menyebabkan terganggunya reaksi biologis dan proses fisiologis pada tubuh Winarno 2008.
Karbohidrat merupakan salah satu nutrisi dasar yang paling banyak digunakan sebagai sumber energi utama karena menyumbang energi sebesar
4 kkal Belitz et al. 2009. Perhitungan kadar karbohidrat dilakukan dengan metode by difference, yaitu penentuan kadar karbohidrat dalam suatu bahan
pangan secara kasar. Kadar karbohidrat yang dihasilkan dalam penelitian ini adalah
sebesar 33,96.
Penelitian yang
dilakukan oleh
Bunyapraphatsara et al. 2002 memperoleh kadar karbohidrat pada tanaman Rhizophora mucronata sebesar 22,29.
Karbohidrat banyak ditemukan dalam bahan nabati, antara lain serealia, umbi-umbian dan batang tanaman. Karbohidrat dalam buah ditemukan dalam
bentuk pati dan gula sederhana misalnya glukosa dan fruktosa. Secara umum pati digunakan sebagai tempat menyimpan cadangan energi. Selama proses
pematangan, kandungan pati dalam buah akan diubah menjadi gula pereduksi. Pati yang masuk ke dalam saluran pencernaan akan diurai menjadi glukosa. Pati
akan dioksidasi lebih lanjut didalam sel dan digunakan dalam menyediakan energi untuk membuat berbagai senyawa yang dibutuhkan tubuh diantaranya protein,
lipid dan asam nukleat Roswiem et al. 2006.
4.2 Ekstraksi Komponen Bioaktif Buah Bakau
R. mucronata
Ekstraksi merupakan proses penarikan komponen zat aktif dalam suatu bahan dengan pelarut tertentu. Tujuan proses ini adalah untuk mendapatkan
bahan aktif dari bagian tertentu suatu bahan Harbone 1984. Proses ekstraksi dimulai dengan pemotongan sampel, penghancuran sampel menjadi ukuran yang
lebih kecil serbuk, maserasi, penyaringan dan proses evaporasi menggunakan rotary vacuum evaporator.
Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah bagian buah bakau yang telah dipisahkan kulitnya. Hal tersebut mengacu pada hasil penelitian
Bunyapraphatsara et al. 2002 yang juga menggunakan buah dari tanaman Rhizophora mucronata di Thailand. Proses ekstraksi pada penelitian ini
menggunakan pelarut n-heksana non polar, etil asetat semi polar dan metanol
polar. Proses maserasi dilakukan selama 24 jam yang mengacu kepada penelitian Tiwari et al. 2011 pada beberapa tanaman obat di India.
4.2.1 Ekstrak kasar Hasil ekstraksi dari buah bakau memiliki warna yang berbeda-beda.
Ekstrak metanol memiliki warna coklat kehitaman, etil asetat berwarna hijau tua, sedangkan ekstrak n-heksana memiliki warna hijau muda. Perbedaan tersebut
tidak hanya dilihat dari warna sampel, akan tetapi dari sisi jumlah rendemen. Perhitungan rendemen ekstrak buah bakau dapat dilihat pada Lampiran 5.
Nilai rendemen ekstrak buah bakau tertinggi adalah ekstrak metanol sebesar 10,95 , ekstrak etil asetat sebesar 0,25 dan nilai ekstrak terkecil
adalah ekstrak n-heksana sebesar 0,12 . Perbedaan nilai rendemen yang dihasilkan dari ketiga pelarut tersebut disebabkan berbedanya sifat polaritas
larutan-larutan tersebut. Hal ini sesuai dengan pendapat Salamah et al. 2008, bahwa rendemen ekstrak hasil maserasi dengan pelarut yang berbeda akan
menghasilkan presentase rendemen yang berbeda. Nilai rendemen yang dihasilkan dari ekstrak metanol diduga dipengaruhi sifat larutan tersebut yang
dapat melarutkan hampir semua komponen bahan aktif. Wasmund et al. 2006 menyatakan bahwa klorofil merupakan zat warna hijau yang dapat diekstrak
dengan pelarut polar, misalnya metanol, aseton, dan etanol. 4.2.2 Komponen bioaktif pada ekstrak kasar
Ekstraksi bahan alam adalah ekstraksi komponen aktif yang terdapat pada bahan alam yang didasari pada prinsip perpindahan massa komponen zat ke dalam
pelarut, dimana perpindahan mulai terjadi pada lapisan antar muka kemudian berdifusi ke dalam pelarut Harbone 1984. Filtrat pekat tiga pelarut tersebut
kemudian diuji komponen bioaktifnya melalui uji fitokimia, yang meliputi uji alkaloid, flavonoid, steroid, fenol hidroquinon, dan uji tanin. Hasil uji fitokimia
pada masing-masing ekstrak kasar buah bakau dapat dilihat pada Tabel 3. Gambar uji fitokimia dapat dilihat di Lampiran 12.
