Berdasarkan hasil optimasi tersebut dipilih formula multiemulsi dengan persen pemisahan fase terendah.
4. Evaluasi multiemulsi AMA
Evaluasi terhadap formula optimum multiemulsi AMA ekstrak rosella antara lain:
a. Pengamatan organoleptis dan pH Multiemulsi AMA diamati aspek penampilan, rasa, dan bau
pada hari pertama dan hari ke-28 sebelum dilakukan pengujian aktivitas antioksidan. Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan indikator
pH universal dengan cara memasukkan pH strips ke dalam multiemulsi AMA dan dibandingkan warnanya dengan standar Direktorat Jendral
Pengawasan Obat dan Makanan, 1975. b. Ukuran diameter partikel rata-rata
Diameter partikel rata-rata multiemulsi AMA diukur dengan menggunakan mikroskop cahaya yang dilengkapi dengan lensa okuler,
mikrometer yang telah dikalibrasi dan seperangkat kamera pada hari pertama dan hari ke-28 sebelum dilakukan pengujian aktivitas
antioksidan. Multiemulsi AMA diletakan pada kaca objek dan ditutup dengan gelas penutup. Kemudian diamati dengan menggunakan
mikroskop pada perbesaran 40 kali. Multiemulsi AMA yang diamati, difoto, dan diukur diameter partikelnya menggunakan aplikasi ImageJ
Martin, Swarbrick, dan Cammarata, 1993.
c. Uji tipe fase emulsi Uji tipe fase emulsi dilakukan setelah dilakukan pembuatan
emulsi primer dan multiemulsi AMA dengan formula optimum. Emulsi primer dan multiemulsi AMA dilarutkan dalam aquadest dan parafin
cair, kemudian diamati kelarutan masing-masing emulsi dalam kedua fase tersebut Billany, 2001.
d. Uji mekanik Uji
mekanik dilakukan
setelah dilakukan
pembuatan multiemulsi AMA dengan formula optimum. Multiemulsi AMA
dimasukkan ke dalam tabung sentrifugasi dan dilakukan sentrifugasi pada kecepatan
5000 rpm selama 20 menit. Hasil sentrifugasi diamati
dengan melihat ada atau tidaknya pemisahan fase Mahmood, Akhtar, dan Manickam, 2014.
e. Uji volume pemisahan Uji volume pemisahan dilakukan setelah dilakukan pembuatan
multiemulsi AMA dengan formula optimum. Multiemulsi AMA dimasukkan dalam tabung reaksi berskala dan diamati secara berkala
selama rentang waktu pengujian apabila terjadi perubahan tinggi akibat pemisahan creaming atau pengendapan. Tabung reaksi berskala
ditempatkan pada suhu dingin yaitu -4
o
C, terlindung dari cahaya, dan disertai penjenuhan dengan gas nitrogen Billany, 2001.
5. Penentuan aktivitas antioksidan multiemulsi AMA ekstrak rosella