37 yang terjadi pada kapang sehingga dapat diketahui kapang tersebut mampu
menggunakan substrat batubara.
3.3.11. Analisis Aktivitas Enzim
Sampel sebanyak 1 ml dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 4 ml KH
2
PO
4
buffer pH 7,6 60 mM. Reaksi dimulai dengan menambahkan 80µg FDA Fluorescen Diacetat. Setelah itu, Pengocokkan
dilakukan selama beberapa menit sampai terjadi reaksi yang ditandai dengan terbentuknya warna kuning akibat reaksi penambahan FDA. Sebanyak 4 ml aseton
ditambahkan ke dalam medium untuk menghentikan reaksi, lalu suspensi disaring dengan menggunakan kertas Whatman No.1 dan filtrat dimasukkan ke dalam
tabung lalu ditutup kertas parafilm dan disimpan di dalam lemari es selama 24 jam untuk menguapkan aseton. Nilai OD Optical Density filtrat yang sudah
dipersiapkan ditera dengan menggunakan spektrofotometer Genesys 2 pada panjang gelombang 490 nm Breeuwer, 1996.
3.3.12. Analisis Hasil Solubilisasi Batubara oleh Kapang Penicilium sp.
Dengan Menggunakan GC-MS
Supernatan dan pelarut dicampurkan dengan perbandingan 1:1. Pelarut yang digunakan adalah benzena : heksana : dietil eter dengan perbandingan 3:1:1.
Campuran tersebut dimasukkan ke dalam corong Buchner lalu diaduk sampai bercampur kemudian didiamkan beberapa saat sampai terbentuk fase atas dan
bawah. Fase atas dipakai untuk identifikasi jenis senyawa produk hasil solubilisasi
38 batubara dan menentukan kadarnya dengan menggunakan GC-MS Shimadzu.
Kolom yang digunakan adalah Dimetil polysiloxana dengan kondisi suhu kolom oven 50
C, suhu injeksi 280 C, laju alir 1,54 mlmenit, dan fase gerak gas
helium. Kontrol yang digunakan adalah medium MMSS yang ditambahkan serbuk batubara yang diiradiasi dan tidak diiradiasi Silva et al., 2007.
3.3.13. Analisis data
Penelitian ini dianalisis dengan menggunakan Rancangan Acak lengkap RAL yang dianalisis dengan Analisis Varian ANOVA satu arah untuk
mengetahui apakah ada perbedaan atau pengaruh pada tiap perlakuan. Uji Analisis Varian ini ANOVA dibantu dengan bantuan program SPSS 16.
Uji Anova dengan hipotesis : H
: Tidak ada perbedaan antara rata-rata nilai parameter yang diuji pada tiap dosis iradiasi.
H
1
: Ada perbedaan antara rata-rata nilai pada parameter yang diuji pada tiap dosis iradiasi.
Jika probabilitasnya signifikansinya 0,05 maka H diterima.
Jika probabilitasnya signifikansinya 0,05 maka H ditolak atau H
1
diterima.
39
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Kolonisasi Kapang Penicillium sp. Pada Substrat Batubara
