Sebanyak 1 gram NaOH ditimbang, dan dimasukkan kedalam beker gelas. Kemudian ditambahkan 70 mL metanol dan dimasukkan kedalam labu takar 1L
dan diencerkan sampai garis tanda.
k. Campuran metanol- asam asetat
Diukur 100 mL asam asetat glacial 99 ditambahkan 100 mL methanol 96 kemudian diaduk sampai homogen.
l. Campuran Amonia-metanol
Diukur 5 mL ammonia bj: 0,88 dan kemurnian 25 , dimasukkan kedalam labu takar 100 mL dan ditambahkan 95 mL metanol 96 dan dihomogenkan.
m. Eluen untuk zat warna tartrazine
Diukur 5 mL n - butanol dan 2 mL akuades dan 1 mL asam asetat glacial 99 kemudian dicampurkan pada bejana kromatografi dan dijenuhkan untuk beberapa
saat.
n. Eluen untuk zat warna Sunset Yellow
Ditimbang Natrium Sitrat sebanyak 2 gram dan ditambahkan dengan akuades sebanyak 85 mL kemudian larutan tersebut dimasukkan secara bersama-
sama dengan Larutan ammonia sebanyak 15 mL kedalam bejana kromatografi kemudian dijenuhkan untuk beberapa saat.
3.3.2. Penentuan waktu operasi . a. Tartrazine
Larutan standar Tartrazine 10 mgL diukur Absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 428 nm dengan variasi waktu
5,10,15,20,dan 25 menit.
b. Sunset yellow
Larutan standar Sunset Yellow 10 mgL diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 480 nm dengan variasi waktu
5,10,15,20,dan 25 menit
Universitas Sumatera Utara
3.3.3 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Larutan Standar a. Larutan Standar Tartrazine
1. Dipipet 10 mL larutan standar Tartrazine 100 mgL dan dimasukkan kedalam labu takar 100 mL, kemudian diencerkan dengan akuades
sampai garis tanda dan dihomogenkan larutan ini mengandung 10 mgL Tartrazine
2. Didiamkan selama 15 menit 3. Diukur absorbansi larutan dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 420,425,426,427,428,429, 430 dan 431 nm
b.Larutan Standar Sunset yellow
1. Dipipet 10 mL larutan standar Sunset Yellow 100 mgL dan dimasukkan kedalam labu takar 100 mL, kemudian diencerkan dengan akuades
sampai garis tanda dan dihomogenkan larutan ini mengandung 10 mgL Sunset Yellow
2. Didiamkan selama 15 menit
3. Diukur absorbansi larutan dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 450, 460,470,480,490,500 dan 510 nm.
l3. 3.4. Pembuatan Kurva Kalibrasi Larutan Standar a. Kurva Kalibrasi untuk tartrazine
1.Kedalam 5 buah labu takar 50 ml yang bersih dan kering secara terpisah dipipet dengan tepat 2,5; 5; 7,5; 10 ;12,5 mL larutan standar Tartrazine
100mgL dan diencerkan dengan akuades hingga sampai garis tanda larutan ini mengandung Tartrazine secara berturut-turut 5; 10 ; 15 ;
20 ; 25 mgL 2. Ditambahkan buffer asetat sebanyak 0,5 mL
3. Dihomogenkan dan didiamkan selama 15 menit 4. Diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang
428 nm pengukuran diulang sebanyak 3 kali dan dibuat kurva kalibrasi.
Universitas Sumatera Utara
b. Kurva Kalibrasi untuk Sunset Yellow
1.Kedalam 5 buah labu takar 50 ml yang bersih dan kering secara terpisah dipipet dengan tepat 2,5 ; 5; 7,5; 10; 12,5 mL larutan standar Sunset
Yellow 100 mgL dan diencerkan dengan akuades hingga sampai garis tanda larutan ini mengandung Sunset Yellow secara berturut-turut
5; 10; 15; 20; 25 mgL 2. Ditambahkan buffer asetat sebanyak 0,5 mL
3. Dihomogenkan dan didiamkan selama 15 menit 4. Diukur absorbansinya dengan spektrofotometer pada panjang gelombang
480 nm pengukuran diulang sebanyak 3 kali dan dibuat kurva kalibrasi.
