Analisis Komponen Utama PCA

3.3 PROSEDUR KERJA

3.3.1. Pengumpulan produk marshmallow uji coba

Sampel yang digunakan terdiri dari 2 sampel produk marshmallow uji coba

3.3.2. Pembuatan marshmallow dari gelatin babi dan gelatin sapi

Ditimbang masing masing sebanyak 3.5 gram gelatin sapi dan gelatin babi. Gelatin dibasahi dengan 15 ml air dan diaduk diatas penangas listrik. Ditempat yang terpisah sukrosa sebanyak 5 gr, glukosa sebanyak 2 gr dan amilum sebanyak 0,25 gr dibasahi dengan 10 ml air dan diaduk diatas penangas ±7 menit. Kemudian pindahkan kedua adonan ke dalam alat homogenizer lalu dilakukan pengadukan dengan homogenizer hingga merata dan mengembang selama 15 menit. Lalu dilakukan penambahan flavour dan setelah itu dilakukan penuangan ke dalam wadah dan didiamkan selama 5 jam dalam refrigerator sampai menjadi marshmallow.

3.3.3. Ekstraksi asam amino dari produk marshmallow dengan hidrolisis

menggunakan HCl 6N pada suhu 110 C selama 22 jam Sebanyak 0,1 gram sampel marshmallow dihidrolisis dengan menggunakan larutan HCl 6 N sebanyak 5 ml, vortex. Lalu dialiri Nitrogen dan di oven pada suhu 110 C selama 22 jam. Setelah dihidrolisis, campuran didinginkan pada suhu ruang. Pindahkan isi tabung reaksi bertutup ke dalam labu ukur 50 ml, tambahkan aquabides sampai tanda batas. Saring dengan filter 0,45µm. Pipet 500 µl filtrat lalu tambahkan 40 µl AABA alpha aminobutyric acid dan 460 µl aquabides. Pipet 10 µl larutan, tambahkan 70 µl AccQ Fluor borate, vortex. Tambahkan 20 µl reagen fluor A, vortex, diamkan selama 1 menit. Inkubasi selama 10 menit pada suhu 55 C, lalu suntikkan pada HPLC. Dengan kondisi kromatografi menggunakan kolom C18, temperatur 37 C, fase gerak asetonitril 60 dan 40 air , detektor fluoresen, laju alir 1 ml menit dan volume penyuntikan 5µl.

3.4 Analisis data

Analisis komposisi masing masing asam amino dalam sampel dapat dihitung dengan perhitungan : Kadar asam amino dalam mg 100 gram Area komponen area AABAsampel x C std x BM x fp x 100 Area komponen area AABAstandar x 1000000 x gr x 1000 Dan untuk analisis komponen utama PCA dilakukan dengan perangkat lunak Minitab versi 15. Nilai persen tinggi puncak masing masing asam amino adalah variabel variabel yang akan dimasukkan ke dalam analisis data statistik dengan PCA.