24
DEPARTEMEN BIOLOGI FMIPA USU
3.3.2. Penghitungan Sel Bakteri
Di laboratorium semua sampel kteri di simpan dalam lemari es ± 4
°
C. Dari setiap sampel dibuat pengenceran berseri dalam larutan garam fisiologis 0,9 ,
kemudian 0.1 ml larutan disebar pada media Plate Count Agar PCA untuk menghitung sel bakteri, kemudian media differensial dan selektif untuk mendapatkan bakteri patogen
oportunistik. Isolasi E. coli dengan menyebar 0,1 ml kultur pada media Eosin Metilen Blue EMB, Salmonella pada Salmonella-Shiegela agar, Staphyloccoccus aureus pada
media Manitol Salt Agar. Konsentrasi sel pada masing-masing media selektif dihitung dalam CFUml
.
Isolat dimurnikan melalui penggoresan pada media SWC, kemudian koloni tunggal digores pada media SWC miring dan disimpan dalam lemari es sampai
digunakan. Alur kerja penghitungan sel bakteri dapat dilihat pada Lampiran 3 pada halaman 51.
3.3.3. Pembentukan dan Penghitungan Sel Biofilm
Lempeng stainless stell SS dipotong seluas 1 cm
2
, dicuci dengan deterjen tergazyme pada bak sonikator kemudian dibilas dengan akuades, disterilkan dengan
autoklaf selama 15 menit, tekanan 1 atm, suhu 121
°
C. Lempeng ini akan digunakan untuk substrat pelekatan biofilm. Masing-masing isolat murni bakteri uji ditumbuhkan pada 100
ml media SWC dengan konsentrasi sel 10
8
CFUml, dalam labu Erlenmeyer 250 ml, setelah itu 6 lempeng SS dimasukkan ke masing-masing media pengkulturan tersebut
kemudian digoyang pada kecepatan 120 rpm water bath shaker pada suhu ruang 28°C. Pembentukan biofilm dilihat pada periode waktu 1, 3, dan 6 hari untuk melihat
perkembangan sel. Lempeng diangkat dari kultur, dibilas dengan larutan NaCl 0,9 dimasukkan ke 9 ml buffer fosfat yang ditambah dengan 1 gram manik-manik kaca glass
bead kemudian divortek untuk melepas sel biofilm. Sebanyak 0,1 ml kultur dalam NaCl fisiologis 0,9 sebagai pengencer kemudian disebar pada PCA, diinkubasi selama 24 jam
pada suhu ruang kemudian dilakukan penghitungan. Ulangan penghitungan dibuat sebanyak 3 kali Jamilah et al, 2004. Alur kerja pembentukan dan penghitungan sel
biofilm dapat dilihat pada Lampiran 4 pada halaman 53.
3.3.4. Kurva Pertumbuhan Bacillus sp.
Kategori