84
Lampiran 1 Skema Kerja
1. Pembuatan Media Yeast Pepton Dektrosa YPD Padat
2 g glukosa, 1 g yeast extract, 2 g agarosa dan 2 g bacto pepton ditimbang Bacto pepton, yeast extract, agarosa dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mL
Ditambah dengan akuades hingga volume 70 mL
Glukosa dimasukkan ke dalam erlenmeyer lain hingga volume 30 mL Masing-masing disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121
C, selama10 menit dengan tekanan 1 atm
Larutan dicampur dalam Laminar Air Flow
Media dituangkan pada cawan petri dan ditunggu sekitar 10 menit hingga memadat Media YPD padat siap digunakan untuk menumbuhkan ragi
85
2. Pembuatan Media Yeast Pepton Dektrosa YPD Cair
3. Peremajaan Sel Ragi Saccharomyces cerevisiae
YPD padat pada cawan petri disiapkan
Sel ragi alami S.cerevisiae diambil dengan kawat ose steril Sel digesekkan dengan media YPD padat
Inkubasi pada suhu kamar selama 2 hari Sel stok disimpan pada lemari pendingin dengan suhu 4
C 2 g glukosa, 1 g yeast extract, 2 g agarosa dan 2 g bacto pepton ditimbang
Bacto pepton, yeast extract, agarosa dimasukkan ke dalam erlenmeyer 250 mL Ditambah dengan akuades hingga volume 70 mL
Glukosa dimasukkan ke dalam erlenmeyer lain hingga volume 30 mL Masing-masing disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121
C, selama10 menit dengan tekanan 1 atm
Larutan dicampur dalam Laminar Air Flow
Media YPD cair siap digunakan.
86
4. Pembuatan Kultur Awal Ragi Starter
5. Pengamatan Profil Pertumbuhan Ragi S. cerevisiae
YPD cair dimasukkan ke dalam erlenmeyer Disterilkan pada suhu 121
C, selama10 menit dengan tekanan 1 atm Sel ragi pada YPD padat diambil dan dimasukkan ke dalam 10 mL YPD cair sebagai starter
Inkubasi dengan kecepatan 125 rpm pada suhu kamar selama 12 jam
2 buah erlenmeyer 250 mL masing-masing diisi dengan 25mL media YPD cair Disterilkan
Sebanyak 0,5 mL starter ditambahkan pada masing-masing media cair Inkubasi dengan kecepatan 125 rpm pada suhu kamar selama 48 jam
Kultur diambil 2 mL, diukur OD
600
pada panjang 600 nm dengan selang waktu 0, 2, 6, 8, 16, 24 dan 48 jam
Grafik waktu kontak vs OD
600
87
6. Pembuatan Larutan Induk Pb
