29
Ciocalteau. Kandungan total fenol dihitung sebagai Ekuivalen Asam Galat EAG dengan persamaan sebagai berikut :
Total kandungan fenol mgl EAG = Absm + C Abs adalah Absorbance A, m adalah kemiringan kurva standar asam galat dan
C adalah konstanta intersep.
3. Aktivitas antioksidan - DPPH radical-scavenging activity Sanchez-Moreno 2002 diacu dalam Vankar Srivastava 2010
Larutan kontrol dibuat dengan cara melarutkan 1,5 ml larutan DPPH dalam metanol dengan konsentrasi 0,001396 M dengan 0,5 ml metanol. Absorbansinya diukur
pada panjang gelombang 517 nm. Sebanyak 0,1 ml ekstrak bunga teleng diencerkan dengan masing-masing 0,9 ml larutan buffer pH 1, pH 4,5 dan pH 7. Kemudian masing-
masing sampel diambil sebanyak 0,1 ml dan ditambahkan dengan 1,5 ml larutan DPPH dan 0,4 ml metanol. Absorbansinya diukur pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas
antioksidan dalam satuan Mol DPPH100 ml ekstrak diperoleh dengan rumus sebagai berikut :
A
kontrol
A
sampel
A
kontrol
X mol DPPH X 10
6
X DF Dengan DF adalah faktor pengenceran, A
kontrol
adalah absorbansi larutan kontrol dan A
sampel
adalah absorbansi larutan sampel
4. Analisis Permukaan Tanggap
Untuk mempelajari pengaruh dari masing-masing faktor dalam bentuk permukaan respons permukaan tanggap data diolah dengan menggunakan software Design-
Expert® Versi 8.0.7.1. Pada prinsipnya uji statistika yang dilakukan berdasarkan kepada analisis sidik
ragam atau ANOVA. Taraf signifikan yang dipilih adalah 5 = 0,05. Software akan menghitung nilai p p-value dari masing-masing faktor dan interaksi antar faktor.
Jika nilainya lebih kecil daripada , maka pengaruh dari faktor tersebut adalah signifikan. Berdasarkan uji signifikansi tersebut, software akan memberikan model
persamaan regresi yang menghubungkan antara respons tertentu dengan semua faktor.
30
Pada rancangan Box-Behnken interaksi antar faktor yang dapat disertakan di dalam persamaan hanya terbatas sampai interaksi antara 2 faktor.
Berdasarkan model yang diusulkan untuk masing-masing respons software melakukan analisis untuk mendapatkan proses optimal sesuai dengan kriteria yang
dibuat. Pada penelitian ini kriteria proses optimal adalah yang mampu menghasilkan ekstrak dengan kadar antosianin, total fenol dan volum yang maksimal. Urutan tingkat
kepentingan importance yang perlu dipenuhi oleh proses yang optimal adalah kadar antosianin, total fenol dan volum.
Untuk menguji kesahihan dari model persamaan yang diusulkan, dilakukan verifikasi. Verifikasi dilakukan dengan cara melakukan 5 ulangan proses ekstraksi
dengan menggunakan parameter optimum. Jika nilai rata-rata dari kadar antosianin, total fenol dan volum berada di dalam rentang yang sesuai dengan model persamaan
regresi, maka model tersebut dinyatakan sahih.
