UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
pada media NA. Media diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37
o
C selama 24 jam.
3.3.7 Pembuatan Stock Culture dan Working Culture
Pembuatan Stock Culture dan Working Culture dilakukan dengan menginokulasi koloni tunggal hasil pemurnian ke dalam 2 tabung reaksi. Koloni
yang membentuk satu koloni dan tidak menempel dengan koloni lain dipisahkan dari isolat majemuk dengan menggunakan ose dan ditanam pada media NA
miring. Media diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37
o
C selama 24 jam. Stock disimpan pada suhu 4
o
C dalam lemari pendingin.
3.3.8 Identifikasi Bakteri Endofit
a. Makroskopis
Pengamatan makroskopis dilakukan dengan menggunakan metode streak plate. Identifikasi secara visual meliputi pengamatan bentuk koloni,
bentuk tepi koloni dan warna koloni. b. Mikroskopis
i. Pewarnaan Gram : Identifikasi secara mikroskopis dilakukan dengan
mengamati morfologinya dengan pewarnaan Gram. Isolat pada agar miring diambil sebanyak satu ose diletakkan di atas kaca objek yang
telah ditetesi dengan NaCl fisiologis. Sebarkan bakteri pada kaca objek dengan menggunakan ose bulat kemudian dilewatkan di atas api
difiksasi. Larutan gentian violet diteteskan diatas preparat yang telah disiapkan
kemudian dibiarkan selama 1 menit. Preparat dicuci dengan akuades. Kemudian cairan lugol diteteskan pada preparat dan dibiarkan selama
1 menit. Preparat dicuci dengan akuades, Preparat diteteskan dengan alkohol 96, digoyang-goyangkan selama 30 detik. Preparat dicuci
dengan akuades. Terakhir, preparat diteteskan dengan safranin dan dibiarkan selama 1 menit. Preparat dicuci dengan akuades dan
dikeringkan dengan menggunakan tisue. Preparat ditetesi dengan minyak imersi dan diamati di bawah mikroskop pada perbesaran
1000x.
UIN Syarif Hidayatullah Jakarta
ii. Uji Katalase : Pengujian aktivitas enzim katalase dilakukan dengan
cara menginokulasikan satu ose koloni bakteri pada kaca objek, kemudian ditetesi dengan H
2
O
2
3. Timbulnya gelembung gas menunjukan reaksi positif terhadap uji katalase.
3.3.9 Identifikasi Bakteri Uji
