3 Flavonoid
Sejumlah sampel ditambahkan serbuk magnesium 0,10 mg dan 0,40 ml amil alkohol campuran asam klorida 37 dan etanol 95 dengan volume yang
sama dan 4 ml alkohol kemudian campuran dikocok. Warna merah, kuning, atau jingga yang terbentuk pada lapisan amil alkohol menunjukkan adanya flavonoid.
4 Saponin uji busa
Saponin dapat dideteksi dengan uji busa dalam air panas. Busa yang stabil selama 30 menit dan tidak hilang pada penambhan 1 tetes HCl 2 N menunjukkan
adanya saponin. 5
Fenol hidrokuinon pereaksi FeCl
3
Sebanyak 1 gram sampel diekstrak dengan 20 ml etanol 70 . Larutan yang dihasilkan diambil sebanyak 1 ml kemudian ditambahkan 2 tetes larutan
FeCl
3
5 .Warna hijau atau hijau biru yang terbentuk menunjukkan adanya senyawa fenol dalam bahan.
6 Uji Molisch
Sebanyak 1 ml larutan sampel diberi 2 tetes pereaksi Molisch dan 1 ml asam sulfat pekat melalui dinding tabung. Uji positif menunjukkan adanya
karbohidrat ditandai terbentuknya kompleks berwarna ungu di antara 2 lapisan cairan
7 Uji Benedict
Larutan sampel sebanyak 8 tetes dimasukkan ke dalam 5 ml pereaksi Benedict. Campuran dikocok dan dididihkan selama 5 menit. Warna hijau,
kuning, atau endapan merah bata yang terbentuk menunjukkan adanya gula pereduksi.
3.4.6 Analisis proksimat
Analisis proksimat merupakan suatu analisis yang dilakukan untuk memprediksi komposisi kimia suatu bahan, termasuk di dalamnya analisis kadar
air, lemak, protein, dan abu.
1 Analisis kadar air AOAC 2005
Pengukuran kadar air dilakukan dengan menggunakan oven. Prosedur analisis kadar air dimulai dengan pengeringan cawan porselin dalam oven selama
1 jam. Cawan kemudian didinginkan dalam desikator selama 20 menit,
selanjutnya ditimbang beratnya sampai diperoleh berat cawan yang konstan XI. Sampel ditimbang sebanyak 2-3 g A, kemudian dimasukkan ke dalam cawan.
Cawan yang berisi sampel diletakkan dalam oven selama 4-6 jam dengan suhu 105°C. Cawan tersebut dipindahkan dalam desikator dan setelah dingin ditimbang
kembali sampai diperoleh berat yang konstan X
2
. Kadar air dihitung dengan menggunakan rumus :
X1 + A − X2 A
X 100 Keterangan :
X1 : berat cawan kosong setelah dikeringkan g X2 : berat cawan + sampel setelah dikeringkan g
A : berat sampel g
2 Analisis kadar lemak AOAC 2005
Sampel sebesar 5 g W
1
dimasukkan ke dalam kertas saring pada kedua ujung bungkus ditutup dengan kapas bebas lemak dan selanjutnya dimasukkan ke
dalam selongsong lemak, kemudian sampel yang telah dibungkus dimasukkan ke dalam labu lemak yang sudah ditimbang berat tetapnya W
2
dan disambungkan dengan tabung Soxhlet. Selongsong lemak dimasukkan ke dalam ruang ekstraktor
tabung Soxhlet dan disiram dengan pelarut lemak n-heksana p.a. Kemudian dilakukan refluks selama 6 jam. Pelarut lemak yang ada dalam labu lemak
didestilasi hingga semua pelarut lemak menguap. Pada saat destilasi pelarut akan tertampung di ruang ekstraktor, pelarut dikeluarkan sehingga tidak kembali ke
dalam labu lemak, selanjunya labu lemak dikeringkan dalam oven pada suhu 105°C, setelah itu labu didinginkan dalam desikator sampai beratnya konstan
W
3
. Perhitungan kadar lemak adalah sebagai berikut : kadar lemak =
�3 − �2 �1
� 100 Keterangan :
W
1
: berat sampel g W
2
: berat labu lemak kosong g W
3
: berat labu lemak dengan lemak g kadar air =
3 Analisis kadar abu AOAC 2005
Cawan pengabuan dikeringkan di dalam oven selama 1 jam pada suhu 105°C, kemudian didinginkan selama 15 menit di dalam desikator dan ditimbang
hingga didapatkan berat yang konstan. Sampel sebanyak 5 g dimasukkan ke dalam cawan pengabuan dan dipijatkan di atas nyala api hingga tidak berasap lagi.
Setelah itu, dimasukkan ke dalam tanur pengabuan dengan suhu 600°C selama 1 jam, kemudian ditimbang hingga didapatkan berat yang konstan. Kadar abu
ditentukan dengan rumus : Berat abu g = berat sampel dan cawan akhir g
– berat cawan kosong g kadar abu =
berat abu g berat sampel awal
� 100
4 Analisis kadar protein SNI 01-2354.4-2006
Tahap yang dilakukan untuk analisis kadar protein terdiri dari tahap destruksi, destilasi, dan titrasi.
a Tahap destruksi
Sampel ditimbang sebanyak 0,5 g, kemudian dimasukkan ke dalam tabung Kjeldahl.
Satu buah tablet Kjeldahl dimasukkan ke dalam tabung tersebut dan ditambahkan 10 ml H
2
SO
4
. Tabung yang berisi larutan tersebut dimasukkan ke dalam alat pemanas dengan suhu 410˚C ditambahkan 10 ml air. Proses
destruksi dilakukan sampai warna larutan menjadi bening.
b Tahap destilasi
Proses destilasi terdiri dari 2 tahap yaitu : Tahap pertama adalah tahap persiapan alat yaitu kran air dibuka dan dilakukan
pengecekan alkali dan air dalam tangki, tabung, dan erlemenyer yang berisi akuades diletakkan pada tempatnya. Tombol power pada Kjeldahl system
ditekan dan dilanjutkan dengan penekanan tombol stream dan ditunggu beberapa saat sampai air di dalam tabung mendidih. Steam dimatikan
kemudian tabung Kjeldahl dan erlemenyer dikeluarkan dari alat Kjeldahl system.
Tahap kedua adalah tahap persiapan sampel yaitu tabung berisi sampel yang sudah didestruksi diletakkan ke dalam Kjeldahl system beserta erlemenyer
yang sudah diberi asam borat. Destilasi dilakukan sampai volume larutan dalam erlemenyer mencapai 200 ml.
c Tahap titrasi
Titrasi dilakukan dengan menggunakan HCl 0,1 N sampai warna larutan pada erlemenyer berubah warna menjadi pink, selanjutnya kadar protein dari
sampel dapat diperoleh dengan perhitungan menggunakan : Nitrogen
= HCl − ml blanko x 0,1 N HCl x 14,007
� � ℎ
� 100 kadar protein = Nitrogen x faktor konversi 6,25
3.4.7 Analisis aktivitas antioksidan dengan metode DPPH 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil Dityanawarman
