3.3.33 Pembuatan Usus Halus yang Dihomogenkan
Hewan percobaan berupa kelinci jantan dipuasakan selama 20-24 jam. Setelah itu kelinci tersebut dianaestesi, kemudian dilakukan pembedahan pada
bagian perut tetapi jangan sampai mengenai tulang dada. Setelah usus halus dikeluarkan dan dibersihkan bagian dalamnya dari kotoran dan bagian luar dari
jaringan yang mengikat pembuluh darah halus, dan sebagainya dengan bantuan pinset dan gunting, dan dicuci dengan natrium klorida fisiologis dingin. Lalu usus
halus ditimbang, dipotong kecil-kecil, dimasukkan kedalam alat homogenizer mixer
dan ditambahkan dapar fosfat pH 7,4 sebanyak 5 kali berat usus halus lalu dihomogenkan. Dipipet 50 µl usus halus homogen dan dimasukkan kedalam
politube lalu disimpan pada temperatur 0-4
˚
C dengan bantuan es.
3.3.34 Pembuatan Larutan Induk Baku Asam Mefenamat dalam Dapar Fosfat pH 7,4
Ditimbang seksama 50 mg asam mefenamat dimasukkan kedalam labu tentukur 25 ml, dilarutkan dengan natrium hidroksida lalu ditambahkan dapar
fosfat pH 7,4 sampai garis tanda dan dikocok hingga homogen, sehingga diperoleh konsentrasi 2000 mcgml.
3.3.35 Penentuan Kurva Absorpsi Asam Mefenamat dalam Dapar Fosfat pH 7,4
Dipipet 1,25 ml Larutan Induk Baku asam mefenamat, dimasukkan dalam labu tentukur 10 ml lalu dicukupkan dengan dapar fosfat pH 7,4 sampai garis
tanda. Kemudian diukur absorbansinya pada panjang gelombang 200-400 nm.
3.3.36 Penentuan Kurva Kalibrasi Asam Mefenamat dalam Dapar Fosfat
pH 7,4
Dipipet 1,5 ml; 2,0 ml; 2,5 ml; 3,0 ml; 3,5 ml dari Larutan Induk Baku, lalu masing-masing dimasukkan kedalam labu tentukur 10 ml dan dicukupkan
dengan dapar fosfat pH 7,4 sampai garis tanda, sehingga diperoleh konsentrasi 300 mcgml; 400 mcgml; 500 mcgml; 600 mcgml; 700 mcgml. Kemudian
diukur absorbansinya pada panjang gelombang 209,0 nm.
3.3.37 Penentuan Waktu Up take Asam Mefenamat dalam Usus Halus yang
Dihomogenkan
Politube yang berisi 50 µl usus halus homogen disimpan pada temperatur 0-4
˚C dengan bantuan es, kemudian diprainkubasikan selama 3 menit. Lalu dilakukan percobaan up take dengan cara memasukkan larutan Asam mefenamat
dengan konsentrasi 0,002 M sebanyak 100 µl kedalam politube, dan dicampur homogen dengan bantuan vortex kemudian diinkubasi dengan variasi waktu
30 detik; 1 menit; 2 menit; 3 menit; 5 menit; 7 menit; 10 menit; 15 menit pada temperatur kamar. Lalu ditambahkan etanol sebanyak 4 kali volume sampel,
dicampur homogen dengan bantuan vortex dan disentrifugasi selama 30 detik, 3000 rpm. Dipipet supernatan sebanyak 0,5 ml, dimasukkan kedalam labu
tentukur 10 ml dan ditambahkan dengan dapar fosfat pH 7,4 sampai garis tanda. Kemudian diukur absorbansinya dengan spektrofotometer ultraviolet.
3.3.38 Penentuan Kurva Kalibrasi Asam Mefenamat dalam Usus Halus yang Dihomogenkan
Kategori