mikroskop inverted. Sel dipastikan tersebar pada seluruh permukaan flask tidak bergerombol pada bagian tertentu. Pada flask kultur diberi identitas, dan
kemudian disimpan dalam inkubator CO
2
5 Doyle, et al., 2000.
3.9.5 Subkultur sel Vero
Alat dan bahan dipersiapkan dan dikondisikan pada suhu ruangan, seluruh pekerjaan dilakukan di dalam LAF. Proses panen sel Vero dilakukan dengan cara
mengambil 500 µl panenan sel dan dimasukkan ke dalam flask kultur. Kemudian ditambahkan 6 ml media kultur sel Vero, dan dihomogenkan. Sel Vero diinkubasi
pada inkubator CO
2
5, kondisi sel diamati pada keesokan harinya Doyle, et al.,
2000.
3.9.6 Panen sel sel Vero
Dipersiapkan alat dan dikondisikan bahan pada suhu ruangan, diamati kondisi sel Vero. Panen dilakukan apabila sel telah dalam kondisi 80 konfluen,
semua pekerjaan dilakukan pada LAF. Buang MK-M199 dari flask dengan mikropipet atau pipet pasteur, cuci sel 2 kali dengan 5 ml PBS Phosphate Buffer
Salin, ditambahkan 400 µl Tripsin-EDTA 0,25 secara merata, kemudian diinkubasi di dalam inkubator CO
2
selama ± 5 menit, dan ditambahkan 4 ml MK untuk menginaktifkan tripsin. Diresuspensi sel dengan mikropipet agar sel
terlepas satu-satu tidak menggerombol. Diamati keadaan sel di mikroskop inverted. Diresuspensi sel kembali kareana masih ada sel yang menggerombol.
ditransfer sel ke dalam tabung konikel Doyle, et al., 2000.
3.9.7 Penghitungan sel T47D dan sel Vero
Dipersiapkan alat dan dikondisikan bahan pada suhu ruangan, diambil 10 µl panenan sel dan dipipet ke dalam hemositometer. Dihitung jumlah sel dibawah
Universitas Sumatera Utara
mikroskop dengan menggunakan counter. Gambar Hemositometer kamar hitung dapat dilihat pada Gambar 3.1.
Gambar 3.1 Hemositometer kamar hitung
Hemositometer terdiri dari 4 kamar hitung A, B, C, dan D, setiap kamar hitung terdiri dari 16 kotak. Dihitung sel pada 4 kamar hemositometer, sel yang
gelap mati dan sel yang berada dibatas luar di sebelah kiri dan atas tidak ikut dihitung. Sel dibatas kanan dan bawah ikut dihitung. Hitung jumlah sel per ml
dengan rumus Nugroho, et al., 2012:
Setelah jumlah per ml didapat kemudian dihitung volume panenan sel yang diperlukan, dimana untuk menanam sel pada 96-well plate jumlah total sel
yang diperlukan adalah 1 x 10
4
sumuran x 100 sumuran dibuat lebih = 1 x 10
6
, volume panenan sel yang diperlukan dalam mL dihitung dengan rumus:
Volume panenan sel yang diperlukan Ambil volume panenan sel, transfer ke tabung konikel baru kemudian tambahkan
MK sampai total volume yang diperlukan.
Universitas Sumatera Utara
3.10 Pembuatan Larutan Uji
