senyawa yang terlarut bukan merupakan senyawa yang ingin diuji dalam penelitian ini.
Setelah itu, proses partisi dilanjutkan kembali menggunakan pelarut yang berbeda, yaitu etil asetat yang berbobot jenis 0,898 gml dengan perbandingan
volume 1:1 vv. Pada partisi ini, etil asetat berada di atas karena bobot jenis air lebih besar 0,996 gml dibandingkan etil asetat. Proses ekstraksi ini juga
dilakukan berulang, yakni tiga kali sampai pelarut etil asetat menjadi bening. Hal ini menandakan bahwa tidak ada lagi senyawa yang larut dalam pelarut etil asetat.
Pada proses partisi ini, fraksi yang diambil adalah fraksi etil asetat karena sebagian besar senyawa-senyawa flavonoid larut dalam fraksi etil asetat.
Fraksi etil asetat yang didapat, dievaporasi menggunakan vacuum rotary evaporator
untuk menghilangkan pelarut. Kemudian dioven untuk menguapkan sisa-sisa etil asetat sampai didapat bobot tetap fraksi etil asetat ekstrak etanolik.
Fraksi etil asetat ini yang akan digunakan untuk uji aktivitas antioksidan dan ditetapkan kandungan fenolik total yang dinyatakan sebagai ekivalen asam galat.
Berat fraksi etil asetat yang didapat yaitu 245 mg dan disimpan dalam eksikator untuk menjaga stabilitas senyawa dari pengaruh cahaya maupun kelembaban
lingkungan.
E. Uji Pendahuluan
1. Uji pendahuluan fenolik total
Uji pendahuluan fenolik total ini bertujuan untuk mengetahui adanya kandungan fenolik dalam fraksi etil asetat ekstrak etanolik kulit jeruk nipis secara
kualitatif. Prinsip dari uji ini adalah reaksi oksidasi-reduksi pada suasana basa. Penambahan natrium karbonat akan memberikan suasana basa yang akan
mengubah senyawa fenolik menjadi ion fenolat. Ion fenolat yang terbentuk akan dioksidasi oleh asam fosfomolibdab-fosfotungstat dalam reagen Folin-Ciocalteu
yang menyebabkan larutan berubah menjadi warna biru. Keberadaan senyawa fenolik dalam sampel positif apabila terjadi perubahan warna pada reagen Folin-
Ciocalteu yang berwarna kuning menjadi biru. Pada uji pendahuluan ini, fraksi etil asetat ekstrak etanolik kulit jeruk nipis menunjukkan hasil positif dengan
adanya perubahan larutan menjadi berwarna biru, sehingga dapat dikatakan bahwa mengandung senyawa fenolik.
Gambar 3. Hasil uji pendahuluan fenolik A = reagen Folin-Ciocalteu + larutan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis, B = kontrol
positif [reagen Folin-Ciocalteu + asam galat], C = blanko [reagen Folin- Ciocalteu + natrium karbonat
2. Uji pendahuluan aktivitas antioksidan
Uji pendahuluan merupakan langkah awal dalam penentuan aktivitas antioksidan yang bertujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antioksidan dari
A B C
fraksi etil asetat ekstrak etanolik kulit jeruk nipis secara kualitatif. Uji ini dilakukan dengan mereaksikan DPPH 0,4 mM dengan larutan sampel uji yang
dibandingkan dengan kontrol negatif hanya larutan DPPH dan kontrol positif larutan DPPH yang direaksikan dengan larutan baku pembanding, yaitu rutin.
Apabila senyawa uji memiliki aktivitas antioksidan, ketika direaksikan dengan DPPH maka radikal DPPH akan menangkap elektron yang menyebabkan
berkurangnya ikatan rangkap konjugasi karena tidak adanya kesempatan elektron untuk beresonansi. Reaksi ini ditandai dengan adanya perubahan warna larutan
DPPH yang berwarna ungu menjadi kuning. Pada hasil uji pendahuluan Gambar 4 ini menunjukkan hasil positif untuk larutan rutin yang ditandai dengan
perubahan warna ungu menjadi kuning, sedangkan untuk larutan sampel uji juga menunjukkan hasil positif dengan ditandai dengan adanya penurunan intensitas
warna ungu. Walaupun tidak terjadi perubahan warna manjadi kuning dan hanya penurunan intensitas warna, tetap ada kemungkinan aktivitas antioksidan.
A B C
Gambar 4. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan A = larutan DPPH + larutan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis, B =
kontrol negatif [larutan DPPH], C = kontrol positif [larutan DPPH + larutan rutin]
Gambar 5. Hasil uji pendahuluan aktivitas antioksidan A = larutan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk nipis + metanol, B = larutan
rutin + metanol
F. Optimasi Metode Uji Aktivitas Antioksidan