Tabel 3 Hasil uji fitokima ekstrak kasar buah bakau
Uji Fitokimia Ekstrak
Standar Warna
Hasil Metanol
Etil Asetat
N- heksana
1. Alkaloid a. Dragendroff
+ –
– endapan merah
atau jingga endapan jingga
b. Meyer –
– –
endapan putih kekuningan
tidak terdapat endapan putih
kekuningan
c. Wegner +
+ –
endapan coklat terbentuk endapan
coklat 2. Steroid
+ +
+ perubahan dari
merah menjadi hijaubiru
metanol dan n- hensana : hijau
muda, etil asetat: hijau kebiruan
3. Flavonoid +
+ –
lapisan amil alkohol
berwarna merahkuninghi
jau terbentuk amil
alkohol berwarna kuning
4. Fenol Hidroquinon
+ +
– warna
hijauhijau biru metanol: hijau
kebiruan, etil asetat: hijau
5. Tanin +
+ –
warna hijau kebiruanhijau
kehitaman metanol: terbentuk
warna hijau kebiruan, etil asetat:
hijau kehitaman
Hasil pengujian komponen bioaktif pada buah bakau ekstrak kasar metanol mengandung komponen bioaktif yang lebih banyak dibandingkan dengan ekstrak
kasar etil asetat dan ekstrak kasar n-heksana. Komponen bioaktif pada ekstrak kasar metanol meliputi alkaloid, steroid, flavonoid, fenol hidroquinon, dan tanin.
Komponen bioaktif pada ekstrak kasar etil asetat meliputi alkaloid, steroid, flavonoid, fenol hidroquinon, dan tanin. Komponen bioaktif pada ekstrak kasar n-
heksana adalah steroid. Senyawa antioksidan alami umumnya adalah senyawa turunan fenolik atau polifenol dan turunan flavonoid misalnya flavon, isoflavon,
katekin yang cenderung larut dalam pelarut polar. Hal ini sesuai dengan Atta-au-rahman et al. 2001 yang menyatakan bahwa senyawa yang berpotensi
memiliki antioksidan umumnya adalah senyawa flavonoid, alkaloid dan fenolat yang larut dalam pelarut polar.
1 Alkaloid
Alkaloid merupakan golongan senyawa sekunder yang bersifat basa, mengandung satu atau lebih atom hidrogen Harborne 1984. Pengujian alkaloid
dilakukan menggunakan pereaksi pengendapan untuk memisahkan jenis alkaloid. Pereaksi yang umum digunakan adalah pereaksi Meyer yang mengandung kalium
iodide dan merkuri klorida. Pereaksi Dragendorff mengandung bismuth nitrat dan merkuri klorida dalam nitrit berair. Pereaksi Bouchardat mirip dengan
pereaksi Wagner dan mengandung kalium iodida dan yodium. Berbagai pereaksi digunakan untuk mengetahui perbedaan yang besar dalam hal sensivitas terhadap
gugus alkaloid yang berbeda Sastrohamidjojo 1996. Hasil pengujian fitokimia menghasilkan nilai positif adanya alkaloid pada
ekstrak metanol dan etil asetat. Pada ekstrak kasar n-heksana tidak mengandung senyawa alkaloid. Adanya endapan jingga pada pereaksi Dragendorf dan
terbentuknya endapan cokelat dengan menggunakan pereaksi Wegner menandakan suatu bahan positif mengandung alkaloid. Hasil uji dengan pereaksi
Meyer menghasilkan nilai negatif dengan tidak terbentuk endapan putih kekuningan pada ketiga ekstrak kasar tersebut.
