Jenis dan Rancangan Penelitian Definisi Operasional Bahan Penelitian Alat Penelitian

38

BAB III METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian ini merupakan jenis rancangan penelitian eksperimental deskriptif karena adanya perlakuan pada subjek uji.

B. Variabel Penelitian 1. Variabel Bebas

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah perbandingan komposisi fase gerak metanol : ammonium asetat 10 mM + TEA 0,1 dan kecepatan alir yang digunakan.

2. Variabel Tergantung

Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah bentuk peak, retention time, dan nilai resolusi yang dihasilkan

3. Variabel Pengacau Terkendali

a. Kemurnian pelarut, digunakan pelarut pro analysis yang memiliki kemurnian tinggi. b. Paparan cahaya dan udara terhadap stabilitas larutan baku nikotin, diatasi dengan menggunakan alumunium foil untuk menutup serta meminimalkan kontak dengan cahaya dan udara saat dipreparasi.

C. Definisi Operasional

1. Sistem Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT merupakan seperangkat alat KCKT fase terbalik yang menggunakan fase diam oktil silika C 8 dan fase gerak metanol : ammonium asetat 10 mM + TEA 0,1 dengan perbandingan yang optimal. 2. Optimasi dilakukan dengan cara melakukan pengubahan terhadap komposisi fase gerak dan kecepatan alir. 3. Parameter pemisahan yang optimal dengan metode KCKT fase terbalik terlihat dari bentuk peak, retention time, nilai resolusi, nilai TF dan resolusi yang dihasilkan.

D. Bahan Penelitian

Bahan yang digunakan memiliki kualitas pro analysis kecuali dinyatakan lain yaitu baku nikotin E. Merck, baku asetanilida E. Merck, ammonium asetat E.Merck, metanol E. Merck, natrium hidroksida E. Merck, kloroform E. Merck, asam klorida E. Merck, trietilamin E. Merck, etanol teknis, aquadest, dan aquabidest yang didapatkan dari Laboratorium Kimia Analisis Instrumen Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah rokok “Merek X” yang dibeli di Lotte Mart Yogyakarta .

E. Alat Penelitian

Alat yang digunakan berupa : seperangkat alat spektrofotometri UV-VIS merek Shimadzu tipe UV Mini-1240, seperangkat KCKT fase terbalik merek Shimadzu dengan sistem gradien pompa merek Shimadzu, detektor UV-VIS merek Shimadzu, kolom oktil silika C 8 merek Shimadzu spesifikasi ukuran diameter internal 4,6 mm x 25 cm, ukuran diameter partikel 5 µm fully encapped residual silanol, seperangkat komputer merek Dell B6RDZ1S Connexant System RD01-D850 A0-0382 JP France S.A.S, printer HP Deskjet D2566 HP-024-000 625 730, ultrasonikator merek Retsch tipe T460 No V935922013 EY, destilator aquabidest merek Thermo Scientific, syringe, neraca analitik Scaltec SBC 22 maks 60120 g, min 0,001g, d=0,010,1 mg, milipore filter, mikropipet Socorex, organic and anorganic solvent membrane filter Whatman ukuran pori 0,45 m dengan diameter 47 mm, vakum, dan seperangkat alat gelas Pyrex.

F. Tata Cara Penelitian 1. Pembuatan Fase Gerak