3.3.5. Pemisahan Zat Warna dari Sampel
1. Dimasukkan 5 gram serbuk minuman kemasan kedalam beker gelas
2. Dilarutkan dengan 100 ml akuades
3. Dipanaskan sampai volumenya tinggal 50 mL
4. Diasamkan dengan penambahan asam asetat glasial pH = 4
5. Disaring dengan glass wool
6. Ditambahkan 1 gram serbuk poliamida kedalam filtrat
7. Dikocok larutan sampai supernatannya jernih
8. Dipindahkan bubur poliamida kedalam mikro kromatografi
yang telah disumbat dengan glass wool 9.
Dibiarkan cairannya mengalir sampai larutannya mengering 10.
Ditambahkan sebanyak 6 x 10 mL akua panas pada zat yang berada dalam kolom sambil diaduk dengan batang pengaduk setiap kali penambahan dan
dialirkan eluatnya 11.
Ditambahkan sebanyak 3 x 5 mL aseton pada zat yang berada dalam kolom sambil diaduk dengan batang pengaduk setiap kali penambahan dan dialirkan
eluatnya
Universitas Sumatera Utara
12. Ditambahkan sebanyak 2 x 5 ml metanol – NaOH pada zat yang berada
dalam kolom dan dialirkan eluatnya 13.
Diatur pH eluatnya dengan metanol-asam asetat hingga pH=5 14.
Ditambah 10 mL akuades kedalam larutan 15.
Ditambahkan sebanyak 0, 5 gram serbuk poliamida kedalam larutan 16.
Dikocok 17.
Dipindahkan bubur polamida kedalam mikro kolom kromatografi dan dialirkan larutannya sampai mengering
18. Ditambahkan akua panas pada zat yang berada dalam kolom sampai pH
eluatnya sama dengan pH air 19.
Didesorpsi warna dengan menambahkan 10 ml methanol- NaOH pada zat yang berada dalam kolom
20. Diasamkan eluat dengan asam asetat dan dipekatkan sampai hampir kering
dengan penangas air 21.
Diperoleh konsentrat. Dimana konsentrat ini digunakan untuk identifikasi zat warna
3.3.6. Analisa Kualitatif dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis
A . Tartrazine 1.
Dimasukkan konsentrat dan zat warna pembanding Tartrazine ke dalam 2 pipa kapiler yang berbeda.
2. Ditotolkan pada plat Silika Gel 60 GF 254 yang telah di buat garis batasnya
3. Dimasukkan plat Silika Gel 60 GF 254 ke dalam bejana kromatografi yang berisi eluen n - butanol asam asetat air dengan perbandingan 5:2:1
4. Digerakkan pelarut sampai sejauh 6,5 cm 5. Dikeluarkan plat Silika Gel 60 GF 254 dari bejana kromatografi
6. Dikeringkan 7. Diukur jarak tempuh konsentrat dan zat warna pembanding Tartrazine
8. Dihitung harga Rf nya masing - masing
Universitas Sumatera Utara
B. Sunset Yellow 1.
Dimasukkan konsentrat dan zat warna pembanding Sunset Yellow ke dalam 2 pipa kapiler yang berbeda.
2. Ditotolkan pada plat Silika Gel 60 GF 254 yang telah di buat garis batasnya
3. Dimasukkan plat Silika Gel 60 GF 254 ke dalam bejana kromatografi yang berisi eluen tri - Natrium Sitrat dihidrat – Air - Ammonia 2 gram: 85 mL:
15 mL 4. Digerakkan pelarut sampai sejauh 6,5 cm
5. Dikeluarkan plat Silika Gel 60 GF 254 dari bejana kromatografi 6. Dikeringkan
7. Diukur jarak tempuh konsentrat dan zat warna pembanding Sunset Yellow 8. Dihitung harga Rf nya masing – masing
3.3.7. Analisa Kuantitatif dengan Metode Spektrofotometri
a.Tartrazine
