52
Selama proses kenaikan suhu hingga 37°C, aktivitas semakin meningkat, karena pada suhu tinggi reaksi akan berlangsung lebih cepat. Penurunan aktivitas
enzim tripsin terjadi pada suhu 39°C. Aktivitas enzim menjadi berkurang dan kecepatan reaksinya pun menurun. Pada suhu 39
o
C enzim mengalami denaturasi, yang ditunjukkan dengan terbentuknya endapan selama proses inkubasi
meningkat menjadi 39
o
C.
c. Penentuan Waktu Inkubasi Optimum
Waktu inkubasi adalah waktu yang dibutuhkan enzim tripsin untuk memecah protein kasein menjadi asam amino. Semakin lama waktu inkubasi
pada suhu inkubasi yang sesuai, semakin efektif kinerja suatu enzim. Pada waktu inkubasi optimum, enzim tripsin bekerja secara maksimal, sehingga
menghasilkan lebih banyak produk. Oleh karena itu, waktu inkubasi sangat berpengaruh terhadap penentuan aktivitas enzim tripsin.
Dalam penentuan aktivitas enzim tripsin digunakan pH dan suhu optimum, yaitu pH 8, dan suhu 37°C. Variasi waktu inkubasi yang digunakan adalah 10
menit, 15 menit, 20 menit, 25 menit, dan 30 menit. Kurva hubungan antara waktu inkubasi dengan aktivitas enzim tripsin disajikan pada Gambar 17.
Gambar 17. Kurva Hubungan antara Waktu Inkubasi dengan Aktivitas Enzim
10; 0,0017 15; 0,0029
20; 0,0045 25; 0,0024
30; 0,0017 0,001
0,002 0,003
0,004 0,005
10 20
30 40
A kt
iv it
as m g
m L
pe r
m nt
Waktu Inkubasi menit
53
Berdasarkan Gambar 17, aktivitas enzim tripsin terbesar berada pada waktu inkubasi selama 20 menit, yang berarti 20 menit sebagai waktu inkubasi
optimum enzim tripsin dengan aktivitas sebesar 0,0045 mgmL per menit. Aktivitas enzim tripsin meningkat dari waktu inkubasi 10 menit sampai 20 menit.
Hal ini menunjukkan bahwa pada waktu inkubasi 10 menit dan 15 menit proses hidrolisis protein kasein belum maksimal dan mencapai produk yang maksimal
pada waktu inkubasi optimum 20 menit. Pada waktu inkubasi di atas 20 menit, aktivitas enzim tripsin mengalami penurunan dikarenakan enzim tripsin
mengalami denaturasi. Proes denaturasi ditandai dengan terjadinya penggumpalan atau terbentuknya endapan dan terjadi penurunan aktivitas pada waktu inkubasi 25
– 30 menit. Semakin lama waktu inkubasi, akan memberikan kesempatan enzim tripsin untuk melakukan hidrolisis pada protein, sehingga akan semakin banyak
protein yang terhidrolisis menjadi asam amino dengan berat molekul yang lebih rendah dan mengakibatkan penurunan viskositas, hal inilah yang menyebabkan
enzim mengalami penggumpalan terbentuknya endapan.
d. Penentuan Konsentrasi Substrat Optimum
