d. Estimasi aktivitas antioksidan Hasil dari prosedur 7 a dan b, dihitung nilai IC dan IC
50
untuk kuersetin dan fraksi etil asetat ekstrak etanolik daun dadap serep.
8. Optimasi metode penetapan kandungan fenolik total
Optimasi metode penetapan kandungan fenolik total ditentukan dengan menggunakan metode spektrofotometri.
a. Penentuan OT Sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 50; 100; dan 150 gmL
ditambahkan dengan 5 mL reagen Folin-Ciocalteu yang telah diencerkan dengan air 1:10 vv. Larutan selanjutnya ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat
1 M. Setelah itu, dibaca absorbansinya dengan spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 750 nm selama 30 menit.
b. Penentuan panjang gelombang maksimum Sebanyak 0,5 mL larut
an asam galat 50; 100; dan 150 gmL ditambahkan dengan 5 mL reagen Folin-Ciocalteu yang telah diencerkan dengan
air 1:1 vv. Larutan selanjutnya ditambahkan dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M. Diamkan selama OT,
absorbansinya dibaca pada maksimum dengan spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 600-800 nm.
9. Penetapan kandungan fenolik total
a. Pembuatan kurva baku asam galat Sebanyak 0,5 mL larutan asam galat 50; 75; 100; 125; dan 150 gmL
ditambah dengan 5 mL reagen Folin-Ciocalteu yang telah diencerkan dengan air 1:1 vv. Larutan selanjutnya ditambah dengan 4,0 mL natrium karbonat 1 M.
Setelah OT, absorbansinya dibaca pada maksimum terhadap blanko yang terdiri
atas akuades : metanol p.a 1:1, reagen Folin-Ciocalteu dan larutan natrium karbonat 1 M. Pengerjaan dilakukan 3 kali.
b. Validasi metode penetapan kandungan fenolik total Hasil dari prosedur 9 a , divalidasi presisi CV, spesifisitas spektra
kontrol, dan linearitas nilai r. CV =
� � � � ��
� −
�
x 100
c. Estimasi kandungan fenolik total larutan uji Diambil 0,5 mL larutan uji 50
0 gmL, lalu masing-masing dimasukan ke dalam labu takar 10,0 mL dan dilanjutkan sebagaimana perlakuan pada
pembuatan kurva baku asam galat . Kandungan fenolik total dinyatakan sebagai gram ekivalen asam galat mg ekivalen asam galat per g fraksi etil asetat.
Lakukan 3 kali replikasi.
F. Analisis Hasil
