Pembuatan air laut buatan Penetasan telur artemia

9. Uji toksisitas akut dengan BST

Uji toksisitas dilakukan dengan menggunakan larva artemia yang berumur 48 jam Meyer et al., 1982. Sepuluh ekor larva artemia yang berumur 48 jam diambil, dimasukkan ke dalam flakon yang telah berisi sampel dengan konsentrasi tertentu, air laut buatan sebanyak 3 ml dan 1 tetes ragi 3mg5ml sebagai makanan yang kemudian divortek. Air laut buatan ditambahkan sampai 5 ml. Setiap pengujian selalu disertai dengan kontrol dan masing-masing konsentrasi dibuat dalam 5 kali replikasi. Flakon dijaga agar selalu mendapat penerangan. Setelah 24 jam, jumlah larva artemia yang mati dihitung untuk mengetahui nilai probit dan dianalisis untuk mengetahui harga LC 50 Meyer et al., 1982.

10. Uji KLT fraksi toksik daun tumbuhan tembelekan

Uji dengan KLT ini bertujuan untuk mengetahui profil bercak dari fraksi yang terdapat dalam fraksi daun tumbuhan tembelekan. Ekstrak kental fraksi daun tumbuhan tembelekan dilarutkan dengan etanol dan ditotolkan pada lempeng KLT. Lempeng KLT dimasukkan dalam bejana yang berisi fase gerak yang telah jenuh lalu dielusi sampai jarak rambat 15 cm, kemudian diangkat dan dikeringkan. Setelah itu elusi yang terjadi diamati dengan melihat bercak yang timbul. Pengamatan bercak dilakukan dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 365 nm serta dengan pereaksi semprot. Identifikasi triterpenoid, sistem KLT yang digunakan adalah sebagai berikut : fase diam : silika gel GF 254 MERCK fase gerak : toluen:etil asetat 85:15 vv PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI deteksi : visibel, UV 254 nm dan UV 365 nm, dan vanillin asam sulfat pemanasan 100-110 °C, 10 menit

11. Analisis hasil

Data persentase kematian larva artemia yang diperoleh dianalisis menggunakan analisis probit SPSS untuk menghitung harga LC 50 . Dalam perhitungan analisis probit secara manual, konsentrasi ditransformasikan menjadi log konsentrasi sebagai nilai x dan kematian ditransformasikan menjadi nilai probit sebagai nilai y. Setelah didapatkan persamaan garis data di atas, dicari nilai LC 50 dengan menghitung nilai x pada y=5. Setelah itu, nilai x di anti-log kan untuk mendapatkan konsentrasi dimana dapat membunuh 50 hewan uji. Jika pada kontrol ada artemia yang mati, maka persen kematian ditentukan dengan rumus Abbot : kontrol pada kematian - 100 kontrol pada kematian - perlakuan pada kematian KEMATIAN = Kumar, Prasad, and Singh, 2005 PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI