36
3.8 Cara kerja dan teknik pengumpulan data
Setelah mendapat persetujuan dari komisi etik untuk melakukan penelitian, penelitian dimulai dengan mengumpulkan data pasien
yang didiagnosis dengan endometrioma dan karsinoma ovarium yang telah menjalani laparatomi dan laparaskopi yang jaringannya
telah dilakukan pemeriksaan histopatologi.
Dilakukan pengumpulan blok parafin di Departemen Patologi Anatomi RSUP H. Adam Malik Medan dan dicari data rekam medis
pasien tersebut.
Pasien diseleksi berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi
Pada blok parafin dilakukan pemeriksaan imunohistokimia untuk menentukan ekspresi p53. Pemeriksaan imunohistokimia adalah
pemeriksaan jaringan yang telah dilabel dengan antibodi spesifik untuk melihat ekspresi protein antigen spesifik dengan mikroskop.
Pembacaan hasil pemeriksaan imunohistokimia dilakukan oleh dua orang pengamat yaitu dua orang spesialis Patologi Anatomi.
Hasil interpretasi sediaan tersebut dilakukan analisis statistik.
3.9 Prosedur Pemeriksaan Imunohistokimia 3.9.1 Alat Penelitian
Alat-alat yang diperlukan untuk penelitian ini adalah: mikrotom, waterbath, hot plate, freezer, incubator, staining jar, rak object glass, pipet
mikro, kertas saring, tabung sentrifuge 15ml, coated object glass, kaca penutup, entelan dan mikroskop cahaya, Bondmaxfull automatic.
37
3.9.2 Bahan Penelitian Blok parafin yang telah didiagnosa dengan pulasan Hematoksilin Eosin
Pulasan imunohistokimia menggunakan alat Bondmax full automatic. Antibodi primer yang digunakan adalah monoclonal antibody p53,
dengan pengenceran 1: 100.
3.9.3 Cara kerja
Blok parafin yang telah dikumpulkan, disimpan dalam freezer sampai cukup dingin, selanjutnya dipotong tipis dengan
menggunakan mikrotom dengan tebal 4µm dan ditempelkan pada coated object glass.
Preparat yang siap dipulas dimasukkan dalam alat Bondmax full automatic selama 4 jam.
Setelah itu, dilakukan dehidrasi dengan cara : dicelupkan secara berurutan pada cairan alkohol 70, 80, 90 dan etanol 98
masing-masing 20 celup
Masukkan dalam cairan xylol selama 3 menit
Teteskan entelan dan tutup dengan kaca penutup
3.9.4 Instrumen Penilaian
Penilaian imunuhistokimia untuk ekspresi protein p53 menggunakan skor Allred karena sistem ini telah biasa dilakukan di Departemen Patologi
Anatomi RSUP H. Adam Malik Medan. Skor ini adalah hasil penjumlahan
Kategori