41
2. Penentuan Kondisi Optimum Enzim Tripsin
a. Penentuan pH Optimum
Penentuan pH optimum enzim tripsin dilakukan pada suhu 35
o
C dan waktu inkubasi 20 menit, sebanyak tiga kali untuk setiap pH dengan hasil rerata aktivitas
enzim tripsin ditunjukkan pada Tabel 2. Tabel 2. Hasil Penentuan pH Optimum Enzim Tripsin
pH Rerata Aktivitas Enzim Tripsin
mgmL per menit
7 0,00245
8 0,00598
9 0,00365
Berdasarkan data tersebut, diperoleh hasil aktivitas enzim tripsin tertinggi pada pH 8, sehingga pH 8 ditetapkan sebagai pH optimum enzim tripsin.
Perhitungan aktivitas enzim tripsin pada penentuan pH optimum dapat dilihat pada Lampiran 8.
b. Penentuan Suhu Optimum
Penentuan suhu optimum enzim tripsin dilakukan pada pH optimum enzim tripsin yaitu pH 8, waktu inkubasi selama 20 menit dan konsentrasi substrat 10
mgmL. Variasi suhu yang digunakan untuk menentukan suhu optimum enzim tripsin, yaitu 31°C, 33°C, 35°C, 37°C, dan 39°C. Penentuan suhu optimum enzim
tripsin dilakukan sebanyak tiga kali untuk setiap suhu dengan hasil rerata aktivitas enzim tripsin ditunjukkan pada Tabel 3.
42
Tabel 3. Hasil Penentuan Suhu Optimum Enzim Tripsin
Suhu
o
C Rerata Aktivitas Enzim Tripsin
mgmL per menit
31 0,00185
33 0,00188
35 0,00283
37 0,00526
39 0,00371
Berdasarkan data tersebut, diperoleh hasil aktivitas enzim tripsin tertinggi
pada suhu 37°C, sehingga 37°C ditetapkan sebagai suhu optimum enzim tripsin. Perhitungan aktivitas enzim tripsin pada penentuan suhu optimum dapat dilihat
pada Lampiran 9.
c. Penentuan Waktu Inkubasi Optimum
Penentuan waktu inkubasi optimum enzim tripsin dilakukan pada pH dan suhu optimum enzim tripsin yang telah diperoleh pada prosedur sebelumnya pH
8 dan suhu 37
o
C dan dengan konsentrasi substrat 10 mgmL. Variasi waktu inkubasi yang digunakan untuk penentuan waktu inkubasi optimum enzim tripsin,
yaitu 10 menit, 15 menit, 20 menit, 25 menit, dan 30 menit. Waktu inkubasi enzim tripsin dihitung dari penambahan larutan enzim tripsin pada larutan substrat
kasein hingga penambahan larutan TCA 10. Penentuan waktu inkubasi optimum enzim tripsin dilakukan sebanyak tiga kali untuk setiap waktu inkubasi dengan
hasil rata-rata ditunjukkan pada Tabel 4.
43
Tabel 4. Hasil Penentuan Waktu Inkubasi Optimum Enzim Tripsin
Waktu Inkubasi menit
Rerata Aktivitas Enzim Tripsin mgmL per menit
10 0,00171
15 0,00291
20 0,00451
25 0,00248
30 0,00178
Berdasarkan data tersebut, diperoleh hasil aktivitas enzim tripsin tertinggi pada waktu inkubasi selama 20 menit, sehingga 20 menit ditetapkan sebagai
waktu inkubasi optimum enzim tripsin. Perhitungan aktivitas enzim tripsin pada penentuan waktu inkubasi optimum dapat dilihat pada Lampiran 10.
d. Penentuan Konsentrasi Substrat Optimum
Kategori