4 Kloroform dan ether: digunakan untuk mengekstraksi komponen bioaktif
yang larut lemak. Pemilihan metode ekstraksi yang digunakan akan mempengaruhi jumlah
rendemen yang didapatkan dari suatu bahan. Metode ekstraksi menurut Harborne 1984 meliputi:
1 Maserasi: metode ekstraksi dengan cara merendam sampel dalam pelarut
dengan atau tanpa pengadukan. 2
Diakolasi: metode ekstraksi dengan penambahan tekanan udara. 3
Dekoksi rebus: metode paling sederhana dan mudah dilakukan menggunakan bahan yang larut air dan stabil terhadap panas.
4 Ekstraksi lengkap: metode ekstraksi yang melibatkan ekstraksi berturut-turut
menggunakan pelarut non polar, semi polar dan pelarut polar. 5
Arus balik: metode ekstraksi secara berkesinambungan dimana sampel dan pelarut saling bertemu melalui gerakan aliran yang berlawanan.
6 Sonikasi: metode ekstraksi menggunakan gelombang suara atau getaran
dengan frekuensi antara 20 KHz-2000 KHz.
2.5 Uji Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
Aktivitas antioksidan pada suatu bahan dapat diketahui dengan berbagai cara antara lain, metode Nitro Blue Tetrozolium NBT, metode tiosianat, metode
Carotene bleaching dan metode 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil DPPH. Metode pengujian antioksidan dengan menggunakan DPPH dipilih karena mudah
dilakukan, metodenya sederhana, menggunakan sampel sedikit serta dapat digunakan untuk memperkirakan efisiensi kinerja dari substansi yang berperan
sebagai antioksidan. Kristal DPPH yang digunakan dalam proses pengujian aktivitas antioksidan umumnya dilarutkan dengan menggunakan pelarut etanol.
Menurut Tiwari et al. 2011 pelarut etanol cenderung banyak digunakan karena lebih murah dan tidak toksik dibanding pelarut polar lainnya.
Senyawa 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil DPPH merupakan senyawa radikal bebas yang stabil dalam suhu kamar dan sering digunakan untuk
mengevaluasi aktivitas antioksidan beberapa ekstrak bahan alam. Senyawa radikal DPPH akan membentuk interaksi dengan antioksidan dari bahan yang
digunakan. Molyneux 2004 mengatakan bahwa senyawa DPPH dapat bereaksi
dengan atom hidrogen yang berasal dari suatu antioksidan membentuk senyawa dihenylpicrylhydrazine yang berwarna kuning pucat. Struktur kimia DPPH dalam
bentuk radikal bebas 1 dan bentuk kompleks non radikal 2 dapat dilihat pada Gambar 10.
Gambar 10 Struktur kimia radikal bebas 1 dan bentuk non radikal 2 DPPH Molyneux 2004.
Hasil yang dicapai jika semua elektron radikal bebas DPPH menjadi berpasangan dan menyebabkan berubahnya warna ungu menjadi kuning dapat
diukur secara stokiometri sesuai dengan jumlah elektron atau atom hidogen yang ditangkap oleh molekul DPPH akibat adanya zat antioksidan. Suratmo 2009
mengatakan bahwa prinsip dari uji aktivitas antioksidan dengan DPPH baik secara transfer elektron atau radikal hidrogen akan menetralkan karakter radikal bebas
dari DPPH tersebut. Mekanisme reaksi antioksidan dengan DPPH dapat dilihat pada Gambar 11.
Gambar 11 Mekanisme reaksi antioksidan dengan DPPH Suratmo 2009.
Mekanisme reaksi antara antioksidan dengan DPPH dibagi menjadi tiga tahap yang dicontohkan dengan menggunakan senyawa manofenolat. Tahap
pertama adalah delokalisasi elektron pada gugus yang tersubtitusi dari senyawa tersebut. Adanya atom hidrogen akan menyebabkan DPPH menjadi tereduksi.
Langkah berikutnya adalah dimerisasi antara dua radikal fenoksil yang mentransfer radikal hidrogen yang akan bereaksi lagi dengan radikal DPPH.
Tahap yang terakhir adalah pembentukan komplek antara radikal aril dengan DPPH. Pembentukan dimer maupun komplek antara zat antioksidan dengan
DPPH tergantung pada kesetabilan dan potensial reaksi dari struktur molekulnya Brand-Williams 1955 dalam Suratmo 2009.
2.6 Mekanisme Oksidasi Lemak
