Homogenisasi sampel untuk uji AKK Pengenceran sampel untuk uji AKK Pengenceran sampel untuk uji ALT Uji Angka Kapang Khamir

E. Tata Cara Penelitian

1. Pemilihan dan Pengambilan Sampel

Sampel jamu yang dipilih diambil dari jamu temulawak yang dijual oleh penjual jamu gendong di Pasar Tradisional Klaten. Sampel diambil dari 3 pedagang jamu gendong di pasar tersebut. Masing-masing pedagang diambil 1 sampel dengan satu kali pengambilan sampel dan dilakukan replikasi sebanyak 3 kali. 2. Penanganan Wadah Kemasan Penyiapan Sampel Kemasan jamu yang akan dibuka dibersihkan dengan kapas beralkohol 70 kemudian dibuka secara aseptis didekat nyala api spiritus.

3. Tahap Pra-Pengkayaan

a. Homogenisasi sampel untuk uji AKK

10 ml jamu temulawak diambil dan dimasukkan kedalam labu ukur 100 ml kemudian ditambah larutan pengencer Pepton Dilution Fluid PDF hingga tanda batas sehingga diperoleh pengenceran 10 −1 . b. Homogenisasi sampel untuk uji ALT Secara aseptis diambil sebanyak 25 ml sampel kedalam labu ukur 250 ml, lalu ditambahkan 225 ml BPW dan homogenkan hingga diperoleh pengenceran 10 −1 .

c. Pengenceran sampel untuk uji AKK

Tiga buah labu ukur 10 ml disiapkan, masing-masing telah diisi dengan 9 ml PDF. Dipipet 1 ml sampel pengenceran 10 −1 dan dimasukkan kedalam tabung pertama yang telah berisi PDF hingga diperoleh pengenceran 10 −2 lalu dikocok homogen dengan vortex. Dibuat pengenceran berikutnya sampai 10 −4 .

d. Pengenceran sampel untuk uji ALT

5 buah labu ukur 10 ml disiapkan masing-masing telah diisi dengan 9 ml pengencer BPW. Dipipet 1 ml pengenceran 10 −1 dari hasil homogenisasi pada penyiapan sampel dan dimasukkan ke dalam tabung pertama yang telah diisi 9 ml BPW hingga diperoleh pengenceran 10 −2 dan dihomogenkan dengan menggunakan vortex. Kemudian dibuat pengenceran selanjutnya hingga 10 −6 . 4. Uji Angka Kapang Khamir a. Pembuatan larutan kloramfenikol Sebanyak 1 gram kloramfenikol dilarutkan ke dalam 100 ml aquadest steril. b. Pembuatan media Potato Dextrose Agar PDA Sebanyak 39 gram serbuk PDA disuspensikan dalam 1000 ml aquadest, kemudian dilarutkan dengan pemanasan dan diaduk hingga merata, dimasukkan dalam wadah yang sesuai. Kemudian ditambahkan kloramfenikol 100 gramL media dicampur hingga merata. Sterilisasi dengan autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 ˚C. Kemudian dituang ke dalam cawan petri atau tabung reaksi steril dan dibiarkan memadat.

c. Uji Angka Kapang Khamir

Dari masing-masing pengenceran dipipet 1 ml ke dalam cawan petri steril secara duplo. Media PDA yang telah dicairkan suhu 45± 1 ℃ sebanyak 20 ml dituangkan ke dalam cawan petri yang sebelumnya telah ditambah dengan 1 ml larutan kloramfenikol dan digoyangkan sehingga campuran tersebut merata. Setelah agar membeku cawan petri dibalik dan diinkubasikan pada suhu 25 ℃ atau pada suhu kamar selama 5 hari. Pengamatan dilakukan setiap hari sampai hari ke-5. Koloni kapang dan khamir dihitung setelah 5 hari. Uji sterilitas media dilakukan dengan menuangkan media PDA dalam cawan petri dan dibiarkan memadat. Uji sterilitas pengencer dilakukan dengan cara menuangkan media PDA dan 1 ml pengencer PDF lalu dibiarkan memadat.

5. Uji Angka Lempeng Total