi Na-CMC 0,5% ……… 31

3.6.2 Pembuatan Suspensi Prednison (SP) ……… 32

3.6.3 Pembuatan Suspensi Stimuno®……….. 32

3.6.4 Pembuatan Suspensi EEDS ………... 32

3.7 Penyiapan Hewan Percobaan ………. 32

3.8 Penentuan Parameter Hematologi ………... 33

3.8.1 Pengukuran Parameter Hematologi Menggunakan Alat Haematology Analyzer ………. 34

3.9 Analisis Data ……… 34

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ………. 35

4.1 Simplisia dan Ekstrak ………. 35

4.2 Pengujian Aktivitas Imunostimulan ……… 37

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ………... 45

5.1 Kesimpulan ……….. 45

5.2 Saran ………... 46

DAFTAR PUSTAKA ……… 47

DAFTAR TABEL

Tabel Halaman

4.1 Hasil Skrining Fitokimia Serbuk Simplisia dan Ekstrak Daun

Sirsak ……… 35

4.2 Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Serbuk Simplisia Daun Sirsak …. 36 4.3 Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak Daun Sirsak ………….... 36 4.4 Hasil Pengukuran Jumlah Sel Darah Putih (WBC) ……….. 39 4.5 Hasil Pengukuran Jumlah Diferensial Sel Darah Putih Mencit

DAFTAR GAMBAR

Gambar Halaman

1.1 Kerangka Pikir Penelitian ……… 7 2.1 Struktur Kimia Prednison ……… 23 4.1 Grafik Hasil pengukuran Jumlah Sel Darah Putih Mencit

Jantan Pada Berbagai perlakuan ………. 39

4.2 Grafik Hasil Pengukuran Jumlah Diferensial Sel Darah

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran Halaman

1 Hasil Identifikasi Tumbuhan ……….. 50

2 Gambar Karakteristik Tumbuhan Sirsak ……… 51

a. Tumbuhan sirsak (Annona muricata L.) ……….. 51

b. Daun Sirsak (Annona muricata folium) ……… 52

c. Simplisia Daun Sirsak (Annobae muricatae folium) ………… 52

d. Serbuk Simplisia Daun Sirsak ………. 53

e. Hasil Mikroskopik Simplisia Daun Sirsak ………... 53

3 Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Simplisia ………… 54

4 Perhitungan Hasil Pemeriksaan Karakterisasi Ekstrak …………... 59

5 Bagan Alur Penelitian ………. 64

6 Gambar Alat-alat ………. 65

7 Gambar Hewan Percobaan ……….. 66

8 Tabel Konversi Dosis Hewan dengan Manusia ……….. 67

9 Contoh Perhitungan Dosis ……….. 68

10 Gambar Hasil penelitian Menggunakan Alat Haematology Analyzer (Cell-Dyn 1800) ……… 69

11 Hasil Analisis Statistik Menggunakan SPSS 15 ………... 87