Keuntungan dan Keterbatasan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Validasi

17

2.4.6 Keuntungan dan Keterbatasan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

Ada beberapa keuntungan kromatografi cair kinerja tinggi, yaitu : 1. Dapat menganalisis sampel yang tidak mudah menguap atau tidak stabil dengan pemanasan 2. Interaksi yang lebih selektif dengan molekul sampel karena fase gerak dan fase diam berperan dalam proses kromatografi 3. Berbagai jenis kolom yang selektif Ahuja and Jespersen,2006. 4. Menghasilkan pemisahan dengan kecepatan tinggi 5. Waktu analisis yang cepat Kenkel,1994. 6. Pemasukan sampel yang tepat dan mudah dikendalikan sehingga menjamin presisi kuantitaif 7. Risiko peruraian sampel yang lebih kecil karena tidak dilakukan pemanasan 8. Keragaman kolom dan detektor berarti bahwa selektivitas metode tersebut dapat disesuaikan dengan mudah Watson,2007; Cazes,2005. Keterbatasan KCKT adalah untuk identifikasi senyawa, kecuali jika KCKT dihubungkan dengan spektrofotometer massa MS. Selain itu, keterbatasan lainnya adalah jika sampel yang dianalisis sangat kompleks, maka resolusi yang baik sulit diperoleh Rohman,2007.

2.4.7 Validasi

Validasi adalah suatu tindakan terhadap parameter tertentu pada prosedur penetapan yang dipakai untuk membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk penggunaannya WHO, 1992. Lisa Bella : Optimasi Fase Gerak Dan Laju Alir Pada Penetapan Kadar Campuran Guaifenesin Dan Dekstrometorfan HBr Dalam Sirup Dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT, 2010. 18 Validasi metode menurut United States Pharmacopeia USP dilakukan untuk menjamin bahwa metode analisis akurat, spesifik, reprodusibel dan tahan pada kisaran analit yang akan dianalisis. Suatu metode analis harus divalidasi untuk verifikasi bahwa parameter-parameter kinerjanya cukup mampu untuk mengatasi masalah dalam analisis. Parameter analisis yang ditentukan pada validasi adalah akurasi, presisi, batas deteksi, batas kuantitasi, spesifikasi, linieritas dan rentang, kekasaran Ruggedness dan ketahanan Robutness. Akurasi merupakan ketelitian metode analisis atau kedekatan antara nilai terukur dengan nilai yang diterima. Akurasi diukur sebagai banyaknya analit pada suatu pengukuran dengan melakukan spiking pada suatu sampel. Presisi merupakan ukuran keterulangan metode analisis dan biasanya diekspresikan sebagai relatif standar deviasi RSD dari sejumlah sampel yang berbeda secara signifikan secara statistik Rohman,2007. Batas deteksi limit of detection, LOD didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang masih dapat terdeteksi Epshtein,2004. Batas kuantitasi limit of quantitation, LOQ didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima pada kondisi analisis dengan metode yang digunakan Epshtein,2004. Lisa Bella : Optimasi Fase Gerak Dan Laju Alir Pada Penetapan Kadar Campuran Guaifenesin Dan Dekstrometorfan HBr Dalam Sirup Dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT, 2010. 19

BAB III METODOLOGI PENELITIAN

2.1 Waktu dan Tempat Penelitian

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental terhadap optimasi fase gerak dan laju alir, yang dilakukan di Laboratorium Penelitian Fakultas Farmasi Universitas Sumatera Utara pada bulan Agustus sampai Oktober 2009.

2.2 Alat-alat

Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi seperangkat instrumen kromatografi cair kinerja tinggi Shimadzu yang terdiri dari pompa LC 20 AD, detektor UVVis SPD 20 A, kolom Sim-Pack VP ODS 4,6 x 250 mm, degasser DGU 20 A 5 , injector Rheodyne 7225 i, pompa vakum Gast DO A-PG04-BN, Sonifikator Branson 1510, syringe 100 l SGE, alat penyaring fase gerak dan sampel dilengkapi membran Whatman PTFE 0,5 m, membran selulosa nitrat 0,45 m, dan membran Whatman PTFE 0,2 m, neraca analitik Mettler Tolledo, pH meter Hanna, dan alat gelas lainnya.

2.3 Bahan-bahan

Bahan-bahan yang digunakan jika tidak dinyatakan lain adalah kualitas pro analisis produksi E.Merck yaitu amoniak 25 , asam format 98, metanol, aquabidestilata PT. Ikapharmindo Putramas, dekstrometorfan HBr BPFI Badan POM RI, guaifenesin BPFI Badan POM RI, baku dekstrometorfan HBr PT. Pembangunan Rocella Laboratories, baku guaifenesin PT. Pembangunan Lisa Bella : Optimasi Fase Gerak Dan Laju Alir Pada Penetapan Kadar Campuran Guaifenesin Dan Dekstrometorfan HBr Dalam Sirup Dengan Metode Kromatografi Cair Kinerja Tinggi KCKT, 2010.