23
3.4.1.8 Kadar Inulin AOAC, 1995
Kadar inulin diukur dengan menggunakan metode HPLC. Metode ini meliputi pembuatan larutan standar, ekstraksi sampel, dan hidrolisis sampel. Sampel yang telah
diekstraksi dan dihidrolisis dihitung konsentrasi inulin dengan membandingkannya dengan kurva larutan standar.
Larutan standar dibuat dengan menimbang fruktosa sebagai standar sebanyak 2 mg. Fruktosa dimasukkan dalam labu takar 100 ml dan ditepatkan dengan menggunakan akuades
lalu dikocok hingga homogen. Dari larutan tersebut dibuat larutan induk 1000 ppm, kemudian buat deret konsentrasi 5 ppm, 25 ppm, 50 ppm dengan masing-masing ditambah internal
standar konsentrasi 50 ppm. Saring dengan filter dan masukkan ke dalam vial untuk disuntikkan pada HPLC.
Proses ekstraksi sampel dilakukan dengan cara menghomogenkan sampel yang kemudian dimasukkan ke dalam gelas piala. Tambahkan air panas sebanyak 40 ml dan
tambahkan KOH 0.05 N atau HCL 0.05 N hingga pH sekitar 6.5-8. Larutan tersebut kemudian dimasukkan ke dalam labu takar 100 ml, dipanaskan 85°C, dan diaduk. Larutan tersebut
didinginkan dan kemudian dipindahkan ke dalam gelas piala untuk diaduk kuat. Setelah itu encerkan hingga mengandung 1 fruktan.
Langkah berikutnya adalah hidrolisis sampel hasil ekstraksi dengan menggunakan enzim inulinase. Mula-mula diambil 15 g sampel A, kemudian ditambah 15 g buffer asetat
hingga memiliki pH 4.5. Ditambahkan amiloglukosidase sebanyak 35 mg dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu 60°C, lalu ditimbang B. Sebanyak 10 g sampel ditimbang dan
ditambah enzim inulinase. Sampel tersebut diinkubasi kembali pada suhu 60°C selama 30 menit. Biarkan dingin, lalu ditimbang C. Hasil ekstraksi A, B, dan C masing-masing
diencerkan, ditambahkan internal standar glukoheptosa 20 ppm, disaring, lalu diinjeksikan pada HPLC.
3.4.1.8 Total padatan AOAC, 1995
Penentuan total padatan didasarkan pada penetapan kadar air. Sebanyak 5 gram bahan ditimbang dalam cawan aluminium yang telah diketahui bobot kosongnya, kemudian
dikeringkan dalam oven bersuhu 105 C sampai beratnya konstan.
3.4.2 Analisis Mutu Mikrobiologi
3.4.2.1 Viabilitas kultur starter atau total balbakteri asam laktat BSN, 2009
Sebanyak 1 ml sampel diencerkan dalam 9 ml larutan garam fisiologis NaCl 0.85 hingga pengenceran 10
-8
. Kemudian dipipet sebanyak 1 ml atau 0,1 ml sampel yang telah diencerkan ke dalam cawan petri steril pemupukan dari tingkat pengenceran 10
-7
dilakukan duplo, ditambahkan dengan 15-20 ml MRSA cair media yang belum memadat steril.
Kemudian cawan petri digoyangkan secara mendatar agar sampel menyebar rata. Setelah agar membeku, diinkubasi dengan posisi terbalik pada suhu 37
C selama 2-3 hari. Jumlah koloni yang tumbuh dihitung dengan metode SPC dan dinyatakan dalam satuan cfuml.
3.4.2.2 Pengukuran bakteri koliform BSN, 2009
Sampel sebanyak 1 ml ditambahkan 9 ml larutan pengencer. Pengenceran dibuat dari 10
-0
-10
-3
dengan menggunakan medium BGLBB dan tabung durham di dalam masing-
24 masing media BGLBB. Setelah seluruh sampel diencerkan pada empat tingkat pengenceran
maka tabung diinkubasi pada suhu 37°C selama 2 hari. Kemudian dihitung jumlah tabung positif yang ditandai dengan adanya pembentukan gas pada tabung durham. Kemudian hasil
pengamatan dicocokkan dengan tabel MPN kombinasi 3 seri, dihitung dan dinyatakan dalam cfuml.
3.4.2.3 Pengukuran bakteri Salmonella BSN, 2009
Pengujian bakteri Salmonella dimulai dari tahap enrichment yaitu sampel 25 ml dimasukkan ke dalam media SCB lalu diinkubasi selama 37°C selama 1 hari. Setelah itu ambil
satu ose kultur dari tahap enrichment dan goreskan masing-masing pada agar cawan HEA, BSA, dan XLDA dan dinkubasi pada suhu 37°C selama 1-2 hari. Amati adanya koloni
Salmonella yaitu berupa koloni keruh atau bening dan tidak berwarna dengan atau tanpa bintik hitam di tengah. Apabila positif Salmonella maka dapat dilakukan uji lanjut dengan membuat
goresan dan tusukan pada agar miring TSI dan tusukan pada agar tegak SIM.
3.4.3 Uji Organoleptik Meilgaard et al., 2009
Kategori