Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Kitolod Isolasi Senyawa Alkaloida dari Ekstrak Metanol dengan Metode Pengocokan Asam Basa

36

3.6.6 Pemeriksaan steroidatriterpenoida

Sebanyak 1 gram serbuk simplisia ditimbang, lalu dimaserasi dengan 20 ml n-heksana selama 2 jam, lalu disaring. Filtrat diuapkan dalam cawan penguap, pada sisa ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat, apabila timbul warna ungu atau merah kemudian berubah menjadi hijau biru menunjukkan adanya steroidtriterpenoid Harborne, 1987.

3.7 Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Kitolod

Pembuatan ekstrak daun kitolod dilakukan dengan cara perkolasi menggunakan pelarut metanol. Cara kerja: Sebanyak 330 gram serbuk simplisia daun kitolod dibasahi dengan penyari, ditutup dan dibiarkan selama 3 jam, kemudian dimasukkan ke dalam alat perkolator. Larutan penyari metanol dituang secukupnya sampai semua simplisia terendam dan terdapat selapis cairan penyari di atasnya, mulut tabung perkolator ditutup dengan aluminium foil dan dibiarkan selama 24 jam, kemudian kran dibuka dan dibiarkan tetesan ekstrak mengalir dengan kecepatan 20 tetes per menit, perkolasi dihentikan pada saat beberapa tetes perkolat tidak bereaksi ketika ditambahkan pereaksi Mayer, Bouchardat dan Dragendorff. Pelarut yang digunakan sebanyak 6 liter. Perkolat yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan alat penguap vakum putar rotary evaporator pada temperatur yang tidak lebih dari 50 o C sampai diperoleh ekstrak kental daun kitolod Depkes RI, 1995. Bagan pembuatan ekstrak metanol dapat dilihat pada Lampiran 3 halaman 56 .

3.8 Isolasi Senyawa Alkaloida dari Ekstrak Metanol dengan Metode Pengocokan Asam Basa

Senyawa alkaloida yang terdapat di dalam ekstrak metanol diisolasi dengan 37 menggunakan metode pengocokan asam basa sampai diperoleh ekstrak alkaloida kasar. Cara kerja: Sebanyak 26,50 gram ekstrak kental ditambahkan HCI 2N hingga pH 2 - 3, dikocok lalu disaring dan filtrat dibasakan dengan NH 4 OH p hingga pH 9 - 10. Dikocok dengan 100 ml kloroform dalam corong pisah, lapisan air dan lapisan kloroform dipisahkan. Lapisan kloroform ditambahkan HCI 2N sama banyak dalam corong pisah, dikocok. Lapisan kloroform dan lapisan asam dipisahkan. Lapisan asam dibasakan dengan NH 4 OH p hingga pH 9 - 10. Dikocok dengan 100 ml kloroform dalam corong pisah, lapisan air dan lapisan kloroform dipisahkan. Lapisan kloroform ditambahkan HCI 2N sama banyak dalam corong pisah, dikocok. Lapisan kloroform dan lapisan asam. dipisahkan. Lapisan asam dibasakan dengan NH 4 OH p hingga pH 9 - 10. Dikocok dengan 100 ml kloroform dalam corong pisah. Lapisan air dan lapisan kloroform dipisahkan. Lapisan kloroform yang diperoleh dikumpulkan kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator pada temperatur tidak lebih dari 40 o C hasilnya diperoleh ekstrak kasar alkaloida daun kitolod Fergusson, 1956. Bagan isolasi senyawa alkaloida dari ekstrak metanol dengan metode pengocokan asam basa dapat dilihat pada Lampiran 4 halaman 57.

3.9 Analisis Ekstrak Alkaloida Kasar Secara KLT