dibandingkan BHT, asam askorbat, α-tokoferol, dan β-karoten dengan nilai IC
50
dari masing-masing ekstrak kasar bintang laut dengan berbagai pelarut. Hal ini dapat terjadi karena ekstrak bintang laut yang digunakan dalam pengujian ini
masih tergolong sebagai ekstrak kasar crude. Ekstrak kasar ini masih mengandung senyawa lain yang bukan merupakan senyawa antioksidan. Senyawa
lain tersebut ikut terekstrak dalam pelarut selama proses ekstraksi.
4.5 Analisis Kromatografi Lapis Tipis KLT
Pemisahan atau fraksinasi senyawa menggunakan teknik kromatografi lapis tipis KLT dilakukan untuk memisahkan senyawa yang ada pada ekstrak
kasar bintang laut yang mempunyai aktivitas antioksidan terbaik yaitu ekstrak bintang laut dengan pelarut etil asetat dengan IC
50
670 ppm. Aktivitas antioksidan terbaik dari pelarut etil asetat digunakan karena ekstrak tersebut diduga
mengandung senyawa aktif yang telah terpisah komponen aktifnya dengan menggunakan ekstraksi secara bertingkat. Sejumlah sampel ekstrak bintang laut
dilarutkan sesuai dengan jenis pelarut yang digunakan. Eluen terbaik yang digunakan
yaitu etil asetat:kloroform:asam format 9:1:0,05.
Fraksinasi menggunakan KLT dan pengamatan dengan sinar UV 254 nm menghasilkan 9
fraksi yang disajikan pada Gambar 14.
a b
Gambar 14 Hasil fraksinasi ekstrak kasar bintang laut menggunakan KLT a dideteksi pada lampu UV 254 nm b nilai Rf masing-masing
fraksi Cara yang digunakan dalam identifikasi noda-noda yang terbentuk pada
plat KLT dapat dilakukan dengan menggunakan lampu UV Ultraviolet dimana
Rf 1 = 0,06 Rf 3 = 0,21
Rf 4 = 0,34 Rf 2 = 0,14
Rf 5= 0,56 Rf 6 = 0,62
Rf 7 = 0,70 Rf 8 = 0,75
Rf 9 = 0,84
beberapa senyawa alam akan berflourosensi yaitu memancarkan cahaya tampak saat disinari dengan sinar UV atau mengabsorpsi sinar UV. Hal ini karena
senyawa alam memiliki gugus kromofor yang khas dapat memberi atau membentuk warna. Panjang sinar UV yang digunakan adalah 254 nm dan 366 nm.
Penampakan noda pada lampu UV 254 nm karena adanya daya interaksi antara sinar UV dengan indikator flouresensi yang terdapat pada plat KLT. Panjang
gelombang 254 nm digunakan untuk menampakkan eluen yang digunakan sebagai bercak gelap Hafiluddin 2011.
Hasil fraksinasi menggunakan kromatografi lapis tipis didapatkan 9 fraksi pada ekstrak kasar etil asetat, dengan eluen terbaik yang dihasilkan etil
asetat:kloroform:asam format 9:1:0,5. Hasil pengecekan terhadap fraksi tersebut, diduga bahwa masing-masing fraksi telah menunjukkan adanya 1 spot dengan Rf
yang berbeda. Hasil fraksinasi nilai Rf dari senyawa bintang laut dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4 Nillai Rf hasil fraksinasi ekstrak etil asetat bintang laut No
Fraksi Perhitungan
Nilai Rf
1 Rf1
0,5 8 0,06
2 Rf2
1,1 8 0,14
3 Rf3
1,7 8 0,21
4 Rf4
2,7 8 0,33
5 Rf5
4,5 8 0,56
6 Rf6
5 8 0,62
7 Rf7
5,6 8 0,70
8 Rf8
6 8 0,75
9 Rf9
6,7 8 0,84
Hasil pengujian terhadap fraksi tersebut memberikan dugaan bahwa masing-masing fraksi telah meunjukkan adanya 1 spot dengan Rf yang berbeda.