Alkaloid dalam tanaman digunakan sebagai bentuk pertahanan diri tanaman terhadap pemangsa. Alkaloid sering dijumpai pada tumbuhan hijau
pada biji, daun, ranting, buah dan kulit batang. Kadar alkaloid yang dihasilkan oleh tumbuhan hijau tidak sama pada semua jaringan dan pada setiap tahap
pertumbuhan serta lokasi geografis yang mempengaruhinya Robinson 1991. Alkaloid dalam tanaman tidak dalam keadaan bebas akan tetapi berikatan
dengan garam dan asam-asam organik terutama asam maleat, oralat, suksinat dan taurat. Struktur alkaloid memiliki elemen N dan elemen tanpa N dalam
molekulnya. Elemen N terdiri atas monoterpena asiklik dan guanidine komposisi pembentuk asam amino esensial arginina. Eleman tanpa N terdiri
dari senyawa inti C
5
dan senyawa aromatik tipe fenilpropana. Senyawa fenil propana akan menurunkan metabolit sekunder dengan memperpendek rantai
sampingnya. Senyawa aromatik dengan rantai samping C
2
relatif jarang ditemukan, tetapi sering ditemukan dalam bentuk C
6
-C
2
pada alkaloid yang disebut fenil asetaldehida. Fenil asetatldehida bebas disebabkan oleh
dekarboksilasi dari asam alfa ketokarbon yang bersangkutan dan juga dilepas oleh oksidatif amoniak dari amin yang bersangkutan feniletilamin. Reaksi ini
merupakan reaksi pembentukan senyawa alkaloid awal Sirait 2007. Adanya gugus N dalam struktur alkaloid menyebabkan senyawa alkaloid
memiliki potensi sebagai antioksidan. Alkaloid pada ekstrak buah bakau diduga memiliki sifat antioksidan yang cukup kuat, sama seperti jenis alkaloid yang
ditemukan oleh Cheng et al. 2005 pada tanaman Sinomenium acutum, tanaman yang digunakan dalam pengobatan tradisional Cina. Ekstrak ethanol dari tanaman
ini dimurnikan dengan kromatografi silika gel. Ekstrak tanaman tersebut menunjukkan hasil positif saat diberikan pereaksi Dragendorf sama dengan
ekstrak metanol dalam penelitian ini yang menunjukkan nilai positif saat diberikan pereaksi Dragendorf.
2 Steroidtriterpenoid
Secara umum senyawa steroid banyak terdapat dalam tumbuhan dan berasal dari senyawa yang sama yaitu molekul isoprene. Steroid atau triterpenoid
pada tumbuhan berbiji umumnya dalam bentuk triterpenoid nonglikosida dan pada tumbuhan primitif dalam bentuk triterpenoid pentasiklik Robinson 1991.
Hasil pengujian fitokimia diketahui bahwa ketiga ekstrak kasar positif mengandung senyawa steroid atau triterpenoid. Hasil ini dibuktikan dengan
berubahnya warna merah dari ketiga ekstrak kasar menjadi berwarna hijau biru. Senyawa turunan dari triterpenoid umumnya banyak ditemukan dalam
daun dan buah yang digunakan sebagai pelindung terhadap serangga dan serangan mikroba. Senyawa ini juga terdapat dalam damar, kulit batang dan getah. Secara
umum struktur steroid mempunyai struktur siklik dan mempunyai gugus hidroksil dan karbonil. Adanya gugus tersebut menyebabkan steroid mudah mengalami
siklisasi dan oksidasi pada sintesis akhir. Oksidasi berkaitan dengan adanya aktivitas radikal bebas yang menyebabkan terjadinya oksidasi, seperti halnya
turunan terpenoid yaitu alfa-karotena dan kriptoxantin yang sangat mudah teroksidasi Harborne 1984.
3 Flavonoid
Flavonoid terdapat pada seluruh bagian tanaman termasuk pada buah, tepung sari, dan akar. Flavonoid berperan terhadap warna dalam organ tumbuhan,
misalnya bunga, buah, dan daun. Flavonoid diketahui merupakan senyawa golongan polifenol yang dikelompokan menjadi 9 kelas yaitu, antosianin,
proantosianin, flavonol, flavon, glikoflavon, biflavonil, chlacone, dan aurone, isoflavon dan flavonon. Pada tumbuhan flavonoid berguna untuk menarik
serangga dan binatang lain untuk membantu proses penyerbukan dan penyebaran biji Sirait 2007. Hasil dari pengujian flavonoid menghasilkan nilai positif pada
ekstrak kasar metanol dan etil asetat yang ditunjukkan dengan terbentuknya warna kuning pada bagian amil alkohol dan negatif untuk ekstrak kasar n-heksana.
Senyawa flavonoid diketahui memiliki sistem aromatik yang terkonjugasi sehingga menunjukkan pita serapan kuat pada daerah spektrum UV dan spektrum
sinar tampak. Flavonoid terdapat dalam semua tumbuhan dan berikatan dengan gula membentuk glikosida dan aglikon flavonoid. Turunan flavonoid yaitu
kursetin memiliki sebuah gugus hidroksil pada posisi 8 menghasilkan gosipetin. Adanya gugus hidroksil dalam senyawa flavonoid menyebabkan mudah berikatan
dengan radikal hidroksi dan superoksida. Flavonoid diketahui dapat digunakan sebagai penampung atau mencegah reaksi oksidasi enzimatis maupun oksidasi
non-enzimatis hal ini berkaitan dengan aktivitas antioksidan yang tinggi pada senyawa flavonoid. Hal ini diperkuat oleh pernyataan Atta-au-rahman et al.
2001 yang menyatakan bahwa senyawa yang berpotensi memiliki antioksidan umumnya adalah senyawa flavonoid, alkaloid dan fenolat yang merupakan
senyawa-senyawa polar. Bernardi et al. 2007 menyatakan bahwa tanaman Hypercum ternum yang menunjukkan komponen flavonoid memiliki aktivitas
antioksidan. 4
Fenol hidrokuinon Komponen fenolat memiliki struktur aromatik yang berikatan dengan satu
atau lebih gugus hidroksil. Umumnya komponen fenolat larut dalam air polar dan banyak terdapat dalam vakuola sel tumbuhan Harborne 1984. Hasil uji
fitokima ekstrak kasar metanol dan etil asetat menunjukkan nilai positif yang ditandai dengan terbentuknya warna hijau atau biru. Pada sampel n-heksana tidak
mengandung senyawa fenol hidrokuinon. Hasil penelitian Yim et al. 2009 menyatakan bahwa fenol pada lima spesies jamur di Malaysia yang diekstrak
dengan pelarut ethanol lebih tinggi daripada yang diekstrak dengan pelarut metanol dan aseton. Adanya gugus hidroksil pada cincin aromatiknya
menyebabkan senyawa ini sangat peka terhadap oksidasi enzim. Enzim yang berperan dalam proses oksidasi fenolik adalah enzim fenolase yang secara umum
banyak terdapat dalam tumbuhan. Senyawa fenolik erat kaitannya dengan aktivitas antioksidan pada suatu bahan tertentu. Hal ini diperkuat oleh penelitian
Kiessoun et al. 2010 pada tanaman Malvaceae spesies Cienfuegosia digitata dan Sida alba yang mengandung komponen polifenol, anti inflamasi, dan aktivitas
antioksidan yang tinggi. Chen dan Blumberg 2007 menyatakan bahwa mengkonsumsi senyawa fenol dipercaya dapat mengurangi resiko beberapa
penyakit kronis karena senyawa ini bersifat sebagai antioksidan, anti inflamasi, detoksifikasi dan antikolesterol.
5 Tanin
Tanin merupakan substansi yang tersebar luas pada daun, buah, batang dan kulit kayu. Senyawa tanin pada buah yang belum matang berada dalam bentuk
oksidasi tanin yang digunakan sebagai energi untuk proses metabolisme. Artati et al. 2007 menyatakan bahwa tanin merupakan senyawa fenolik yang
terdiri atas bermacam-macam kelompok oligomer dan polimer. Pengujian fitokimia ekstrak kasar metanol dan etil asetat positif
mengandung senyawa tanin yang ditandai dengan terbentuknya warna hijau kehitaman setelah ditambah larutan FeCl
3
. Ekstrak kasar n-heksana tidak mengandung senyawa tanin yang ditandai dengan tidak terbentuknya warna hijau
kehitaman setelah ditambahkan larutan FeCl
3
. Umumnya komponen utama senyawa tanin adalah fenolik dalam bentuk
polimerik fenol yang banyak terdapat pada teh dan tanaman mangrove. Senyawa ini akan memberi efek rasa sepat karena kemampuan tanin dalam menyambung
silang protein yang rusak. Tanin terdiri dari dua macam yaitu tanin terkondensasi atau flavon yang dibentuk dari kondensasi katekin tunggal yang membentuk
senyawa dimer dan kemudian senyawa oligomer yang lebih tinggi. Jenis tanin yang lain adalah tanin terhidrolisis yang terdiri dari depsida galoiglukosa.
Senyawa tanin yang sering dijumpai pada teh hijau adalah catechins, sedangkan pada teh hitam senyawa catechins diubah menjadi theaflavin dan thearubigins.
Hal ini sesuai dengan pernyataan Das et al. 2008 bahwa senyawa yang terkandung di dalam teh hitam, theaflavin merupakan senyawa yang
mendapatkan perhatian lebih karena fungsinya sebagai antioksidan, antipatogen, dan antikanker.
4.3 Aktivitas Antioksidan
