Dilakukan pada tiga konsentrasi dari asam galat yang berbeda yaitu konsentrasi kecil, sedang dan tinggi. Pengukuran panjang gelombang maksimum dilakukan
setelah Operating Time OT supaya didapatkan serapan yang maksimal.
Tabel I. Penentuan panjang gelombang maksimum asam galat
Konsentrasi asam galat µgml
Panjang gelombang
maximum hasil scanning
Panjang gelombang
maximum rata- rata
Panjang gelombang
maximum secara teoritis
50 761
748,6 760 nm
100 742
150 743
Dari tabel diatas setelah dilakukan penentuan panjang gelombang maksimum dari ketiga konsentrasi dari asam galat, yaitu 50, 100, dan 150 µgml
didapatkan rata-rata dari hasil panjang gelombang maksimum yaitu sebesar 748,6 nm.
F. Hasil Penetapan Kandungan Senyawa Fenolik Total
Penetapan kandungan senyawa fenolik total pada penelitian kali ini menggunakan metode Folin-Ciocalteu, dimana prinsipnya adalah dengan
melakukan reaksi oksidasi dan reduksi. Reagen Folin-Ciocalteu terdiri dari campuran fosmolibdat dan fosfotungstat yang akan mengalami reaksi reduksi
sehingga akan menghasilkan warna biru yang terbentuk sebagai hasil dari terbentuknya senyawa komples molybdenum blue. Senyawa fenolik akan
mengalami reaksi oksidasi pada suasana basa yang berasal dari larutan natrium karbonat sehingga akan menghasilkan ion fenolat yang akan selanjutnya ion inilah
yang akan diukur sebagai senyawa fenol yang dapat diukur pada panjang gelombang maksimum yang telah didapatkan, yaitu 748,6 nm.
Penelitian ini dilakukan penetapan kandungan fenolik total pada fraksi etil asetat ekstrak etanolik karena peneliti ingin mengetahui hubungan aktivitas
antiokisdan dengan kandungan fenolik totalnya. Senyawa fenolik yang terdapat di dalam tumbuhan termasuk salah satu senyawa golongan flavonoid yang
berpotensi sebagai antioksidan dengan mendonorkan ion hidrogennya pada gugus hidroksilnya ketika berekasi dengan senyawa radikal melalui mekanisme transfer
elektron sehingga proses oksidasi dapat dihambat dan menyebabkan aktivitas radikal bebas menjadi menurun.
Penentuan kandungan fenolik total pada sampel fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air dengan metode Folin-Ciocalteu ditujukkan untuk
mengetahui kandungan kandungan fenolik total yang terdapat dalam sampel. Kandungan fenolik total memiliki korelasi dengan aktivitas antioksidan, semakin
tinggi kandunagn fenolik total maka aktivitas antioksidannya akan semakin meningkat sedangkan bila kandungan fenolik total dalam sampel rendah maka
aktivitas antiokisdannya akan semakin rendah pula Anesini, Ferarro, and Filip, 2008, Oleh karena itu dilakukan penelitian mengenai kandungan fenolik total
dalam sampel fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air. Senyawa baku yang digunakan untuk menentukan kandungan fenolik
total mg ekivalen asam galat dilakukan dengan cara membuat kurva baku dengan menggunakan asam galat, digunakan asam galat sebagai baku karena senyawa ini
merupakan senyawa fenolik yang biasa dipakai sebagai penetapan kandungan fenolik total dengan metode Folin-Ciocalteu, selain itu asam galat mudah
didapatkan dan memiliki harga yang cukup murah .
COOH
OH OH
HO
Gambar 7. Struktur asam galat Tabel II. Tabel persamaan regresi linier dari baku asam galat
Replikasi Konsentrasi asam galat µgml
Absorbansi Persamaan regresi linier
1 50
0,313 A = 0,1096
B = 4,14.10
-3
r = 0,9990 y = 4,14.10
-3
x + 0,1906
75 0,420
100 0,535
125 0,619
150 0,731
2 49
0,329 A = 0,1038
B = 4,644.10
-3
r = 0,9996 y = 4,644.10
-3
x +0,1038
74 0,445
99 0,572
124 0,680
149 0,792
3 50
0,305 A = 0,0942
B = 4,268. 10
-3
r =0,9995 y = 4,268.10
-3
x +0,0942 75
0,412 100
0,528 125
0,631 150
0,729
Penetapan kandungan fenolik total didalam sampel diperoleh dengan memasukkan absorbansi dari sampel yang kemudian dihitung menggunakan
regresi linier dengan nilai r yang tertinggi yaitu pada replikasi 2 dengan nilai r 0,9996 dan persamaan regresi linier yang didapatkan adalah y = 4,644.10
-3
x + 0,1038.
Tabel III. Tabel kandungan senyawa fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air
Sampel µgml
Absorbansi Kandungan
fenolik µgml
Kandungan fenolik
total mg ekivalen
asam galat per gram
fraksi Rata-
rata mg
ekivalen asam
galat per
gram fraksi
SD mg
ekivalen asam
galat per
gram fraksi
500 0,401
63,996 6,390
6,463 0,066
500 0,407
65,288 6,520
510 0,411
66,149 6,480
Berdasarkan tabel dapat dilihat bahwa kandungan fenolik total mg ekivalen asam galat per gram fraksi yang didapatkan dengan memasukkan nilai
absorbansi dari masing-masing sampel ke dalam persamaan regresi linier didapatkan hasil perhitungan kandungan fenolik total untuk sampel 1 sebesar
6,390, sampel 2 sebesar 6,520 dan sampel 3 sebesar 6,480 dengan rata-rata dari ketiga sampel tersebut sebesar 6,463 dengan SD sebesar 0,066 sehingga dapat
dapat diketahui bahwa nilai rata-rata untuk kandungan senyawa fenolik total fraksi etil asetat ekstrak etanolik herba selada air adalah 6,463 ± 0,066 mg
ekivalen asam galat per gram fraksi .
G. Hasil Optimasi Penentuan Aktivitas Antioksidan 1. Penentuan