Pemisahan senyawa dengan eluen etil asetat:kloroform:asam format 9:1:0,05 menggunakan sinar UV λ 254 nm memiliki 9 spot dari hasil ekstrak kasar etil
asetat. Angka Rf berkisar 0,001-1,0, sedangkan hRf adalah angka Rf dikalikan faktor 100 Kusumaningtyas et al. 2008. Hasil KLT tersebut dijadikan acuan
nilai hRf yang memberikan hasil positif pada bioautogram karena pada uji bioautografi bercak senyawa yang sudah terpisah disemprot dengan pereaksi
DPPH untuk mengetahui fraksi yang mempunyai aktivitas antioksidan. Acuan bercak juga dapat dilakukan dengan melihat bentuk pita hasil bioautografi yang
telah memberikan hasil positif disesuaikan dengan hasil KLT yang telah menampilkan warna pada penyemprotan dengan uji Dragendorff.
Gambar 15a menunjukkan kromatogram hasil KLT setelah disemprot dengan DPPH. Gambar 15b terlihat bahwa pada noda ketujuh dalam ekstrak etil
asetat berubah warna menjadi kuning dengan latar belakang oranye menggunakan pereaksi Dragendorff setelah penyemprotan dengan DPPH. Perubahan warna pada
noda ekstrak etil asetat karena mampu meredam radikal bebas DPPH atau memiliki aktivitas antioksidan. Akan tetapi peredaman warna yang diberikan oleh
ekstrak etil asetat lebih kecil. Peredaman warna DPPH terjadi karena adanya senyawa yang dapat memberikan radikal hidrogen kepada radikal DPPH sehingga
tereduksi menjadi DPPH-H 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin.
a b
Gambar 15 Fraksinasi KLT dengan ekstrak etil asetat a warna DPPH b warna Dragendorff
Pereaksi Dragendorff adalah pereaksi yang khas untuk senyawa golongan alkaloid dengan membentuk warna merah-jingga. Terdapatnya bercak dengan
warna merah-jingga pada hasil elusi sampel Gambar 15b menandakan bahwa sampel mengandung senyawa golongan alkaloid. Berdasarkan hasil analisis
fitokimia dalam bintang laut Culcita sp. seperti yang terdapat dalam Tabel 1 bahwa ekstrak kasar bintang laut dengan pelarut etil asetat memiliki kandungan
senyawa alkaloid.
Sebagian alkaloid memiliki kemampuan antioksidan, contohnya indol alkaloid seperti strisin dan brusin bila dilihat dari strukturnya
dapat menghambat O
2
serta kafein dapat bertindak sebagai peredam hidroksil radikal. Senyawa berbasis nitrogen dari tumbuhan berpotensi menghambat
berbagai proses oksidatif. Senyawa radikal turunan dari senyawa amina memiliki tahap terminasi yang sangat lama, dengan demikian mampu menghentikan reaksi
rantai radikal secara efisien Marliana 2007. Senyawa fitokimia yang mengandung antioksidan yaitu steroid
triterpenoid adalah senyawa yang kerangka karbonnya berasal dari enam satuan isoprena dan secara biosintesis diturunkan dari hidrokarbon C30 asiklik, yaitu
skualen. Skualen merupakan antioksidan alami, tergolong senyawa triterpena, dan senyawa antara dalam biosintesis sterol dalam tumbuhan dan hewan. Skualen
merupakan antioksidan alami yang berfungsi sebagai anti radikal dan antioksidan Amarowicz 2009. Skualen merupakan komponen yang tergolong asam lemak
tidak jenuh rantai panjang dan mempunyai beberapa kegunaan yaitu sebagai anti tumor. Triterpena juga ditemukan bersifat proaktif dalam mencegah terjadinya
penyakit karsinogenik Huang et al. 2009. Conforti et al. 2005 menjelaskan bahwa efek dari antioksidan skualen dalam model peroksidasi lemak liposom
dengan IC
50
skualen sebesar 0,023 mgmL.
5 KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
