−
Memiliki hasil pemeriksaan histopatologi dari laboratorium PA RSUP H.
Adam Malik yang membuktikan suatu tumor ovarium kecuali endometriosis
−
Menjalani operasi di RSUP H. Adam Malik pada rentang waktu 1 januari – 31 desember 2012
4.5.2 Kriteria Eksklusi
−
Blok parafin tidak tersedia
−
Pemeriksaan imunohistokimia gagal
4.6 Prosedur Pemeriksaan Imunohistokimia 4.6.1 Alat Penelitian
Alat-alat yang diperlukan untuk penelitian ini adalah: mikrotom, waterbath, hot plate, freezer,
inkubator, staining jar, rak object glass, rak inkubasi, pensil Diamond,
pipet mikro, kertas saring, pengukur waktu, gelas erlenmenyer, gelas beker, tabung sentrifuge 15ml, microwave, spin master, thermolyte stirrer, coated
object glass , kaca penutup, entelan dan mikroskop cahaya.
4.6.2 Bahan Penelitian − Blok parafin yang telah didiagnosa dengan pulasan Hematoksilin Eosin
− Pulasan imunohistokimia menggunakan metode Labelled Streptavidin Biotin
Immunoperoxidase Complex. Antibodi primer yang digunakan adalah
Monoclonal Mouse Anti-Human Vascular Endothelial Growth Factor Clone VG1
Dako, Denmark, dengan pengenceran 1: 50.
− Larutan kromogen DAB yang digunakan adalah liquid DAB substrate kit NCL-L- DAB
Novocastra, Inggris: 3, 3’-diaminobenzidine. − Larutan PBS phosphate buffered saline pH 7,2
− Larutan buffer sitrat sodium citrate buffer pH 9,0
4.6.3 Cara kerja
− Blok parafin disimpan dalam lemari pendingin pada suhu -5
− Preparat yang siap dipulas dimasukkan dalam inkubator selama 18-20 jam dengan suhu 38º C
C, selanjutnya dipotong tipis menggunakan mikrotom dengan tebal 4µm dan ditempelkan
pada coated object glass.
− Deparafinisasi dengan mencelupkan preparat kedalam cairan xylol I, II, III masing-masing selama 5 menit
− Rehidrasi dengan cara mencelupkan secara berurutan dalam etanol 98 sebanyak 3 kali, masing-masing selama 5 menit, alkohol 90, 80 dan 70,
masing-masing selama 5 menit. − Bilas dengan air mengalir selama 5 menit
− Masukkan kedalam H
2
O
2
− Bilas dengan akuades selama 5 menit 0,3 dalam metanol dingin selama 15 menit
− Masukkan kedalam larutan buffer sitrat yang telah dipanaskan sebelumnya dalam microwave selama 5 menit
− Dinginkan selama 20 menit dalam suhu ruangan − Bilas dengan akuades selama 5 menit dan keringkan air disekitar potongan
jaringan − Tandai disekeliling potongan jaringan yang ingin dipulas dengan pap pen
− Bilas dalam larutan PBS selama 5 menit − Bersihkan dari sisa cairan pencuci dan teteskan blocking serum pada sediaan
yang telah ditandai dengan pap pen selama 5 menit − Bilas dalam larutan PBS selama 5 menit
− Bersihkan dari sisa pencuci dan teteskan antibodi primer VEGF dengan
pengenceran 1 : 50, inkubasi dalam tempat tertutup dengan suhu ruangan selama 60 menit
− Bilas dalam larutan PBS sebanyak dua kali, masing-masing selama 5 menit − Bersihkan dari sisa cairan pencuci dan teteskan dengan antibodi sekunder,
Biotinylated Universal, inkubasi dalam tempat tertutup pada suhu ruangan
selama 10 menit − Bilas dalam larutan PBS sebanyak 2 kali, masing-masing selama 5 menit
